吡格列酮对淀粉样β蛋白片段1-42引起的大鼠海马有丝分裂原激活蛋白激酶p38信号传导通路变化的影响

目的探讨吡格列酮(Pio)对淀粉样β蛋白片段1-42(Aβ1-42)所致大鼠海马损伤的保护作用及其作用机制。方法大鼠随机分为正常对照组,Aβ1-42损伤组,Aβ1-42+Pio20,40及80mg·kg-1组。d1与d2,Pio处理组大鼠灌胃给予Pio,正常对照组和Aβ1-42损伤组灌胃给予0.2%二甲亚砜。d2给药处理后,Aβ1-42损伤组及Pio处理组大鼠左侧脑室内单次注射Aβ1-425μL(2.0mmo·lL-1)制备大鼠痴呆模型,正常对照组注射等量生理盐水。继续给药6d,处死大鼠,取海马CA1区,Western蛋白印迹法观察磷酸化有丝分裂原激活蛋白激酶激酶3/6(MKK3/6)、磷酸化有丝分裂原激活蛋白激酶P38(p38MAPK)、磷酸化活化转录因子2(ATF-2),磷酸化有丝分裂原激活蛋白激酶活化的蛋白激酶2(MAPKAPK-2)和磷酸化热休克蛋白27(HSP27)的蛋白表达水平的改变。结果脑室内注射Aβ1-42可引起海马CA1区磷酸化的MKK3/6、磷酸化的p38MAPK和磷酸化的ATF-2表达明显增加,而磷酸化的MAPKAPK-2和磷酸化的HSP27表达明显降低。Pio可明显抑制Aβ1-42引起的磷酸化的MKK3/6、磷酸化的p38MAPK和磷酸化的ATF-2表达的增加;逆转Aβ1-42引起的磷酸化的MAPKAPK-2和磷酸化的HSP27表达降低的变化。结论Pio对Aβ1-42引起的海马神经损伤的保护作用可能与其抑制Aβ1-42引起的磷酸化p38MAPK信号传导通路的改变有关。

肢体缺血预处理通过激活有丝分裂原激活蛋白激酶p38减轻脑缺血导致的大鼠海马CA1区神经元凋亡和脑水肿(英文)

目的旨在探讨肢体缺血预处理(LIP)能否减轻脑缺血过程中海马CA1区神经元凋亡和脑水肿。方法72只永久凝闭椎动脉的Wistar大鼠随机分为6组:假手术,LIP(双侧股动脉夹闭10min,间歇10min,3次循环),脑缺血,LIP+脑缺血,DMSO和SB 203580+LIP+脑缺血组。各组大鼠中6只在脑缺血后3d处死,TUNEL染色计数凋亡细胞;6只在脑缺血后24h处死,测定脑组织含水量。结果TUNEL染色显示,假手术和LIP组海马CA1区偶有TUNEL阳性细胞;脑缺血组海马CA1区可见大量棕黄色着色的TUNEL阳性细胞,与假手术组及LIP组相比,细胞数量明显增加;LIP+脑缺血组,TUNEL阳性神经元数与脑缺血组相比明显减少,提示LIP明显抑制缺血引起的海马CA1区锥体细胞凋亡;有丝分裂原激活蛋白激酶p38拮抗剂SB 203580+LIP+脑缺血组,海马CA1区阳性染色锥体细胞明显增加,与DMSO+LIP+脑缺血组相比有显著性差别,表明SB 203580可拮抗LIP抑制凋亡的作用。与假手术和LIP组比较,脑缺血组脑组织含水量明显增加,表明LIP降低了脑缺血引起的脑组织含水量增加;LIP前应用SB 203580可抑制LIP的脑保护作用,使脑组织含水量较LIP+脑缺血组显著增加。结论LIP能够减轻脑缺血过程中海马CA1区神经元凋亡和脑水肿,可能与活化有丝分裂原激活蛋白激酶p38有关。

补阳还五汤通过抑制p38有丝分裂原激活蛋白激酶通路改善大鼠缺血性脑损伤

目的：探讨补阳还五汤针剂对缺血性脑卒中的治疗作用及机制.方法：大鼠分为假手术组,模型组,补阳还五汤高、低剂量组.参照Zea-Longa线栓法建立大鼠局灶性脑缺血模型.术后H-E染色观察海马区神经细胞形态变化,免疫组织化学法和免疫印迹法检测海马区磷酸化有丝分裂原激活蛋白激酶（p38MAPK）和环氧化酶-2（COX2）表达,原位缺口末端标记法（TUNEL）检测凋亡细胞.伤后3～7d水迷宫法测试动物学习记忆功能.结果：与对照组比较,脑缺血后海马区神经元结构损伤明显、磷酸化p38MAPK水平（术后1、6、24h）、COX2蛋白（术后1、6、24、48h）、凋亡神经细胞数量（6、24、48、72h）增加;大鼠的学习记忆功能下降;与模型组比较,补阳还五汤组中大鼠的学习记忆功能改善,神经元形态结构损伤减轻,磷酸化p38MAPK、COX2蛋白以及神经细胞凋亡数量下降,上述变化在高剂量补阳还五汤组更为明显.结论：补阳还五汤对脑缺血再灌注损伤有很好的治疗作用,其机制与调控p38MAPK/COX2信号通路,抑制神经细胞凋亡有关.

有丝分裂原激活蛋白激酶与多器官功能障碍综合征关系的研究进展

有丝分裂原激活蛋白激酶(MAPK)是细胞内的一类丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,是介导细胞产生反应的重要信号系统。p38信号传导通路是MAPK家族的成员之一,参与了脓毒症、多器官功能障碍综合征(MODS)的发病过程,通过调控p38 MAPK信号通路,可能为降低MODS的发生率和死亡率提供一新的治疗选择。

有丝分裂原激活蛋白激酶p38在佐剂关节炎大鼠滑膜及肺组织的表达

目的研究有丝分裂原激活蛋白激酶（MAPK）-p38在佐剂关节炎（AA）大鼠滑膜及肺组织中表达，探讨类风湿关节炎（RA）的发病机制。方法给大鼠右后足跖部皮下注射完全弗氏佐剂（CFA）复制RA的动物模型-AA。用原位杂交法检测p38mRNA在AA大鼠滑膜及肺组织中的表达。结果AA大鼠滑膜和肺组织p38mRNA阳性细胞的平均灰度值（0～255，深～浅）明显低干正常大鼠（P〈0．01）。AA大鼠滑膜的巨噬细胞，成纤维细胞和淋巴细胞的胞浆内均有p38mRNA的表达。肺组织中p38mRNA主要表达于巨噬细胞，单核细胞及浸润的淋巴细胞中。结论AA大鼠p38mRNA过表达与AA的滑膜及肺部病变有关，可能在RA的发病中有重要作用。

有丝分裂原激活蛋白激酶信号传导通路在三苯氧胺非雌激素拮抗肿瘤中的作用

目的 研究有丝分裂原激活蛋白激酶 (MAPK)信号传导通路在三苯氧胺 (TAM)非雌激素拮抗的抗肿瘤机制中发挥的作用。方法 应用TAM与MEK抑制剂PD980 5 9处理MCF 7细胞 ,用Western印迹法检测p ERK表达情况 ,用MTT法检测细胞增殖状态 ,用流式细胞术检测细胞周期与细胞凋亡。结果 TAM抑制ERK活化 ,抑制细胞G1/S期转化 ,促进细胞凋亡 ,联合应用PD980 5 9和TAM ,可以协同作用。结论 抑制MAPK信号传导通路可能是TAM非雌激素拮抗的抗肿瘤机制之一。

细小病毒H-1感染对有丝分裂原激活蛋白激酶信号传导相关基因表达的影响

目的 探讨具有选择性杀伤和抑制肿瘤细胞生长特性的细小病毒H 1所诱导的胃癌细胞死亡的信号传导通路及可能机制。方法 采用RT PCR的方法 ,检测H 1病毒感染后胃癌细胞HGC2 7的有丝分裂原激活蛋白激酶 (MAPK)信号传导途径相关基因在mRNA水平的表达改变。结果 MAPK信号传导相关基因的扩增结果显示 :在H 1病毒感染HGC2 7细胞 48h后 ,细胞CREB基因的表达明显增高 ,ERK1、STAT2、p38 γ、MEK2、β RAF、MTK1基因的表达明显降低 ,而JNK2、ETS、ERK2基因在mRNA水平的表达无明显改变。结论 细小病毒H 1的细胞毒作用可能与其影响胃癌细胞MAPK信号传导途径中相关基因的表达有关。即H 1病毒通过干预癌细胞信号传导的特定通路而诱导细胞死亡。由此我们认为 ,可修饰改造的细小病毒H 1。

人视网膜色素上皮细胞增生中表皮生长因子-表皮生长因子受体-有丝分裂原激活蛋白激酶信号传导途径的激活及其作用

目的 观察人视网膜色素上皮 (RPE)细胞增生中表皮生长因子 (EGF) -表皮生长因子受体(EGFR) -有丝分裂原激活蛋白激酶 (MAPK)信号传导途径的激活及其作用。 方法 人 RPE细胞分别在0 .1%、10 %小牛血清 (FCS) ,EGF(0 .1、1、10、5 0、10 0 ng/ ml)及上述各浓度 EGF与 10 %FCS联合作用下培养 3d。采用原位杂交及免疫细胞化学方法 ,检测 RPE细胞 EGFR m RNA及蛋白质表达。使用抗磷酸化细胞外信号调节激酶 (ERK) 1/ 2抗体进行免疫细胞化学染色 ,以观察 MAPK激活情况。 结果 EGF在10 %FCS改良 Eagle培养液 (DMEM)中作用时 ,其最佳刺激浓度为 1ng/ ml,EGF在 0 .1%FCS DMEM中作用时最佳作用浓度为 10 ng/ ml;EGF作用后 ,磷酸化 ERK 1/ 2抗体由在细胞浆中表达转移至在细胞核中表达。 结论 EGF呈浓度依赖性地促进 RPE细胞 EGFR m RNA及蛋白质的表达 ,且对 MAPK也具有浓度依赖性的核转位作用。推测 EGF- EGFR- MAPK信号传导途径可能在 RPE细胞增生中起重要作用 ,血清在此过程中有明显的促进作用。

丝裂素原激活蛋白激酶途径在内毒素激活枯否细胞中的作用

目的 :探讨丝裂素原激活蛋白激酶 (MAPKs)途径在脂多糖 (L PS)激活枯否细胞 (KC)中的作用。方法 :用 3种 MAPK通路阻滞剂 ,测定其后培养 KC中肿瘤坏死因子 α m RNA(TNFα m RNA)、白介素 6m RNA (IL 6 m RNA )以及诱生型一氧化氮合酶 (i NOS)表达和 TNFα、IL 6以及 NO的释放。结果 :1ERK1/ 2途径抑制剂 (PD0 980 5 9)对 KC中 TNFα m RNA表达和 TNFα的释放影响极小 ,而对 IL 6m RNA和 i NOS的表达以及 IL 6和 NO的释放有明显的抑制作用 ;2 p38MAPK途径抑制剂 (SB2 0 35 80 )对KC中 TNFα m RNA和 IL 6 m RNA表达以及 IL 6和 TNFα的释放影响极小 ,而对 i NOS的表达和 NO的释放有明显的抑制作用 ;3当用 SB2 0 2 4 74抑制整个 MAPK途径时 ,KC中 TNFα、IL 6 m RNA和 i NOS的表达和 TNFα、IL 6以及 NO的释放均明显降低。结论 :TNFα m RNA表达和 TNFα的释放主要受MAPK途径中的 JNK/ SAPK途径的调节 ,IL 6 m RNA表达和 IL 6的释放主要受 MAPK途径中的 ERK1/ 2和 JNK/ SAPK通路的调节 ,而 i NOS的表达和 NO的释放可能与以上 3种途径均有关系。

体内外不同环境下成纤维细胞丝裂素原激活蛋白激酶的变化

目的:观察脱离体内环境因素时成纤维细胞中信号蛋白表达及细胞生物学特性的变化。方法:瘢痕疙瘩和正常皮肤(作为阴性对照)均来自北京大学第三医院成形科手术患者各6例。取小块瘢痕疙瘩和正常皮肤组织,用组织块接种法进行成纤维细胞原代培养后,进行细胞传代。试验所用为第5～8代细胞。①评价信号蛋白的含量,用体外培养的瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞中p44/42丝裂原活化蛋白激酶和磷酸化的p44/42丝裂原活化蛋白激酶的积分吸光度值。②评价信号蛋白的活化强度,用体外培养的瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞中p44/42丝裂原活化蛋白激酶和磷酸化的p44/42丝裂原活化蛋白激酶的平均积分吸光度值。③评价信号蛋白的活化程度用活化率值(磷酸化的p44/42丝裂原活化蛋白激酶积分吸光度值÷p44/42丝裂原活化蛋白激酶积分吸光度值)。结果:①p44/42丝裂原活化蛋白激酶和磷酸化的p44/42丝裂原活化蛋白激酶平均积分吸光度值比较:瘢痕疙瘩成纤维细胞均低于正常皮肤成纤维细胞(0.023±0.005和0.025±0.005,0.030±0.000和0.042±0.004,P<0.05)。②p44/42丝裂原活化蛋白激酶和磷酸化的p44/42丝裂原活化蛋白激酶积分吸光度值比较:瘢痕疙瘩成纤维细胞p44/42丝裂原活化蛋白激酶高于正常皮肤成纤维细胞(6048.7±1576.2,3006.3±174.4,P<0.05),瘢痕疙瘩成纤维细胞磷酸化的p44/42丝裂原活化蛋白激酶与正常皮肤成纤维细胞无差异(4876.0±895.8,3966.5±533.1,P>0.05)。③p44/42丝裂原活化蛋白激酶和磷酸化的p44/42丝裂原活化蛋白激酶活化率比较:瘢痕疙瘩成纤维细胞低于正常皮肤成纤维细胞(0.830±0.134,1.319±0.156,P<0.05)。结论:成纤维细胞在脱离生物体内环境后,其生物学特性发生改变。体外细胞培养中,磷酸化的p44/42丝裂原活化蛋白激酶的表达水平在瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞间无明显差别,而p44/42丝裂原活化蛋白激酶的活化程度和活化强度在正常皮肤成纤维细胞明显高于瘢痕疙瘩成纤维细胞。

p38分裂原激活蛋白激酶在小肠缺血再灌注损伤中的作用研究进展

目前国内外学者对于小肠缺血再灌注损伤的发病机制已经进行了一系列研究,其中分子机制成为研究热点.本文就p38分裂原激活蛋白激酶（p38 mitogen activated protein kinase,p38MAPK）在小肠缺血再灌注损伤发病机制中的作用（包括p38MAPK与氧化应激、炎症细胞因子、肠黏膜屏障功能、细胞凋亡的关系）以及p38MAPK在脏器缺血预处理、缺血后处理等干预措施中的研究现状作一综述.

蛋白激酶C在心肌预适应中的作用机制

心肌预适应后 ,内源性物质释放 ,分别作用于心肌中与G蛋白耦联的相应受体 ,蛋白激酶C激活并转位至细胞膜及细胞骨架 ,并可通过线粒体KATP通道、MAPK等通路引发心肌保护作用。在不同的动物中 ,分别发现不同的蛋白激酶C亚型激活转位。目前公认 :在参与心肌预适应过程的多种因素中 ,PKC起到了关键性作用 。

p38蛋白激酶活性测定方法

蛋白激酶ｐ３８／ＨＯＣ１是ＭＡＰＫ家族重要组成部分，在全身性炎症反应、休克、细胞迁移、细胞凋亡、心血管疾病等方面具有重要作用，测定上述病理过程中Ｐ３８蛋白激酶活性，对于了解ｐ３８信号传导通路与疾病的关系以及ｐ３８信号传导通路作为某些疾病的治疗靶点提供理论依据。ｐ３８蛋白激酶活性有同位素和非同位素两种方法，目前主要用同位素方法测定，但非同位素方法具有无放射性污染、时间短、灵敏度高等特点。

TNFα增加血管内皮细胞通透性与其激活P38 MAPK和黏附因子重新分布有关

目的 研究肿瘤坏死因子 (TNFα)对血管内皮细胞通透性的影响及其机理。方法 采用生物素标记白蛋白的酶联免疫吸附法测定人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)单细胞层的通透性 ;免疫荧光、激光共聚焦显微镜和蛋白免疫印迹等方法测定血管内皮黏附因子 (VEcadherin)的分布 ;功能性激酶试验测定有丝分裂原激活蛋白激酶 (MAPK)的活性 ,SB2 0 2 190 (P38抑制剂 )与PD980 5 9(ERK抑制剂 )复合物用于其活性的抑制实验。结果 与对照组比较 ,TNFα明显增加血管内皮细胞的通透性、降低细胞膜VEcadherin的表达 ,诱导P38和ERKMAPK的活性 (P <0 .0 5 )。有趣的是SB2 0 2 190明显降低了TNFα对血管内皮通透性和细胞膜VEcadherin表达的作用 ,而PD980 5 9不能阻止TNFα产生的上述作用。结论 TNFα增加血管内皮细胞的通透性是通过激活P38MAPK信号系统进而抑制VEcadherin在细胞膜的表达和重新分布。

川芎嗪对大鼠压力超负荷心肌细胞外信号调节激酶1mRNA表达的抑制作用

目的观察川芎嗪(ligustrazine)对大鼠压力超负荷所致心肌肥厚时细胞外信号调节激酶1(ERK-1)mRNA表达的影响。方法雄性SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、模型组及川芎嗪(25,50及100mg·kg-1)组。后4组采用缩窄腹主动脉(AAC)造模,术后次日开始ig给药,每天1次,连续3周。给药结束后监测大鼠血流动力学指标,以左心室肥厚指数(LVHI)和左心室重/右心室重(LVW/RVW)为左心室肥厚参数,实时荧光定量PCR法检测心肌肥厚标志心房利钠因子(ANF)和ERK-1mRNA的表达。结果AAC术后3周,与正常及假手术组比较,模型组血流动力学指标中颈总动脉收缩压(SBP)、左心室内收缩压(LVSP)及左心室舒张末压(LVEDP)明显升高,而左心最大收缩/舒张速率(±dp/dtmax)明显降低;左心室肥厚参数LVHI与LVW/RVW显著增加,ANF和ERK-1mR-NA表达明显上调。川芎嗪ig给药3周不影响SBP及LVSP,但显著降低LVEDP,增加±dp/dtmax,减轻LVHI和LVW/RVW,降低ANF和ERK-1mRNA的表达。结论川芎嗪能抑制大鼠压力超负荷心肌肥厚,其机制可能部分与抑制有丝分裂原激活蛋白激酶信号通路中ERK-1mRNA的表达有关。

肝细胞癌组织中血管生成素样蛋白3和MAPK蛋白的表达

目的:研究血管生成素样蛋白3(ANGPTL3)和有丝分裂原激活蛋白激酶(MAPK)在肝细胞癌(HCC)组织中的表达。方法:应用SP免疫组化方法检测60例HCC及其相应癌旁组织中ANGPTL3和MAPK的表达。结果:HCC组织中ANGPTL3和MAPK的阳性表达率分别为61.7%(37/60)和68.3%(41/60),癌旁组织中ANGPTL3和MAPK的阳性表达率分别为26.7(16/60)和28.3%(17/60),2者在HCC组织中的表达均高于癌旁组织(χ2分别为16.000和18.892,P均<0.001);HCC组织中两者的表达有关联(rP=0.540,P<0.001)。结论:ANGPTL3和MAPK在HCC的发生中发挥重要作用。

微小RNA-133a-5p在丙泊酚防治大鼠肝脏缺血再灌注损伤中的作用及作用机制

目的观察微小RNA-133a-5p(miR-133a-5p)在丙泊酚防治大鼠肝脏缺血再灌注(I/R)损伤中的作用,并探讨其可能作用机制。方法①丙泊酚对I/R大鼠肝功能及肝组织miR-133a-5p、有丝分裂原激活蛋白激酶6(mitogen-activated protein kinase 6,MAPK6)mRNA表达的影响观察:取18只大鼠分为丙泊酚组、模型组及对照组,每组6只。丙泊酚组及模型组对肝脏组织进行缺血再灌注操作,丙泊酚组在缺血再灌注操作的同时注射丙泊酚0.6 mg/(kg·min)。再灌注结束时采集各组大鼠下腔静脉血4 mL,采用全自动生化分析仪检测大鼠血清肝功能指标天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT),采血后处死各组大鼠分离肝脏组织,采用qRT-PCR法检测大鼠肝组织miR-133a-5p、MAPK6 mRNA。②miR-133a-5p抑制剂联合丙泊酚对I/R大鼠肝功能及肝组织miR-133a-5p、MAPK6mRNA表达的影响观察:另取24只大鼠分为甲、乙、丙、丁组,每组6只。四组均对肝脏组织进行缺血再灌注操作,甲组在缺血再灌注操作的同时注射丙泊酚0.6 mg/(kg·min)及miR-133a-5p抑制剂,乙组、丙组在缺血再灌注操作的同时分别注射丙泊酚0.6 mg/(kg·min)、丙泊酚+等量生理盐水,丁组不做任何处理。再灌注结束时采集各组大鼠下腔静脉血4 mL,采用全自动生化分析仪检测血清ALT、AST,采血后处死各组大鼠分离肝脏组织,采用qRT-PCR法检测四组大鼠肝组织miR-133a-5p、MAPK6mRNA。结果与对照组相比,模型组大鼠血清AST、ALT活性升高,肝脏组织miR-133a-5p相对表达量降低、MAPK6mRNA相对表达量升高(P均<0.01);与模型组相比,丙泊酚组大鼠血清AST、ALT水平降低,肝组织miR-133a-5p相对表达量升高、MAPK6mRNA相对表达量降低(P均<0.05)。与乙组相比,甲组大鼠血清ALT和AST水平高,肝组织MAPK6mRNA相对表达量高(P均<0.01);与乙和丙组相比,丁组大鼠血清ALT和AST水平升高,肝组织MAPK6mRNA相对表达量高(P均<0.01)。结论注射丙泊酚后肝脏I/R大鼠的肝损伤程度减轻,肝脏组织miR-133a-5p表达升高、MAPK6 mRNA表达降低。抑制miR-133a-5p表达可逆转丙泊酚对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的防治作用。丙泊酚可能通过促进肝脏组织miR-133a-5p表达,抑制肝组织MAPK6 mRNA表达,减轻大鼠的肝脏I/R损伤。

绿原酸对Aβ_(25-35)诱导的大脑皮层细胞损伤的保护作用机制

目的：研究绿原酸（CHA）对淀粉样β蛋白25-35（Aβ25-35）激活巨噬细胞导致大脑皮层细胞损伤的保护作用机制。方法采用生后0~3 d左右的Sprague-Dawley（SD）大鼠乳鼠，取出大脑皮层细胞然后做体外培养。培养8 d后与小鼠腹腔巨噬细胞共同培养2 d，再加入10μmol/L Aβ25-35制作阿尔茨海默病细胞模型。实验分为单独培养组、共同培养组、单独培养Aβ组、共同培养Aβ组和共同培养CHA组分别作用0.5、1、2、4、6 h后检测各组的结果。细胞损伤程度通过观察细胞形态和记数判定。p38分裂原激活蛋白激酶（p38MAPK）、有丝裂原激活蛋白激酶活化的蛋白激酶2（MAPKAPK-2）和热休克转录因子（HSP27）三种蛋白磷酸化的表达水平由Western blot检测。通过免疫荧光观察微管相关蛋白-2（MAP-2）的表达。结果 CHA显著抑制Aβ25-35处理所致的颗粒细胞密度的减少并且改善细胞的形态。Aβ25-35可以使p38MAPK的磷酸水平明显增加，在2h的时候磷酸化水平达到最高峰，4h后就逐渐下降，而使MAPKAPK-2和HSP27的磷酸化水平降低，2h降低最明显。结论 CHA通过抑制Aβ25-35诱导巨噬细胞释放炎症因子激活的p38MAPK信号转导通路，从而可以起到保护神经细胞的作用。

细胞内丝裂原活化蛋白激酶信号通路与脑缺血后神经元凋亡

脑缺血可导致梗死核心区细胞坏死和缺血半暗带细胞凋亡。脑缺血后，丝裂原活化蛋白激酶（mitogen—activated protein kinases，MAPKs）信号通路被激活，引起程序性细胞死亡，包括细胞凋亡。文章就MAPKs信号家族与脑缺血后神经元凋亡的关系进行了综述。

绿原酸对Aβ_(25-35)诱导小脑颗粒细胞损伤的保护作用机制

目的:探讨绿原酸(chlorogenic acid,CHA)对β淀粉样蛋白25-35(amyloidβ-protein 25-35,Aβ25-35)激活小鼠巨噬细胞引起的小脑颗粒细胞(cerebellar granular cell,CGC)损伤的保护作用机制。方法:实验分为空白对照组、Aβ25-35处理组和Aβ25-35+CHA共同处理不同时间组;空白对照组:加入等量培养基;Aβ25-35损伤组:加入10μmol·L-1 Aβ25-35;Aβ25-35和CHA处理不同时间组:将10μmol·L-1 Aβ25-35和1 000μmol·L-1 CHA同时加入共同培养2 d的小脑颗粒细胞和巨噬细胞,分别作用6,12,24,48,96 h。应用倒置相差显微镜观察小脑颗粒细胞的形态变化并计数;应用Western blot检测p38分裂原激活蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38MAPK)、下游底物有丝分裂原激活蛋白激酶活化的蛋白激酶2(mitogen-activated protein kinase activating protein kinase-2,MAPKAPK-2)、热休克转录因子(heat-shock protein27,HSP27)三种蛋白的磷酸化表达的改变。结果:CHA保护组的小脑颗粒细胞数量较Aβ25-35损伤组明显增加;CHA作用96 h可明显抑制Aβ25-35引起的巨噬细胞磷酸化的p38MAPK表达增加,逆转Aβ25-35引起的联合培养的小脑颗粒细胞和巨噬细胞磷酸化的MAPKAPK-2和磷酸化的HSP27表达降低的变化。结论:绿原酸是通过抑制Aβ25-35激活巨噬细胞p38MAPK信号通路的蛋白表达起到保护小脑颗粒细胞的作用。