东方马脑脊髓炎病毒TaqMan MGB荧光定量RT-PCR检测方法的建立

本试验通过RT-PCR从东方马脑脊髓炎病毒（EEEV）中扩增得到128bp的特异性保守序列,将其克隆到pMD20-T载体中,并进行体外转录,制备标准品cRNA。以10倍系列稀释的cRNA为模板,进行TaqMan MGB荧光定量RT-PCR扩增并制作标准曲线,建立了EEEV TaqMan MGB荧光定量RT-PCR的检测方法。进一步对建立的方法进行了特异性和敏感性试验。结果表明,建立的TaqMan MGB荧光定量RT-PCR最低可检测10拷贝/μL的cRNA;且与阴性对照及马鼻肺炎病毒（EHV-1）、马动脉炎病毒（EAV）、马流感病毒（EIV,H3N8）、西尼罗病毒（WNV）、西方马脑脊髓炎病毒（WEEV）和日本马脑炎病毒（JEV）均不发生交叉反应。所制作的标准曲线在1.0×10^1~1.0×10^6拷贝/μL浓度范围内有极好的线性关系,相关系数为0.998,标准曲线方程式为y=40-3.35logx;与常规RT-PCR相比,该方法更加快速,特异性和敏感性更高,灵敏度为常规RT-PCR方法的100倍。试验结果表明,建立了一种快速、高效、特异、敏感的EEEV TaqMan MGB荧光定量RT-PCR检测方法。

东方马脑脊髓炎病毒PCR-DHPLC检测方法的建立与初步应用

为建立检测东方马脑脊髓炎病毒(EEEV)的方法,本研究利用PCR结合变性高效液相色谱技术(DHPLC),针对EEEV NS1基因,设计特异性引物,通过优化反应条件,对核酸扩增产物采用DHPLC进行检测分析,核酸扩增产物形成DHPLC特征峰图,建立了EEEV的PCR-DHPLC快速检测方法。结果显示该方法与其他6种常见马病病毒均无交叉反应,未检测到其他马病病毒的阳性吸收峰,具有较强的特异性;对梯度稀释的标准阳性模板的检测限可达到10拷贝/μL;利用本研究建立的方法与荧光定量RT-PCR对30份临床样品进行检测,两者符合率达100%。本研究建立的PCR-DHPLC法具有特异、敏感、快速、重复性好等优点,可以用于EEE的病原学诊断及流行病学调查。

东方马脑炎病毒研究进展

东方马脑炎病毒研究进展李其平（新疆地方病防治研究所，乌鲁木齐８３０００２）东方马脑脊髓炎（Ｅａｓｔｅｒｎｅｑｕｉｎｅｅｎ－ｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓＥＥＥ简称：东马）是一种急性病毒性传染病，人畜共患自然疫源性疾病。主要发生于美国东部以及中美和南美...