东方弧菌SOD的分离纯化和特性研究

从东方弧菌５１８菌株的细胞中提取超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）。先以硫酸铵分级沉淀取得粗酶，再经ＤＥ－５２ＤＥＡＥ－纤维素柱层析，并以５－５００ｍｍｏｌ／Ｌ磷酸钾缓冲液作线性梯度洗脱，再次分级沉淀而获得纯化的ＳＯＤ，呈棕黄色。其分子量为３８０００道尔顿，为二聚体，亚基分子量为１８５００道尔顿。原子吸收光谱测定其金属辅基为Ｆｅ＋＋＋。该酶反应最适温度为２５℃，室温下水溶液中很易失活。紫外及可见光吸收光谱测定结果表明在２５７ｎｍ处有最大吸收峰，荧光发射光谱在３３９ｎｍ处有最大发射峰。

东方弧菌的无细胞系统的发光:一种由长链脂肪醛启动的生物发光

采用常规的硫酸铵分级沉淀和DEAE-纤维素柱层析从东方弧菌(Vibrio orientalis)518菌株的细胞裂解液中分离到一种组分,仅需长链脂肪醛就可以启动发光。对其反应的动力学、生物发光光谱、荧光激发光谱、荧光发射光谱和吸收光谱等作了研究。其生物发光的衰减为一级反应,速度常数K=0.149秒。生物发光光谱与发光细菌的活体发光光谱一致。荧光光谱和吸收光谱的特征表明,该组分与细菌发光反应的中间产物Ⅱ相似。用本菌株的COS制备物作对比,表明该组分确与COS的发光反应所需的条件不同。

东方弧菌荧光酶的分离纯化和性质研究

东方弧菌518菌株于20℃摆床液体培养十六小时,菌数达最大,菌体内荧光素酶含量也较高,此时收获菌体.用超声波振动破碎细胞从中提取荧光酶粗液,经DEAE-纤维索和DEAE-sephadex柱层析得到纯化的酶.用葡聚糖凝胶层析法测得该酶分子量为87000道尔顿,用SDS-PAGE法测得该酶两个亚基分子量分别为44000(α)和41000(β). 该酶在pH6.8、18℃时活性最佳,对热不稳定.以FMNH_2为底物催化发光反应,最高发射波长为490nm左右.其光谱特征与文献报道的东方孤菌整体发光的光谱相一致.