恙虫病东方体Karp株56kD表膜蛋白基因的表达及免疫诊断应用研究

目的实现恙虫病东方体56kD表膜蛋白的原核表达并评价重组蛋白作为抗原的免疫诊断价值。方法亚克隆技术构建原核表达质粒载体pGEX-Sta56,转化宿主菌BL21(DE3),IPTG诱导表达GST-Sta56融合蛋白,亲和层析纯化融合蛋白,应用ELISA以评价其免疫诊断价值。结果pGEX-Sta56经测序鉴定Sta56基因以正确的表达框架连入载体,经过诱导表达得到正确大小的融合蛋白,应用纯化的GST-Sta56的ELISA检测结果与全细胞抗原有很高线性相关性,在小鼠血清检测中敏感性,特异性和准确性分别大于90%,70%和80%。结论成功表达重组的56kD表膜蛋白并可能替代传统的全细胞纯化蛋白,为建立快速、敏感和特异的免疫学诊断奠定了基础。

恙虫病东方体Karp株47kDa蛋白成熟肽的克隆与表达

目的 :克隆表达恙虫病东方体 (Orientiatsutsugamushi,Ot)Karp株 4 7kDa表面蛋白的成熟肽 ,探索其作为疫苗及诊断抗原的可能性。方法 :采用PCR方法 ,从 OtKarp株菌种基因组DNA中扩增出 4 7kDa成熟蛋白基因片段 ,将该片段克隆于原核表达载体pQE30 ,构建成重组质粒pQE30 4 7,转化大肠杆菌 (E coli) ,经IPTG诱导表达 ,SDS_PAGE和Western_blotting检测目的蛋白的表达。结果 :①获得长约 12 72bp的OtKarp株 4 7kDa外膜蛋白基因 ;②SDS_PAGE和免疫印迹显示该重组质粒转化的E coli有一相对分子量约为 4 3× 10 4 的独特蛋白带 ;③重组表达质粒序列分析结果显示pQE30 4 7中插入的基因片段的序列与已报告的OtKarp株 4 7kDa外膜蛋白基因序列基本一致 ,并与已知序列相同。结论 :获得了OtKarp 4 7kDa蛋白基因 ,并在E coli中实现了表达 。

恙虫病东方体Karp株主要外膜蛋白基因的克隆与表达

目的 :表达恙虫病东方体 (Orientiatsutsugamushi)Karp株 5 6 0 0 0表面蛋白 ,探索其作为诊断抗原的可能性。方法 :采用PCR方法 ,从Ot.Karp株菌种基因组DNA中扩增出 5 6 0 0 0成熟蛋白基因片段 ,将该片段克隆于原核表达载体pQE30 ,构建重组质粒pQE30 / 5 6 ,转化大肠杆菌 ,经IPTG诱导表达、SDS_PAGE电泳和免疫印迹检测目的蛋白的表达。结果 :(1)获得长约 15 0 0bp的Ot.Karp株 5 6 0 0 0外膜蛋白基因 ;(2 )SDS_PAGE电泳和免疫印迹显示该重组质粒转化的大肠杆菌有一相对分子质量约为 5 6 0 0 0的独特蛋白带 ;(3)表达后菌体超声破碎后 ,目的蛋白主要以包涵体形式存在 ;(4)重组表达质粒序列分析结果显示 ,pQE30 / 5 6中插入的基因片段的序列与已报道的Ot.Karp株5 6 0 0 0外膜蛋白基因序列基本一致。结论 :获得了Ot.Karp 5 6 0 0 0蛋白基因 ,并在大肠杆菌中实现了表达 ,表达的重组蛋白具有免疫反应性。

立克次氏体传染病

恙虫病东方体Karp株核酸疫苗的构建及其免疫功能初步研究，恙虫病的临床观察与护理，恙虫病并发多脏器损害45例分析，罗红霉素治疗小儿恙虫病疗效观察。

立克次氏体传染病

恙虫病东方体Karp株相对分子质量为47蛋白基因的克隆与表达;实验室保存的恙虫病东方体Karp株与福建省分离株的sta 56基因的序列分析；我国近十年斑疹伤寒疫情概况及分析。