水杨酸作用下东北红豆杉细胞的二维凝胶电泳分析

东北红豆杉悬浮培养体系中加入适量浓度的水杨酸 ,染色结果表明 ,水杨酸可以增加细胞膜通透性 ,并可诱导部分细胞发生核凝集或核碎裂。提取细胞染色体DNA进行琼脂糖凝胶电泳 ,发现染色体DNA发生了部分降解。应用蛋白质双向凝胶电泳技术 ,研究了水杨酸处理后东北红豆杉细胞发生应激反应过程中蛋白质的表达情况 ,分析了处理细胞与正常细胞的蛋白质组差异 ,发现在水杨酸处理 4 8h后的样品中有 7个蛋白质差异点 ,而且有6个蛋白点仅在对照中检测到。结果表明 ,外加水杨酸改变了东北红豆杉细胞的基因表达 ,抑制部分蛋白合成的同时也合成了部分新蛋白质 ,这些蛋白可能与水杨酸的作用有关。

DMSO对悬浮培养的东北红豆杉细胞凋亡和紫杉醇合成的影响

研究了不同浓度的DMSO对悬浮培养的东北红豆杉 (Taxuscuspidata)细胞的增殖能力、细胞活性以及紫杉醇合成和释放等方面的影响 ,同时应用荧光指示剂双染法检测了细胞凋亡的发生情况。结果显示2 %的DMSO处理能显著降低细胞活性 ,抑制细胞的增殖能力 ,使细胞核内DNA含量减少 ,培养中、后期在荧光显微镜下可见部分细胞核出现典型的凋亡形态 ,同时伴有紫杉醇产量的明显增加 ;对照组及 1%以下浓度组未出现上述改变。结果表明一定浓度的DMSO能诱导细胞凋亡 。

Ce^(4+)对东北红豆杉细胞有丝分裂的影响

以悬浮培养的东北红豆杉细胞为材料,研究了不同浓度的Ce4+在不同处理时间对细胞有丝分裂的影响。结果显示,Ce4+能诱发东北红豆杉细胞多种异常有丝分裂,在浓度为0.5mmol/L、处理时间为5h时,即开始出现异常有丝分裂现象,而且细胞有丝分裂指数(MI)比对照组明显降低(P<0.05),表明细胞有丝分裂受到抑制,Ce4+对细胞有丝分裂过程有显著影响。Ce4+具有一定遗传毒性。

微囊固定化东北红豆杉细胞的生长与代谢

通过对海藻酸钠-壳聚糖液芯、固芯胶囊包埋的东北红豆杉细胞生长与代谢的比较研究,发现液芯胶囊包埋的细胞存活率大于固芯胶囊,对糖类等营养物质的吸收好于固芯胶囊,更有利于包埋细胞的初生代谢. 同时发现,海藻酸钠-壳聚糖固芯、液芯胶囊包埋均利于次级代谢产物等胞内物质向胞外释放,尤其是液芯胶囊的促释作用更为明显,且其酚类物质合成与分泌增多. 结果表明,液芯胶囊包埋植物细胞是一种较为理想的微囊固定化植物细胞的方法.

铈诱导细胞凋亡过程中O_2^-·对ERK-like激酶的调控

对1mmol·L-1Ce4+诱导东北红豆杉细胞凋亡中ERKlike和O-2·的变化规律及其信号调控进行了分析和研究.结果表明,一相对分子质量约为46×103的ERKlike激酶在诱导5min时被快速激活,60min时达到对照水平的2.1倍,并在120min内持续激活,诱导240min后ERKlike下调到对照水平的43%,到48h下调到对照的25%.Ce4+诱导O-2·迅速产生,并有两次迸发峰分别出现在3.7～4h和7h.在Ce4+诱导前2h分别加入5μmol·L-1和10μmol·L-1DPI有效抑制了O-2·迸发,并且显著提高和延长了ERKlike磷酸化水平,诱导60min时ERKlike达到对照水平的7.3和18.8倍,240min时达到对照的9.6和10.5倍.这些结果揭示ERKlike的激活和O-2·迸发在诱导早期应是相互独立的信号事件,诱导约4h后O-2·大量迸发对ERKlike的激活有明显信号负调控作用,并通过ERKlike的下调介导了凋亡信号传递.