汉黄芩素调节磷脂酰肌醇3激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶/核因子κB信号通路对慢性阻塞性肺疾病大鼠辅助性T细胞17/调节性T细胞平衡的影响

目的探讨汉黄芩素(Wog)调节磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)/核因子κB(NF-κB)信号通路对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)平衡的影响。方法2022年8-12月,大鼠采用随机数字表法分为Model组、低剂量Wog组(Wog-L组,50 mg/kg)、高剂量Wog组(Wog-H组,100 mg/kg)、阳性药物氨茶碱组(Ami组,2.3 mg/kg)、IGF-1(PI3K激活剂)组(1.33 mg/kg)、Wog-H+IGF-1组(100 mg/kg+1.33 mg/kg)、对照组(CK组),每组12只。除CK组外,其他组大鼠均需利用烟熏法联合气管滴注脂多糖(LPS)的方法构建COPD模型,建模成功24 h后,进行给药处理,每天1次给药,持续4周。检测呼气峰流量(PEF)、每分钟通气量(MV)、吸气峰流量(PIF);流式细胞术检测外周血中Th17/Treg;HE染色检测肺组织病理;酶联免疫吸附法检测大鼠肺组织中白细胞介素(IL)-17、IL-10水平;蛋白质印迹法检测肺组织中维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)、叉头框蛋白P3(Foxp3)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、磷酸化Akt(p-Akt)、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)蛋白。结果与CK组比较,Model组大鼠PEF(12.56±0.47比8.72±0.39)、PIF(9.35±0.32比7.24±0.17)、MV(132.26±5.78比96.63±3.28)、Treg(31.18±2.62比15.52±1.01)比例、IL-10(23.35±1.16比8.85±0.27)明显降低(均P<0.05);Th17(3.14±0.13比18.86±1.67)比例、Th17/Treg(0.10±0.01比1.22±0.11)、肺泡间隔(33.36±1.48比49.78±1.73)、气道炎症评分(0比4.56±0.23)及IL-17(75.83±3.60比185.56±8.62)水平明显升高(均P<0.05)。与Model组比较,Wog-L组、Wog-H组PEF(9.66±0.40,11.49±0.51)、PIF(8.28±0.19,9.03±0.22)、MV(105.54±4.11,126.67±5.72)、Treg(19.93±1.18,27.73±2.05)比例、IL-10(11.56±0.33,20.72±0.59)水平明显升高(均P<0.05);Th17(3.14±0.13比18.86±1.67)比例、Th17/Treg(0.10±0.01比1.22±0.11)、肺泡间隔(43.45±1.26,35.78±1.12)、气道炎症评分(3.75±0.17,0.86±0.07)、IL-17(162.27±7.14,103.35±4.33)水平明显降低(均P<0.05)。与CK组比较,Model组大鼠RORγt(0.15±0.01比1.34±0.11)、p-PI3K(0.22±0.01比0.86±0.07)、p-Akt(0.18±0.01比0.75±0.06)、p-NF-κB p65(0.11±0.01比0.69±0.06)蛋白表达升高,Foxp3(1.45±0.27比0.35±0.02)蛋白表达降低(均P<0.05)。与Model组相比,Wog-L组、Wog-H组RORγt(1.08±0.10,0.36±0.02)、p-PI3K(0.71±0.06,0.35±0.03)、p-Akt(0.62±0.06,0.28±0.02)、p-NF-κB p65(0.52±0.05,0.26±0.02)蛋白表达明显降低,Foxp3(0.57±0.04,1.13±0.09)蛋白表达明显升高(均P<0.05)。Wog-H组与Ami组大鼠上述各指标水平近似,均差异无统计学意义(P>0.05)。IGF-1逆转了高剂量Wog对COPD大鼠Th17/Treg的影响。结论Wog促进COPD大鼠Th17/Treg平衡的机制可能与下调PI3K/Akt/NF-κB通路有关。

磷脂酰肌醇3激酶/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶/核转录因子κB信号通路对细胞凋亡影响的研究进展

磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(Akt)/核转录因子κB(NF-κB)信号通路是有核细胞内重要的传导通路之一,在调节细胞增殖、凋亡中起着重要作用。大量研究证明PI3K/Akt/NF-κB信号通路的激活可以影响细胞凋亡。本文就PI3K/Akt/NF-κB信号通路对细胞凋亡影响作用进行综述。

丝氨酸/苏氨酸激酶15和信号转导转录激活因子3在结肠癌中的表达及相关性研究

目的探讨结肠癌中丝氨酸/苏氨酸激酶15和信号转导转录激活因子3表达及其相关性研究。方法结肠癌病例样本共计48例,采用逆转录实时定量聚合酶链反应RT-PCR的方法,检测其中丝氨酸/苏氨酸激酶15和信号转导转录激活因子3的相对表达量,同时分析结肠癌与其表达量的关系。结果结肠癌中丝氨酸/苏氨酸激酶15和信号转导转录激活因子3的相对表达量与结肠癌存在相关性(P<0.05);丝氨酸/苏氨酸激酶15和信号转导转录激活因子3与结肠癌转移显著相关(P<0.05);丝氨酸/苏氨酸激酶15表达信号转导转录激活因子3表达与结肠癌发病及淋巴转移的具有相关性。结论丝氨酸/苏氨酸激酶15与信号转导转录激活因子3表达量在结肠癌中具有相关性,丝氨酸/苏氨酸激酶15和信号转导转录激活因子3相对表达量与结肠癌的预后显著相关。

糖尿病大鼠骨骼肌组织丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶B的表达及其与炎性细胞因子的关系

目的探讨丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶B（PKB）在糖尿病大鼠骨骼肌中的表达及其与炎性细胞因子肿瘤坏死因子仪（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）的关系。方法将清洁液Wistar大鼠完全随机分为实验组与对照组，各8只。实验组给予高脂、高糖饮食8周后腹腔内注射小剂量链脲佐菌素（30mg／kg），对照组喂养标准大鼠饲料。第13周末处死大鼠，取各组大鼠股四头肌用免疫组织化学方法检测PKB、TNF-α及IL-6的蛋白表达，并分析PKB表达与TNFα、IL-6表达的相关性。结果TNF-α在对照组骨骼肌上表达很少，几乎为0；实验组阳性细胞率为（3．8±1．4）％，2组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。IL-6在对照组大鼠骨骼肌上表达率为（2．0±0．8）％；实验组阳性细胞率（5．8±0．7）％，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。PKB在对照组大鼠骨骼肌上阳性率为（9．0±0．9）％；实验组PKB表达减少，阳性细胞率为（2．8±0．8）％，与对照组比较表达明显减少（P〈0．05）。TNF-α、IL-6表达与PKB的表达呈负相关（r=-0．776，r=-0．698，P〈0．05）。结论PKB信号传导系统可以抑制糖尿病大鼠骨骼肌中TNF-α和IL-6的释放。

受体酪氨酸激酶Mer对高糖环境培养的大鼠雪旺细胞系RSC96增殖调控作用观察

目的观察受体酪氨酸激酶Mer(MER tyrosine kinase,Mertk)在高糖环境培养条件下的大鼠雪旺细胞系RSC96增殖的调控作用。方法取RSC96分为一、二、三、四、五组,分别置于含25(正常葡萄糖浓度)、50、75、100及125 mmol/L葡萄糖的培养基中培养,培养48 h时采用Western Blotting法检测各组细胞Mertk,筛选Mertk蛋白相对表达量最高浓度为后续研究的高糖浓度。取RSC96细胞先饥饿处理4 h,置入含100 mmol/L的葡萄糖培养基中,分别于培养0、24、36、48、60 h时取各组细胞,采用Western Blotting法检测各组细胞Mertk,最终筛选Mertk蛋白相对表达量高的时间为后续研究培养时间。取RSC96细胞,分为对照组、高糖组、高糖敲降组及敲降组:高糖组细胞饥饿处理4 h,置于含100 mmol/L葡萄糖的培养基中培养;高糖敲降组细胞饥饿处理4 h,置于含100 mmol/L葡萄糖的培养基中,后加入5μL的敲降Mertk基因表达siRNA溶液;敲降组细胞饥饿处理4 h,加入5μL的敲降Mertk基因表达siRNA溶液;对照组细胞用正常培养基培养。培养48 h时取各组细胞,采用Edu法测算各组细胞增殖活力,采用Western Blotting法检测各组细胞Mertk、磷酸化核转录因子κB、P65及肿瘤坏死因子α(TNF-α)。结果与一组相比,四、五组细胞Mertk蛋白相对表达量高(P均<0.05);与培养0 h相比,培养48、60 h时RSC96细胞Mertk相对表达量高(P均<0.05)。与对照组相比,高糖组细胞增殖活力低(P<0.05),敲降组细胞增殖活力高(P<0.05);与对照组相比,高糖敲降组细胞P65、TNF-α相对表达量高(P均<0.05),敲降组细胞Mertk相对表达量低、P65及TNF-α相对表达量高(P均<0.05),高糖组细胞Mertk、P65及TNF-α相对表达量高(P均<0.05)。结论敲降Mertk基因表达的高糖环境培养RSC96细胞的增殖能力高,细胞P65、TNF-α表达高。Mertk可能通过促进细胞P65、TNF-α表达,促进高糖环境培养RSC96细胞的增殖。

酪氨酸激酶2/信号转导与转录激活因子3通路介导机械性软骨细胞凋亡

目的探索酪氨酸激酶2(JAK2)/信号转导与转录激活因子3(STAT3)信号通路在机械性软骨细胞凋亡过程中的作用机制。方法使用大鼠软骨细胞,分为对照组和机械性损伤组,干预后行膜联蛋白V(Annexin V)-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙锭(PI)双染色以确定细胞凋亡程度,4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色现实细胞核形态,蛋白质印迹法(Western blot)检测半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达,以及JAK2蛋白、STAT3蛋白的磷酸化/非磷酸化激活比例。第二项实验中,将软骨细胞分组为机械性损伤组,以及机械性损伤+AG490组,分别检测软骨细胞凋亡比例、实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)/bcl-2相关X蛋白(bax)基因的表达比值,Western blot检测Caspase-3蛋白表达和核因子-κB(NF-κB)p65磷酸化激活比例,组间比较采用非配对t检验。结果体外培养的软骨细胞凋亡检测中,机械性损伤组的凋亡比例高于对照组[(37.5±7.9)%比(8.4±6.8)%,t=4.815,P<0.05],DAPI染色证实细胞核凋亡性改变,同时,机械性损伤组的Caspase-3蛋白表达高于对照组(倍数为14.2±7.3,t=8.390,P<0.05)。同时,机械性损伤组的JAK2蛋白及STAT3蛋白的磷酸化激活比例均高于对照组(倍数分别为2.2±1.1和1.6±0.4,t=2.886、4.652,P<0.05)。第二项实验中,机械性损伤+AG490组的凋亡比例减低显著低于机械性损伤组[减低至(11.9±3.2)%,t=5.144,P<0.05]。机械性损伤组的bcl-2/bax的基因表达比值高于对照组(比值为0.31±0.07,t=2.789,P<0.05)和机械性损伤+AG490组(比值为0.61±0.12,t=3.690,P<0.05)。机械性损伤+AG490组的Caspase-3蛋白低于机械性损伤组[变化倍数为(1.7±1.2)倍,t=8.273,P<0.05]。此时,机械性损伤组的NF-κB p65蛋白的磷酸化比例高于对照组[变化倍数为(6.7±1.4)倍,t=5.098,P<0.05]和机械性损伤+AG490组[变化倍数为(3.3±0.2)倍,t=2.875,P<0.05]。结论JAK2/STAT3信号通路介导了机械性软骨细胞凋亡,JAK2特异性抑制剂AG490可通过抑制NF-κB p65活化调控凋亡反应。

去卵巢2型糖尿病大鼠骨骼肌磷酯酰肌醇-3-激酶、丝氨酸／苏氨酸激酶2及核转录因子-kappa B的表达

目的探讨去卵巢2型糖尿病大鼠骨骼肌磷酯酰肌醇-3-激酶（PI3K）／丝氨酸／苏氨酸激酶2（Akt2）（PI3K／Akt2）信号通路相关因子及核转录因子-kappaB（NF—κB）表达的意义。方法29只雌性Wistar大鼠按随机数字表法分为对照组（NS，n=9），2型糖尿病组（DS，n=10），2型糖尿病去卵巢组（DOVX，n=10），体重180～200g。NS组大鼠正常饮食，DS和DOVX组大鼠给予高糖高脂饮食8周后，予腹腔注射链脲佐菌素30mg／kg，糖尿病成模后1周，DOVX组大鼠摘除双侧卵巢，NS和DS组大鼠仅切除少量脂肪。去卵巢前后各组大鼠分别称重及测定空腹血糖、空腹胰岛素，计算胰岛素敏感指数。去卵巢12周后各组大鼠取两侧股四头肌分别行免疫组化及逆转录-多聚酶链反应（RT—PCR）检测PI3K、Akt2和NF—κB的表达水平。多组间比较采用方差分析，以P〈0．05为差异有统计学意义。结果（1）DS组大鼠骨骼肌PI3KmRNA和Akt2mRNA分别为0．797±0．043和0．753±0．076，低于NS组（0．870±0．051和0．844±0．013，t=2．722、3．368，均P〈0．05），但高于DOVX组（0．715±0．068和0．666±0．038，t=2．686、2．526，均P〈0．05）。（2）DS组大鼠骨骼肌NF—κB mRNA为0．577±0．097，高于NS组（0．433±0．112，t=-3．147，P〈0．05），但低于DOVX组（0．696±0．090，t=-2．862，P〈0．05）。（3）各组大鼠骨骼肌均可见P13K、Akt2和NF—κB蛋白表达。DS组大鼠骨骼肌Pi3K和Akt2蛋白分别为（4．3±0．6）和（3．4±0．7），低于NS组（5．2±0．4、4．7±0．7，t=2．654、3．488，均P〈0．05），但高于DOVX组（3．5±0．6和2．8±0．5，t=3．473、2．365，均p〈0．05）。（4）DS组大鼠骨骼肌NF—κB蛋白表达为6．5±0．9，高于NS组大鼠（4．9±0．8，t=-3．396，P〈0．05），但低于DOVX组（8．1±0．8，t=-2．954，P〈0．05）。结论去卵巢2型糖尿病大鼠骨骼肌P13K和Akt2表达下降，NF—κB炎症因子激活可能导致胰岛素抵抗加重。

雌二醇经丝苏氨酸蛋白激酶激活核因子κB通路对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖迁移的影响

目的 探讨雌二醇在子宫内膜癌Ishikawa细胞中是否通过丝苏氨酸蛋白激酶（AKT）介导核因子κB （NF-κB）通路产生细胞因子,及其对细胞增殖及迁移的影响.方法 Western blot法检测雌二醇作用Ishikawa细胞后AKT活化情况,以及AKT和ER抑制剂对雌二醇活化AKT的影响,TransAM NF-κB p65检测不同浓度雌二醇及1×10^-6 mol/L雌二醇作用不同时间后的NF-κB活性水平.经雌二醇（雌二醇组）、ER抑制剂（ER组）、AKT抑制剂（AKT组）和NF-κB抑制剂（NF-κB组）分别预处理Ishikawa细胞后,采用荧光定量PCR检测细胞内血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF） mRNA表达,Western blot法检测VEGF、bFGF蛋白的变化,流式细胞仪检测细胞周期的变化,羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE）法检测细胞增殖能力,Transwell检测细胞迁移能力.结果 Western blot检测结果显示,雌二醇、AKT和ER抑制剂作用Ishikawa细胞后AKT活性水平分别为0.090±0.075、0.013 ±0.036、0.042±0.008,对照组为0.053±0.036;雌二醇组的AKT活性值比对照组、ER组及AKT组升高,差异均有统计学意义（P＜0.05）.TransAM检测显示,雌二醇浓度为1×10^-6mol/L时,Ishikawa细胞NF-κB活性为0.77±0.20,较对照组（0.51±0.16）明显升高,差异有统计学意义（P＜0.05）;1×10^-6mol/L雌二醇作用30 min及1h时,Ishikawa细胞NF-κB活性水平最高（P＜0.05）.AKT组NF-κB活性为0.54±0.27,低于1×10^-6mol/L雌二醇组（P＜0.05）.雌二醇组VEGF、bFGF mRNA的表达分别为6.34±0.45和1.58 ±0.12,明显高于对照组的0.83±0.03和0.34±0.02（均P＜0.01）;雌二醇组VEGF、bFGF蛋白的表达均明显高于对照组、ER组、AKT组和NF-κB组（均P＜0.05）.雌二醇作用Ishikawa细胞后,细胞增殖数明显增多,G0/G1期比例明显低于对照组（均P＜0.01）.结论 雌二醇可能经AKT激活NF-κB通路产生VEGF和bFG因子,促进Ishikawa细胞的增殖与迁移能力。

中风活心软胶囊通过PPARγ受体上调STAT3磷酸化激活PI3K/AKT通路抑制脑缺血再灌注损伤内质网应激的作用机制研究

目的探讨中风活心软胶囊介导过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)受体上调信号传导转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)磷酸化诱导磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(BAKT serine/threonine kinase,AKT)信号通路参与脑缺血再灌注损伤内质网(endoplasmic reticulum,ER)应激和神经保护的作用机制研究,阐明中风活心软胶囊对脑缺血后神经损伤修复的调控机制。方法选取30只SPF级雄性SD大鼠,随机分为对照组、模型组和治疗组,采用Zea Longa法建立右侧大脑中动脉缺血(middle cerebral artery ischemia,MCAI)大鼠模型,采用改良神经功能损伤评分(modified neurological severity score,mNSS)评估大鼠神经功能缺损情况,以mNSS评分2~18分为造模成功。仅治疗组给予中风活心软胶囊。Western blot法分别检测缺血半暗区皮质PPARγ受体蛋白、STAT3磷酸化蛋白、PI3K/AKT信号通路蛋白的表达,检测ER应激标记分子葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)及真核翻译起始因子2α激酶3(PKR-like endoplasmic reticulum kinase,PERK)-激活转录因子4(activating transcription factor 4,ATF4)-C/EBP同源蛋白(C/EBP-homologous protein,CHOP)通路蛋白表达水平。结果模型组大鼠神经功能缺损情况,透射电镜观察缺血半暗区皮质神经元显著减少,提示右侧MCAI大鼠模型构建成功。模型组、治疗组mNSS评分均高于对照组,但治疗组低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组大鼠缺血区PPARγ受体蛋白、STAT3磷酸化蛋白、PI3K及AKT蛋白表达均低于对照组与治疗组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗组与对照组各指标比较差异无统计学意义。治疗组、模型组大鼠缺血区GRP78、PERK、ATF4和CHOP蛋白表达均高于对照组,但治疗组均低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论中风活心软胶囊可显著提高脑缺血大鼠缺血半暗区皮质PPARγ受体蛋白、STAT3磷酸化蛋白、PI3K/AKT信号通路蛋白表达,其作用机制可能是通过介导PPARγ受体上调STAT3磷酸化诱导PI3K/AKT信号通路参与脑缺血再灌注损伤ER应激和神经保护,从而发挥脑保护效应。

隐丹参酮调节Rac1/AKT/NF-κB信号通路对脓毒症大鼠肠损伤的影响

目的:探究隐丹参酮(CRY)调节Ras相关C3肉毒素底物1(Racl)/丝氨酸-苏氨酸蛋白酶(AKT)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路对脓毒症大鼠肠损伤的影响。方法:建立脓毒症大鼠模型。大鼠分为Control组、Model组、隐丹参酮高、中、低剂量组(7.0mg·kg^(-1)·d^(-1)CRY-H组、14.0mg·kg^(-1)·d^(-1)CRY-M组、28.0mg·kg^(-1)·d^(-1)CRY-L组)和隐丹参酮高剂量+NF-κB通路激活剂组(28mg·kg^(-1)·d^(-1)CRY-H+5 mg·kg^(-1)·d^(-1)PMA组),每组12只,Control组与Model组使用同等剂量生理盐水进行处理,每天1次,连续21d。用试剂盒检测脓毒症大鼠血清炎症因子、氧化应激、肠黏膜屏障指标水平;HE染色观察大鼠肠组织病理形态;免疫组化和免疫印迹法分别检测大鼠肠组织中ZO-1、occludin和通路蛋白表达。结果:与Control组比较,Model组黏膜绒毛排列紊乱,部分黏膜脱落、坏死,大量炎细胞浸润,组织病理评分较高,血清TNF-α、IL-1β、MDA、内毒素、D-乳酸水平上升,SOD水平降低,Rac1、p-AKT/AKT、p-NF-κB/NF-κB表达上调,ZO-1、occludin下调表达(P<0.05);与Model组比较,CRY-L、CRY-M、CRY-H组肠黏膜绒毛相对完整,炎细胞浸润减轻,组织病理评分降低,血清TNF-α、IL-1β、MDA、内毒素、D-乳酸水平降低,SOD水平上升,Rac1、p-AKT/AKT、p-NF-κB/NF-κB表达下调,ZO-1、occludin上调表达(P<0.05);与CRY-H组相比,CRY-H+PMA组肠黏膜细胞有较多炎细胞浸润,组织病理评分升高,血清TNF-α、IL-1β、MDA、内毒素、D-乳酸水平升高,SOD水平降低,Rac1、p-AKT/AKT、p-NF-κB/NF-κB表达上调,ZO-1、occludin下调表达(P<0.05)。结论:隐丹参酮抑制Rac1/AKT/NF-κB信号通路改善脓毒症大鼠肠损伤。

转化生长因子β1对膀胱癌细胞增殖与迁移能力的影响及其机制

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)对膀胱癌T24细胞增殖、迁移能力的影响及其机制。方法以浓度为0、1、5、10、20、40μg/L的TGF-β1处理T24细胞24 h,采用MTT法检测细胞的增殖活性,采用细胞划痕方法检测其迁移能力,采用Western blot检测细胞中程序性死亡配体-1(PD-L1)蛋白的相对表达量;使用浓度为5μg/L的TGF-β1处理T24细胞0、0.5、1、2、6、24 h,采用Western blot实验检测细胞PD-L1蛋白及磷酸化丝苏氨酸蛋白激酶(p-AKT)和磷酸化细胞外调节激酶(p-ERK)蛋白的相对表达量;将T24细胞分为A~C组,A组使用正常培养基培养,B组培养基中加入终浓度为5μg/L的TGF-β1培养,C组培养基加入终浓度为5μg/L的TGF-β1及SB431542培养,Western blot方法检测A~C组细胞中PD-L1相对表达量;将T24细胞分为D~G组,D组使用正常培养基培养,E组培养基中加入终浓度为5μg/L的TGF-β1培养,F组培养基中加入终浓度为5μg/L的TGF-β1、AKT抑制剂MK2206培养,G组培养基加入终浓度5μg/L的TGF-β1、ERK抑制剂U0126处理T24细胞,均处理24 h,Western blot方法检测D~G组细胞中p-AKT、p-ERK和PD-L1相对表达量。结果浓度0、1、5、10、20、40μg/L的TGF-β1处理T24细胞24 h,其他浓度的TGF-β1处理T24细胞的增殖能力相较于0μg/L时均显著增强(t=3.59~12.18,P<0.05),各浓度之间T24细胞的迁移率没有显著差异(P>0.05),浓度为5μg/L时相较于其他浓度,PD-L1蛋白表达明显升高(t=3.22~5.64,P<0.05);浓度为5μg/L的TGF-β1处理T24细胞0、0.5、1、2、6、24 h后,T24细胞PD-L1蛋白表达随时间延长逐渐升高(F=199.20,P<0.05),并且处理时间为0.5 h相较于其他处理时间,p-AKT、p-ERK表达量显著升高(t=6.26~64.24,P<0.05);B组与A组比较,T24细胞PD-L1蛋白表达水平明显升高(t=31.24,P<0.05),C组与B组比较,PD-L1蛋白的表达水平降低(t=17.04,P<0.05);E组与D组比较,T24细胞的PD-L1、p-AKT、p-ERK蛋白水平明显升高(t=9.44~37.29,P<0.05),G组与E组比较,p-AKT、PD-L1蛋白表达水平显著降低(t=104.40、6.74,P<0.05);F组与E组比较,p-ERK、PD-L1蛋白表达水平显著降低(t=24.26、17.01,P<0.05)。结论TGF-β1可以促进膀胱癌T24细胞增殖和细胞内PD-L1表达,不影响其迁移,其作用机制可能是通过促进细胞内PD-L1、p-ERK和p-AKT表达实现的。

丹酚酸B对结肠癌细胞HCT116增殖、迁移、糖酵解和上皮-间充质转化作用及机制研究

目的探讨丹酚酸B对结肠癌细胞HCT116增殖、迁移、糖酵解和上皮-间充质转化(EMT)的作用及机制。方法通过CCK-8实验和克隆形成实验评估丹酚酸B(25、50、100μmol·L^(-1))对结肠癌细胞HCT116增殖的影响;通过创伤愈合实验评估丹酚酸B对HCT116细胞迁移能力的影响;试剂盒法检测丹酚酸B对结肠癌细胞糖酵解及乳酸水平的影响;通过Westernblotting法分析丹酚酸B对EMT相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和Snail,糖酵解相关蛋白葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)、乳酸脱氢酶A(LDHA),p-丝氨酸/苏氨酸激酶(AKT)/核因子κB(NF-κB)信号通路相关蛋白AKT、p-p65的调控作用。结果与对照组相比,50、100μmol·L^(-1)丹酚酸B显著抑制HCT116细胞的增殖(P<0.01、0.001);100μmol·L^(-1)丹酚酸B显著阻断HCT116细胞的迁移(P<0.001);50、100μmol·L^(-1)丹酚酸B显著降低HCT116细胞GLUT1和LDHA的蛋白表达(P<0.01、0.001),显著降低HCT116细胞的葡萄糖消耗及乳酸产生(P<0.01、0.001);50、100μmol·L^(-1)丹酚酸B组上皮标志物E-cadherin的蛋白表达显著上升(P<0.01、0.001),而间充质标志物N-cadherin、Vimentin和转录因子Snail的蛋白表达显著下降(P<0.01、0.001);50、100μmol·L^(-1)丹酚酸B显著降低AKT的磷酸化水平和核因子κB(NF-κB)的亚基p65的磷酸化水平(P<0.01、0.001)。结论丹酚酸B能显著抑制结肠癌细胞的增殖、迁移能力,并有效抑制EMT过程、糖酵解,可能通过抑制AKT/NF-κB信号通路实现。

PIM1基因对急性髓系白血病U937细胞增殖、凋亡及JAK2/STAT3信号通路的影响

目的:探讨PIM1基因对急性髓系白血病(AML)U937细胞增殖、凋亡的影响,以及对JAK2/STAT3通路的调控作用。方法:收集初诊成人AML患者和单纯缺铁性贫血患者的骨髓单个核细胞,荧光定量PCR检测PIM1 mRNA表达。将AML细胞系U937细胞分为:U937组(U937细胞正常培养)、Si-PIM1组(U937细胞转染含PIM1 mRNA的低表达腺病毒载体)、Si-NC组(U937细胞转染不含PIM1 mRNA的低表达腺病毒载体)、CoA1组(U937细胞中加入浓度为20μmol/L的JAK2激活剂CoA1)、Si-PIM1+CoA1组(U937细胞转染含PIM1 mRNA低表达的腺病毒载体并加入浓度为20μmol/L的CoA1)。培养24 h。荧光定量PCR和蛋白印迹法检测U937细胞PIM1 mRNA和蛋白、JAK2/STAT3通路、细胞周期、凋亡相关蛋白表达;噻唑蓝法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞周期变化及凋亡率。结果:AML患者骨髓单个核细胞中PIM1 mRNA表达水平高于单纯缺铁性贫血患者(P<0.05)。与U937组相比,Si-PIM1组细胞PIM1 mRNA和蛋白、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3、Cyclin D1、CDK2蛋白、细胞增殖活性、S期比例、G2/M期比例降低(均P<0.05),p27、Caspase-3蛋白、G0/G1期、凋亡率升高(均P<0.05),而CoA1组上述指标的变化情况与Si-PIM1组正好相反,CoA1可逆转Si-PIM1对U937细胞的作用效果。U937组、Si-PIM1+CoA1组、Si-NC组U937细胞上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:敲低PIM1基因表达可抑制U937细胞增殖、促进凋亡,缓解ALM进程,且上述作用可能与抑制JAK2/STAT3通路活化有关。

大柴胡汤含药血清通过JAK2/STAT3信号通路抑制AR42J细胞炎症反应

目的探讨大柴胡汤含药血清对胰腺腺泡细胞炎症反应的防治作用及可能机制。方法HPLC法检测大柴胡汤中指标成分含量;采用雨蛙肽处理AR42J细胞复制急性腺泡细胞炎症模型,采用CCK-8方法检测大柴胡汤含药血清对细胞活力的影响;Western blot方法检测细胞内JAK2、STAT3及NFκB磷酸化程度;ELISA法检测IL-6和TNF-α含量。结果大柴胡汤中黄芩苷和芍药苷含量分别为13.02 mg/mL、7.19 mg/mL,大柴胡汤含药血清用量不超过20%;大柴胡汤含药血清降低炎性细胞上清液中TNF-α和IL-6含量,降低细胞内JAK2、STAT3及NFκB磷酸化作用,减轻细胞炎症反应;STAT3抑制剂cucurbitacin可减弱大柴胡汤的炎症抑制作用。结论大柴胡汤含药血清可减轻腺泡细胞急性炎症作用,其机制可能为抑制细胞内JAK2/STAT3信号通路进而降低NFκB活性,减少促炎性细胞因子合成。

激酶和核转录因子抑制剂治疗过敏性哮喘研究进展

目前全球大约有3亿人患哮喘,其中多数患者通过吸入免疫抑制剂(如糖皮质激素)和β-肾上腺素受体激动剂治疗哮喘,获得良好的效果。然而大约5%～10%的哮喘患者却对这种治疗反应效果较差。以信号通路中关键性激酶和核转录因子作为靶点治疗过敏性哮喘,多年来一直受到国内外学者的关注。本文就近年来激酶和核转录因子抑制剂治疗哮喘的进展进行综述。

整合素连接激酶在肺癌细胞中过度表达并通过核因子-κB途径介导基质金属蛋白酶-9上调促进肺癌细胞迁移和侵袭

整合素连接激酶（integrin—linkedkinase，ILK）是一种高度保守的丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶，参与细胞调控，包括细胞的迁移和侵袭，并在多种肿瘤中过度表达且参与肿瘤细胞的转移。基质金属蛋白酶（matrixmetalloproteinase，MMPs）通过降解细胞外基质的成分促进肿瘤的侵袭和迁移。

硫化氢通过PI3K/AKT-NF-κB通路调节重症急性胰腺炎

目的探讨硫化氢(H2S)在重症急性胰腺炎(SAP)中的作用及机制。方法 SD大鼠分为对照组(n=6)、SAP组(n=10)、炔丙基甘氨酸(PAG)+SAP组(n=10)、5mg/kg NaHS+SAP组(n=10)、10mg/kg NaHS+SAP组(n=10)、20mg/kg NaHS+SAP组(n=10)、100mg/kg NaHS+SAP组(n=10)、wortmannin(以下简写W)+SAP组(n=10)、5mg/kg NaHS+W+SAP组(n=10)及100mg/kg NaHS+W+SAP组(n=10),腹腔内注射6%左旋精氨酸制作SD大鼠SAP模型,24h后处死大鼠。ELISA法检测血浆IL-6水平、胰腺髓过氧化物酶(MPO)活性,Western blot法检测各组大鼠胰腺磷酸化丝/苏氨酸蛋白激酶(p-AKT)及核因子抑制蛋白-κB(IκBα)表达水平,EMSA法检测核转录因子-κB(NF-κB)活性。结果 SAP组和PAG+SAP组血浆IL-6水平、胰腺组织MPO活性及p-AKT水平较对照组明显升高(P<0.05),NF-κB活性也得到增强,且PAG+SAP组高于SAP组(P<0.05);而SAP组和PAG+SAP组IκBα水平较对照组明显降低(P<0.05),且PAG+SAP组低于SAP组(P<0.05)。给予不同剂量NaHS后,各组血浆IL-6水平、胰腺组织MPO活性、p-AKT水平及NF-κB活性随着NaHS浓度升高而逐渐降低;IκBα水平却逐渐升高。给予W后,各组血浆IL-6、胰腺MPO活性及p-AKT水平均明显降低,NF-κB活性有一定程度的减弱,而IκBα表达水平明显升高。结论外源性H2S可减轻SAP的炎症程度,且该作用在一定范围内与血浆H2S水平呈正比。H2S通过介导PI3K/AKT-NF-κB通路能减轻SAP胰腺损伤的炎症程度。

间充质干细胞及其外泌体在治疗ALI/ARDS中的机制研究进展

间充质干细胞(MSC)因其显著的免疫调节能力及再生能力,已在多种疾病的细胞治疗领域显示出巨大前景,特别是在急性肺损伤(ALI)/急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的治疗中表现出极高的应用潜力。ALI/ARDS均为严重的肺部炎症状态,常导致高病死率。MSC能通过分泌MSC来源的外泌体(MSC-EXO)——一种富含蛋白质、RNA及其他生物分子的微小囊泡发挥其治疗效应。在ALI/ARDS治疗中,MSC-EXO通过多种信号通路发挥作用,包括抑制核转录因子-κB(NF-κB)通路以降低炎症反应,激活磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路促进细胞存活,及调节丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)与酪氨酸蛋白激酶/信号转导与转录激活子(JAK/STAT)通路以支持肺组织的修复和再生等。因此,MSC和MSC-EXO的研究与应用不仅开辟了新的治疗策略,也为深入理解ALI/ARDS的复杂病理生理机制提供了重要视角。

VEGF165b在肝细胞癌中的表达及其作用机制

目的:研究血管内皮生长因子165b(vascular endothelial growth factor 165b,VEGF165b)在肝细胞癌和正常肝组织中的表达情况,初步探讨其与肝细胞癌的关系和作用机制.方法:用免疫组织化学法检测28例肝细胞癌组织和30例正常肝组织中VEGF165b蛋白的表达情况;用RT-PCR法分别检测肝细胞癌和正常肝组织中VEGF165b和VEGF165 mRNA的表达情况.用Western blot法检测上述肝细胞癌组织和正常肝组织中VEGF165b和VEGF165蛋白的表达情况.用Western blot法检测上述肝细胞癌和正常肝组织中FAK和P-Akt蛋白的表达情况.结果:正常肝脏组织中VEGF165b蛋白表达率为96.67%(29/30),肝细胞癌组织中VEGF165b蛋白的表达率为21.4%(6/28),表达差异有统计学意义(P<0.05).VEGF165b mRNA和蛋白在肝癌组织中的表达明显低于正常肝脏组织的表达(P<0.01).VEGF165 mRNA和蛋白在肝癌组织中的表达明显高于正常肝脏组织的表达(P<0.01).FAK和P-Akt蛋白在肝癌组织中的表达明显高于正常肝脏组织的表达(P<0.01).结论:VEGF165b在肝细胞癌组织中的表达明显低于正常肝组织的表达,而VEGF165和FAK、P-Akt在肝细胞癌组织中的表达明显高于正常肝组织的表达.提示VEGF165b与肝癌发生、发展有关,其机制可能是VEGF165b抑制VEGF165、FAK和P-Akt表达及他们的促进血管生成、肿瘤生长作用.

PP2C蛋白磷酸酶调控的细胞信号通路研究进展

2C类蛋白磷酸酶是蛋白磷酸酶家族的重要成员,可以对丝/苏氨酸残基特异性脱磷酸。近来研究表明,2C类蛋白磷酸酶控制着大量关键的细胞功能,如增殖、细胞周期阻滞、衰老和细胞程序性死亡、凋亡和自噬等,因而在介导机体免疫反应、衰老、神经发育及肿瘤发生发展中发挥重要的生物学作用。总结PP2C基因各亚型参与介导的重要细胞信号通路,如丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、磷脂酰肌醇3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(PI3K/AKT)、转化生长因子-β(TGF-β)/Smads、核转录因子-κB(NF-κB)及DNA损伤应答通路,以期为阐明上述生理病理过程的分子基础和调控机制提供新的思路。