黑龙江省老爷岭南部东北梅花鹿栖息地适宜性评价及廊道构建

东北梅花鹿(Cervus nippon hortulorum)在我国主要分布区为黑龙江省老爷岭南部,开展栖息地适宜性评价和构建连接核心栖息地斑块的生态廊道是对该物种保护和恢复的基础。本研究于2018—2021年,通过大样方调查和相机监测的方法收集到763个梅花鹿出现位点,利用最大熵(Maximum entropy,MaxEnt)模型对该地区梅花鹿栖息地进行适宜性评价,基于最小成本路径(Least-cost path,LCP)分析方法识别并规划梅花鹿的迁移廊道。MaxEnt模型对环境变量预测的贡献率表明:河流、林间小道、常绿针叶林、居民区和公路对模型累积贡献率达77.3%,是影响梅花鹿分布的关键因子。栖息地适宜性分析结果表明,黑龙江省老爷岭南部梅花鹿适宜栖息地面积为1055.62 km^(2),占研究区域面积的27.38%。适宜栖息地主要集中分布于西南部的穆棱东北红豆杉国家级自然保护区和东部的东宁朝阳沟林场、绥阳三岔河和暖泉河林场,而研究区域中部适宜栖息地破碎化严重,且呈条带状分布。适宜栖息地面积的减少以及破碎化可能是影响野生梅花鹿种群恢复的关键因素。基于栖息地适宜性分析结果和梅花鹿种群分布情况共确定总面积为705.22 km^(2)的4块梅花鹿核心栖息地斑块,构建总长度为84.43 km、最小宽度为600 m的3条适宜梅花鹿迁移的生态廊道。本研究成果可为野生动物保护部门开展野生东北梅花鹿种群恢复提供科学依据,亦为推动生物多样性保护服务。

天山马鹿与东北梅花鹿杂交性能研究

该研究课题的目的是通过引进高产鹿茸基因的天山马鹿父本与东北梅花鹿母本进行杂交、回交及横交等方式,选育出高产鹿茸的杂交后代新品系,达到提高饲养梅花鹿养殖户及养殖企业经济运行的目的。试验研究自2012—2022年分别在贵州省普安县盘水镇莲花村、地瓜镇地瓜社区,贵州省黔西南州兴义市普子村、新桥村进行试验研究,提高10年的研究测定及对比,选育出相对稳定高产鹿茸的梅花鹿子代新品系。所选育的鹿茸新品系产鹿茸比东北梅花鹿每只每年提高0.4 kg,即新品系梅花鹿比东北梅花鹿鹿茸产量提高16%,按市场价3 800元/kg计算,每年每只可增收1 500余元。

阿尔泰马鹿与东北梅花鹿杂交F1代产茸性能、鹿茸营养成分和养殖效益分析

为了探寻生产性能更优的茸鹿杂交品种,试验以阿尔泰马鹿为父本(♂)、东北梅花鹿为母本(♀)进行种间杂交,比较分析阿尔泰马鹿与东北梅花鹿杂交F1代(阿东杂交F1代)和东北梅花鹿的鲜茸产量、鹿茸营养成分和养殖效益。结果表明:阿东杂交F1代头锯、二锯、三锯、四锯鲜茸产量(分别为3.56 kg、6.00 kg、8.13 kg、9.69 kg)较东北梅花鹿(分别为1.05 kg、2.80 kg、3.38 kg、3.88 kg)均显著提高(P<0.05),头锯至四锯鲜茸平均产量(6.85 kg)较东北梅花鹿(2.78 kg)显著提高(P<0.05)。阿东杂交F1代鹿茸中除甘氨酸和脯氨酸含量低于东北梅花鹿鹿茸外,其他15种测出的氨基酸含量及总氨基酸含量均高于东北梅花鹿鹿茸,其中总氨基酸含量(51.11%)较东北梅花鹿鹿茸(47.69%)高3.42百分点,赖氨酸含量(3.11%)较东北梅花鹿鹿茸(1.46%)高1.65百分点,亮氨酸含量(3.67%)较东北梅花鹿鹿茸(2.66%)高1.01百分点,组氨酸含量(1.13%)较东北梅花鹿鹿茸(0.68%)高0.45百分点。东北梅花鹿和阿东杂交F1代鹿茸中维生素A和维生素E含量没有明显差异。阿东杂交F1代鹿茸中钾、钠、铁含量分别为0.48%、0.68%、0.16%,高于东北梅花鹿鹿茸(分别为0.27%、0.58%、0.06%),镁、钙、磷含量分别为0.26%、12.40%、5.67%,低于东北梅花鹿鹿茸(分别为0.33%、15.60%、6.69%);阿东杂交F1代鹿茸的钙磷比为2.19∶1,略低于东北梅花鹿鹿茸的2.33∶1。虽然阿东杂交F1代饲养成本较东北梅花鹿提高了34.08%,但年均利润(5212.86元/只)较东北梅花鹿(1577.89元/只)提高了230.37%。说明以阿尔泰马鹿为父本、东北梅花鹿为母本杂交得到的阿东杂交F1代产茸性能和养殖效益均明显优于东北梅花鹿,鹿茸营养成分组成略优于东北梅花鹿。

东北梅花鹿转铁蛋白的多态性

用聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定了140头东北梅花鹿5个类型的转铁蛋白(Tf)的多态性。Tf有6种表型,受TfA1、TfA2、TfB1、TfB2、TfC1、TfC26个复等位基因控制。比较了梅花鹿5种类型间Tf基因频率,类型间有较大差异。利用同质度(H·I)、平均杂和性(-H)和有效基因数(Ne)比较5种类型间的遗传变异性,双阳型和伊通型变异性较大,其次是东丰型、抚松型和龙潭型。根据基因频率计算遗传距离,并用类平均法进行聚类分析,结果表明,东丰型与抚松型、双阳型与伊通型的亲缘关系较近,龙潭型与其它四种类型有较大的分化。

东北梅花鹿发情期血浆中LH、雌二醇含量变化

本文用放射免疫测定法测定了5头发情期东北梅花鹿血浆中促黄体素(LH)和17β-雌二醇的含量。所得结果:LH在发情前(0.288～0.321ng/ml血浆)与发情后(0.364～0.841ng/ml血浆)都处于低稳水平(P>0.05),但发情时出现非常显著的高峰(2.742ng/ml)(P<0.01);雌二醇在整个发情前后没有出现显著的高峰(P>0.05),仅在发情前约24小时发现一小峰(16.4±4.4pg/ml血浆),发情后12小时发现一小峰(24.9±6.1pg/ml血浆)。结果表明,东北梅花鹿发情期血浆LH、雌二醇含量的时相变化与其他已研究过的鹿种及一些反刍家畜基本一致。

东北梅花鹿卵泡发育的显微结构

为揭示雌性东北梅花鹿的生殖机理提供组织依据，利用光学显微镜观察7只成年东北梅花鹿卵巢的组织结构和卵泡的发育过程，同时利用目镜测微尺和显微照相技术分别对60个原始卵泡、60个初级卵泡、25个次级卵泡、34个三级卵泡和3个成熟卵泡及透明带厚度进行测量和拍照。结果表明，东北梅花鹿卵巢组织也是由生殖上皮、白膜、皮质和髓质构成；皮质部在卵巢的外周，但间质腺不发达；髓质位于皮质深层，分布有较多的血管。卵泡在发育过程中，各级卵母细胞和卵泡的直径差异较大，卵泡和卵母细胞的生长呈双向生长；透明带物质出现于3～4层卵泡细胞包围卵母细胞时；卵泡闭锁发生于卵泡生长的各个时期，主要表现为卵母细胞和卵泡细胞的形态变化，有两种形式；三级卵泡的闭锁过程分为早期、中期和后期3个阶段。

4种东北梅花鹿茸片总糖与水溶性蛋白的分析

为探讨东北梅花鹿茸片的内在质量差异,选取10支东北梅花鹿茸,切片时分腊片、粉片、纱片和骨片进行取样,对其总糖和水溶性蛋白进行分析。结果表明,东北梅花鹿茸腊片、粉片、纱片和骨片的水溶性蛋白含量分别为4.97%、3.95%、2.55%、1.59%,总糖含量分别为3.21%、2.21%、1.04%、0.49%,4种茸片之间差异极显著(P<0.01)。

东北梅花鹿初级卵母细胞的超微结构

研究东北梅花鹿初级卵母细胞发育的超微结构变化，目的是为探索东北梅花鹿初级卵母细胞的发育规律提供组织学和形态学依据。本研究于2003年和2004年的6月初到8月末取3只、9月中旬到10月初取4只，共计7只健康经产2～3胎的成年东北梅花鹿卵巢；卵巢经2．5％戊二醛固定液固定后，切取约1mm^3的卵巢皮质和直径0．5～1．5mm及1．5～3mm的卵泡作为电镜观察用材料；该材料经0．1MpH7．2的PBS漂洗、1％锇酸固定、不同浓度乙醇脱水后，再经Epon812和丙酮等量混合液浸透，最后用Epon812包埋制块，并用半薄切片机切成0．5～2μm半薄切片；再经亚甲基兰-天青Ⅱ染色后，在光镜下进行卵泡分类和卵母细胞定位；将经定位的材料用超薄切片机切成厚度为700～800A的切片，经醋酸铀和柠檬酸铅双重染色后，用透射电镜观察、记录并照相。观察时将卵泡依其直径大小、透明带的形成、卵泡腔的出现等分为原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡和三级卵泡4类。研究结果表明，在原始卵泡阶段，卵母细胞为较规则的圆形，质膜与卵泡细胞膜紧密相贴，有时形成桥粒，细胞器多分布于近核区，高尔基体不典型，线粒体多为圆形，嵴较少；在次级卵泡阶段，2～4层的卵泡细胞局部开始形成透明带，4层以上时形成薄的透明带，微绒毛斜伸人透明带内，方向不规律；在直径为0．5～1．5mm的三级卵泡阶段，卵母细胞的透明带增厚，各种细胞器在皮质区内数量较多，皮质区内高尔基体的数目增多，粗面内质网明显减少；在直径为1．5～3mm的三级卵泡阶段，卵母细胞的透明带继续加厚，微绒毛缩短变弯，开始从透明带退出，许多皮质颗粒开始排列在卵母细胞膜下。

不同生理时期东北梅花鹿血液SOD含量分析

本文旨在研究梅花鹿不同生理时期全血中的SOD含量变化,各生理时期鹿血的抗衰老作用是否存在差异。选用雄性梅花鹿不同生理时期的全血,经离心后用连苯三酚自氧化法测定3个时期溶血液、血细胞内容物、血浆和血细胞细胞膜中SOD含量并计算全血SOD含量。试验结果表明:全血SOD含量以生茸期最高((1 007.07±11.03)U.mL-1),且与配种期和生茸前期含量差异极显著(P<0.01);而配种期和生茸前期含量差异不显著(P>0.05)。结果提示SOD的变化与梅花鹿的生理时期有相关性。生茸期鹿血的SOD含量最高,提高了鹿血的药用价值,特别是抗衰老功效。但各个生理时期鹿血中又以溶血液的SOD含量为最高,因此可以把溶血液作为生产鹿血抗衰老酶产品的原料。

东北梅花鹿鹿茸尖端组织全长cDNA文库的构建

为克隆出与鹿茸生长发育相关基因的全长序列,采用SMART技术构建了东北梅花鹿鹿茸尖端组织的全长cDNA文库。用SVTotal RNAIsolation System试剂盒提取总RNA,以逆转录酶PowerScriptTM反转录合成第一链cDNA,然后通过LD-PCR合成并扩增ds cDNA。扩增产物经纯化、SfiⅠ酶切、过CHROMASPIN-400柱去除小片段后,连接到SfiⅠ消化过的pDNR-LIB质粒载体中,最后用电转化法将重组质粒转化到E.coliDH5α内得到原始文库。经测定,构建的原始文库约含有2.56×106个重组子,插入片段多在0.5～2 kb之间,平均插入片段长度约1.1 kb,重组效率接近100%。结果表明,东北梅花鹿鹿茸尖端组织的全长cDNA文库已构建成功。

东北梅花鹿、猪和牛血粉氨基酸、胆固醇、钙和磷含量的比较分析

选用氨基酸、胆固醇、钙、磷作为检测指标,对冻干法加工的东北梅花鹿血粉、猪血粉、牛血粉进行了比较分析,通过三者的内在质量差异,探讨评定东北梅花鹿血粉的质量依据。结果表明:东北梅花鹿血粉中的氨基酸总量显著高于其他2种动物血粉(P<0.05),胆固醇含量显著低于牛血粉(P<0.05)、猪血粉(P<0.05),因此,冻干法加工的鹿血粉是较理想的氨基酸含量高、胆固醇含量低的保健食品和药品。

东北梅花鹿茸不同部位游离氨基酸含量的比较分析

选用10支东北梅花鹿茸,每支茸从顶端到基部分腊片、粉片、血片和骨片4个部位分别取样,测定分析各部位游离氨基酸含量。结果表明:东北梅花鹿茸腊片、粉片、血片和骨片游离氨基酸总量分别为1.96%、1.47%、1.24%和0.62%,必需游离氨基酸总量分别为0.57%、0.40%、0.35%和0.19%,各部位之间差异极显著。

东北梅花鹿茸不同部位水解氨基酸含量的比较分析

对 10支东北梅花鹿茸作了不同部位水解氨基酸含量的比较分析 ,结果表明 ,水解氨基酸含量在东北梅花鹿茸腊片、粉片、血片和骨片各部位之间差异极显著 (P <0 0 1)。

CIDR和PMSG诱导东北梅花鹿同期发情的初步研究

应用阴道内孕酮释放装置 (CIDR)结合不同来源和不同剂量的PMSG处理 ,观察东北梅花鹿同期发情效果。 2 6只试验鹿分成 5组 ,将CIDR放置母鹿阴道内 15d后取出 ,肌注不同剂量 (10 0～ 5 0 0IU)孕马血清促性腺激素 ,放入带试情布的公鹿试情 ,持续观察 72h。结果表明 ,取出CIDR后试验鹿在 (33.3± 7.0 )h发情。其中含 10 0IUPMSG的“Folligon”处理的试验鹿同期发情率达 10 0 % ;国产PMSG处理的梅花鹿随着PMSG剂量的增加 ,发情率有增加的趋势 ,但各组间差异不显著 (χ2 检验P >0 .0 5 )。同时 ,不同剂量的PMSG处理没有显著影响CIDR取出后至发情时的平均时间长度。

东北梅花鹿精子超微结构的研究

本文应用电子显微镜对东北梅花鹿精子进行了超微结构观察,结果表明,东北梅花鹿精子的结构与其他哺乳动物精子结构相似,但有其特点,如精子顶体前部较为膨大,头部较长,中段和主段之间有较明显的环状结构等。

东北梅花鹿与天山马鹿种间杂交效果

为充分利用茸鹿的种间杂交优势，对东北梅花鹿与天山马鹿的种间杂交效果进行了试验观测。结果表明：花×马杂交F1代初角～三锯鲜茸产量分别是2．21kg、2．59kg、4．53kg、5．82kg，单产平均（初角～三锯）3．79kg；鲜茸质量性状杂种优势率分别为54．01％、5．93％、23．77％、-3．88％，杂种优势明显；花X马杂交F1较东北梅花鹿单产水平提高分别为426．19％、109．27％、311．82％、149．79％，鲜茸平均产量较母本1．15kg整体提高228．63％；花×马杂交F1的茸型分为花茸型、马茸型和中间型3种，花茸型占72％，马茸型占8％，中间型20％。研究证实，以东北梅花鹿为母本、天山马鹿为父本，利用杂种优势来提高东北梅花鹿的生产性能是可行的。并具有实效性。

东北梅花鹿的染色体组型C分带和G分带

东北梅花鹿(Cervus nippon hortulorum)是一种药用和观赏动物。其鹿茸是名贵的药材,长期以来被列为“东北三宝”(人参、貂皮、鹿茸)之一,并在国际市场上享有盛名。为了提高鹿茸产量,人们除在现有的种群内进行选育提高外,还利用东北梅花鹿和东北马鹿(Cervuse canadensis xanthopygus)进行种间杂交,力求从根本上改良现有的种群。一般认为哺乳动物种间杂交的F_(1)不育或异型配子不育(吴常信1975)。但目前已知东北梅花鹿与东北马鹿杂交,包括正反交的F_(1)两性都能育。为弄清其遗传实质,我们开展了对东北梅花鹿、东北马鹿及其F_(1)的染色体组型、C分带和G分带的分析。现将已完成的东北梅花鹿的分析结果报告如下.

东北梅花鹿产茸性能分析

通过对东北梅花鹿产茸性能的分析 ,证明长沙市养鹿试验场东北梅花鹿产茸量基本保持在一定的水平上 ;产茸量与鹿年龄的大小存在曲线回归关系 ;头杠茸的重量与再生茸的重量不相关 ;体重与茸产量存在着很强的相关性。这些指标可为华南地区发展养鹿业提供一定的参考依据。

东北梅花鹿染色体限制性内切酶显带

采用限制性内切酶HaeⅢ、HindⅢ分别处理梅花鹿中期染色体标本,发现HaeⅢ处理标本21h左右,显出类似G带、C带带型,第1、4、11、18、27、28、31对染色体的结构异染色质区对HaeⅢ敏感而浅染,而HindⅢ处理标本18h左右能诱导梅花鹿中期染色体显出类似G带、C带,第2、6、15、18、29、32对染色体的结构异染色质区对HindⅢ较敏感而浅染,性染色体Y对HaeⅢ敏感呈浅染,性染色体X对HindⅢ敏感呈浅染。表明东北梅花鹿12对常染色体和两条性染色体结构异染色质在这两种酶处理时表现出异质性。

F_1代鹿与其亲本梅花鹿、东北马鹿茸的化学成分比较

对梅花鹿母与东北马鹿公杂交F_1鹿(简称花·马F_1)、东北马鹿母与天山马鹿公杂交F_1鹿(简称马·马F_1)与其亲本梅花鹿、东北马鹿茸化学成分进行了比较分析。试验表明,花·马F_1鹿茸中常规成分、生化成分含量均与双亲相近。马·马F_1鹿茸粗蛋白质、能量、必需氮基酸、水溶性物质及铁、锰、钴等微量元素含量明显高于母本东北马鹿茸,但胆固醇含量则低于母本。