胰腺癌胰液差异蛋白质丝氨酸蛋白酶2在胰腺癌组织和细胞株中的表达

目的研究胰腺癌胰液差异蛋白质丝氨酸蛋白酶2(PRSS2)在胰腺癌组织和细胞株中的表达,为临床胰腺癌的早期诊断及治疗提供新靶点。方法在4株胰腺癌细胞株、20例胰腺癌组织及20例正常胰腺组织中,以PCR法检测PRSS2 mRNA的表达,并分析其与胰腺癌临床特征之间的关系。结果PRSS2在正常胰腺、胰腺癌组织和胰腺癌细胞株中均有表达,在胰腺癌和正常组织中的相对表达量(RQ值)分别为33.76(6.47,107.98)和3.74(0.96,28.83),前者明显高于后者(P<0.05);PRSS2在癌组织中的表达与肿瘤分化程度、肿瘤大小、肿瘤淋巴结转移、血清CA19-9水平、血清CEA水平均无相关性。结论胰腺癌胰液中的PRSS2可作为胰腺癌诊断的潜在肿瘤标志物;从胰液筛查差异蛋白质作为胰腺癌早期诊断的肿瘤标志物是可行的。

新型丝氨酸蛋白酶SNC19在不同细胞系中表达及其对细胞生物学行为的影响

目的 :研究新型丝氨酸蛋白酶SNC19编码蛋白的功能及可能在肿瘤转移过程中的作用。方法 :制备针对它胞外区的单克隆抗体 ;免疫印迹法检测在不同细胞系中该蛋白的表达 ;Northernblot检测在不同上皮来源细胞系中其mRNA的表达 ;用单抗阻断法研究其对细胞迁移能力和细胞粘附能力的影响。结果 :自制抗体做West ernblot显示在BCAP37、COLO2 0 5、SW4 80中该蛋白存在两种形式 ,大小为 12 0kD和 6 0kD左右 ,而在SW6 2 0中只存在 6 0kD一种形式 ;Northernblot显示该蛋白在大部分细胞系中均有较高表达 ,大小为 3 4kd左右 ,mRNA水平只有一种形式 ,而在卵巢癌细胞系OV、舌癌细胞系TCA8113、口腔表皮样癌细胞系KB及胃癌细胞系SGC790 1中未检测到其表达 ;单抗阻断法发现实验组SW4 80 (anti-SNC19mAb 2 0mg/L)迁移速度明显慢于对照组 ,在SW4 80 /SW4 80同质粘附和SW4 80 /NIH3T3异质细胞粘附实验中 ,在实验的初始阶段 ,实验组SW4 80 (anti -SNC19mAb 2 0mg/L) /SW4 80、SW4 80 (anti-SNC19mAb 2 0mg/L) /NIH3T3粘附率明显大于对照组 ,但随着时间的推移这种差异逐渐缩小。结论 :SNC19编码蛋白与同质、异质细胞之间的粘附以及细胞的迁移运动密切相关。作为一种新型丝氨酸蛋白酶 ,SNC19编码蛋白可能与细胞迁移、组织重建甚?

血浆丝氨酸蛋白酶-Corin在慢性心力衰竭患者中的表达及临床意义

利用酶联免疫吸附试验方法检测138例慢性心力衰竭患者和200例健康体检者的血浆可溶性Corin的表达水平,分析其与慢性心力衰竭患者疾病严重程度及近期预后的关系。血浆可溶性Corin水平在慢性心力衰竭患者中明显降低,其与慢性心力衰竭患者疾病严重程度及近期预后密切相关。

丝氨酸蛋白酶家族相关成员与肿瘤的关系

DPPⅣ和Seprase是丝氨酸蛋白酶家族成员,结构上具有高度同源性,可能在肿瘤浸润和转移中发挥作用。关于DPPⅣ和Seprase的研究仍处于起步阶段,其在肿瘤中的浸润转移作用、相关机制和临床价值有待进一步研究。综述有关DPPⅣ和Seprase的结构和功能研究进展,为DPPⅣ和Seprase有望成为肿瘤治疗的靶点提供理论基础。

HtrA丝氨酸肽酶1基因新突变导致的常染色体隐性遗传性脑动脉病伴皮质下梗死及白质脑病一例

目的总结1例HtrA丝氨酸肽酶1（HTRA1）基因新突变导致的常染色体隐性遗传性脑动脉病伴皮质下梗死及白质脑病（CARASIL）患者临床特点。方法患者为34岁女性，下肢肌肉痉挛疼痛16年，腰痛、头痛、脱发5年，右侧轻偏瘫5个月，尿、便潴留1个月。脊椎MRI示颈椎和腰椎退行性变和椎间盘突出。头MRI示广泛脑白质损害、多发腔隙性梗死灶。患者进行腓肠神经和皮肤活体组织检查。患者及其父母和2个弟弟均进行了HTRA1基因的直接测序，患者进行Notch3基因直接测序，以100名健康者作为对照。结果光镜下可见小动脉内弹力板不连续和内膜增厚，毛细血管基底膜增厚，电镜下呈现细颗粒样改变。患者HTRA1基因第2号外显子存在c．524T〉A纯合突变，其父母及2个弟弟存在c．524T〉A杂合突变。未发现Notch3基因突变。100名健康对照无此突变。结论HTRA1基因c．524T〉A新突变导致的CARASIL可以伴随偏头痛和尿、便潴留。

丝氨酸肽酶基因变异和STOX1基因多态性与淮安地区汉族孕妇发生子痫前期的相关性

目的 探讨丝氨酸肽酶（serine peptidase）基因（即CORIN基因）变异和STOX1（storkhead box 1）基因多态性与子痫前期发病的相关性. 方法 选择2008年6月至2013年4月在淮安市妇幼保健院产科住院分娩的淮安地区汉族孕妇共712例,其中子痫前期孕妇395例（子痫前期组）,健康足月孕妇31 7例（对照组）.采用基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱技术对CORIN基因Lys317Glu、Ser472Gly和R539C位点的变异情况,及STOX1基因Try 153His和Glu608Asp单核苷酸多态性进行基因分型检测.组间基因频率和基因型频率比较采用x2检验.结果 在子痫前期组和对照组中,CORIN基因Lys317Glu位点均为AA基因型,Ser472Gly位点也均为AA基因型,R539C位点均为GG基因型,未检测到变异.子痫前期组STOX1基因Try153HisG等位基因频率为89.4％（706/790）,A等位基因频率为10.6％（84/790）,与对照组[分别为90.9％（576/634）和9.1％（58/634）]差异无统计学意义（x2=0.864,P=0.353）;GG、AG和AA基因型频率2组差异也无统计学意义[80.0％ （316/395）与82.3％ （261/317）、18.7％（74/395）与17.0％ （54/317）、1.3％（5/395）与0.6％（2/317）,x2=1.122,P=0.571].STOX1基因Glu608Asp等位基因频率与基因型频率在子痫前期组与对照组间差异也均无统计学意义（x2值分别为0.596和0.921,P值均＞0.05） 结论 CORIN基因3个位点的基因变异和STOX1基因2个位点的多态性可能与淮安汉族人群散发性子痫前期的发病无关.

尿液跨膜丝氨酸蛋白酶2基因和ETS转录因子家族成员相关基因融合体在前列腺癌诊断中的价值

目的评价尿液跨膜丝氨酸蛋白酶2（TMPRSS2）基因和ETS转录因子家族成员相关基因（ERG）融合体与前列腺特异性抗原（PSA）mRNA比值测定在前列腺癌诊断中价值。方法建立TMPRSS2和ERG基因融合体（TMPRSS2：ERG）mRNA及PSAmRNA荧光定量逆转录（FQ—RT）-PCR检测方法，TMPRSS2：ERGmRNA／PSAmRNA比值以2^-△ct。进行计算。同时，用该方法检测107例前列腺良性增生（BPH）患者和99例前列腺癌（PCa）患者尿液中的TMPRSS2：ERGmRNA／PSAmRNA比值，并分析该指标对PCa的诊断价值及与PCa临床分期、Gleason评分和PSA水平间的关系。结果PCa组TMPRSS2：ERGmRNA／PSAmRNA比值明显高于BPH组（0．101比0．000；U=2290．500，P〈0．01）；但其在PCa不同临床分期、Gleason评分、PSA组之间的差异均无统计学意义（X^2值分别为3．293、0．002、1．745，P均〉0．05）。TMPRSS2：ERGmRNA／PSAmRNA比值诊断PCa的ROC曲线下面积（AUC）为0．784（95％C1：0．707～0．860），当以3．0×10^-5。为临界值时，其诊断PCa的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和准确性分别为75．8％（75／99）、94．4％（101／107）、92．6％（75／81）、80．8％（101／125）和85．4％（176／206）；但其敏感度在PCa不同临床分期、Gleason评分、PSA组之间的差异均无统计学意义（X^2值分别为3．572、2．278、3．707，P均〉0．05）。结论尿液TMPRSS2：ERGmRNA／PSAmRNA比值在PCa诊断中具有较好的特异度和敏感度，有望成为PCa联合诊断的候选指标，但不能作为PCa病情监测和判断预后的指标。

丝氨酸蛋白酶Corin在心血管疾病中的应用

Corin是一种新兴的膜蛋白激酶，它可以使无活性的脑钠肽原转换成有活性的脑钠肽。而脑钠肽在调节血压和心脏功能方面发挥着重要作用，是心力衰竭的生物标志物。因此，Corin在降低血容量、血压、调节体液平衡，改善心功能方面发挥作用，很可能是心力衰竭或者其他心脏疾病的一种生物标志物。近几年研究发现，Corin与心力衰竭、急性冠状动脉综合征等心血管疾病的发生发展相关。在此，主要阐述Corin的生物学特性、检测方法及其在心血管疾病中的临床应用。

粪肠球菌丝氨酸蛋白酶基因突变株的构建和致病性研究

目的构建粪肠球菌丝氨酸蛋白酶基因(sprE)突变株,并研究sprE基因的功能。方法用自杀质粒pTX4577构建粪肠球菌基因重组自杀质粒pCQ001,通过体内同源重组,筛选获得sprE基因的突变株,体外研究不同温度和氧化条件对突变株生长能力的影响,通过小鼠腹膜炎和兔心内膜炎模型来研究突变株的毒力下降情况。结果经同源重组,利用卡那霉素抗性筛选,PCR、脉冲场电泳和Southern印迹进行鉴定获得sprE基因突变株,命名为*sprE,突变株在40℃的生长能力及在氧化条件下的存活率均明显低于野生株。在小鼠腹膜炎模型中,存活率明显高于野生株,差异有统计学意义(P<0.01),引起的兔心内膜炎也较野生株轻,差异有统计学意义(P<0.01)。结论sprE基因突变株*sprE构建成功,sprE基因在粪肠球菌致病中起重要作用,可能是粪肠球菌的毒力因子之一。

跨膜丝氨酸蛋白酶2-Ets融合基因与前列腺癌的关系

在前列腺癌中存在跨膜丝氨酸蛋白酶2（TMPRSS2）与Ets相关基因（Ets related-gene，ERG）、Ets变异体基因（Ets variant，ETV）1、4、5基因形成的融合基因，以TMPRSS2-ERG的发生率最高。截止目前共检测到20多种TMPRSS2-ERG转录产物，编码9种蛋白质。缺失是融合的主要机制。融合基因有助于前列腺癌的诊断、指导临床用药，且融合亚型、拷贝数及转录亚型均与疾病的预后相关。因此，除了血清前列腺特异抗原（PSA）、Gleason评分外，TMPRSS2-ERG融合基因有望成为另一个预后因子。

丝氨酸蛋白酶Omi／HtrA2与细胞凋亡

Omi／HtrA2是一种定位于线粒体膜间隙的丝氨酸蛋白酶，是一种凋亡调节因子，释放到线粒体外参与细胞凋亡。它有双重功能：一方面阻止X染色体连锁凋亡抑制蛋白，促进caspasc级联反应；另一方面作为丝氨酸蛋白酶诱导非caspase依赖的细胞凋亡。该文介绍了Omi／HtrA2的结构、体内分布以及参与细胞凋亡的机制和在相关疾病中的作用。

丙型肝炎病毒NS3／4A丝氨酸蛋白酶活性测定方法研究进展

丙型肝炎病毒（HCV）NS3／4A丝氨酸蛋白酶在病毒多聚蛋白体加工和RNA复制的过程中发挥着重要作用，是治疗HCV的理想靶点。因为NS3／4A丝氨酸蛋白酶在HCV多聚蛋白上负责四个位点的切割，所以可根据此特性设计其活性的测定方法。此文就目前应用于NS3／4A丝氨酸蛋白酶活性测定的方法进行综述，以期为筛选有效的抑制剂提供技术帮助。

跨膜丝氨酸蛋白酶4在胃癌中的表达及临床意义

目的:探讨跨膜丝氨酸蛋白酶4(TMPRSS4)在胃癌中的表达及其临床意义。方法:应用实时荧光定量PCR及Western blot检测33例新鲜胃癌及其癌旁组织中TMPRSS4的mRNA与蛋白表达,应用免疫组化法检测108例胃癌及其癌旁组织石蜡切片中TMPRSS4的表达,并分析TMPRSS4表达与临床病理特征及预后的关系。结果:胃癌组织中TMPRSS4 mRNA和蛋白的表达均明显高于癌旁组织(均P<0.05),TMPRSS4蛋白在胃癌组织中表达率明显高于癌旁组织(55.56%vs.18.52%)(P<0.05),其高表达与癌灶大小(≥5 cm)、浸润深度、TNM分期、淋巴结转移(≥3个)有关(均P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示TMPRSS4高表达患者5年总体生存明显差于低表达患者(P=0.035);COX多因素分析发现TMPRSS4蛋白高表达是影响胃癌患者预后的独立因素(P=0.045)。结论:TMPRSS4的表达与胃癌进展密切相关,可作为胃癌患者预后的指标之一。

胎牛血清促进色素上皮衍生因子在皮肤角质形成细胞和成纤维细胞中的表达

目的:探讨表皮角质形成细胞和真皮成纤维细胞中色素上皮衍生因子(PEDF)表达的影响因素。方法:体外培养角质形成细胞和成纤维细胞,并以10%FBS(胎牛血清)刺激,通过免疫荧光和Western blot检测PEDF的表达。结果:PEDF大多位于细胞浆中,但在细胞核中也有少量表达。细胞浆中PEDF并非均质型分布,而是呈细颗粒状集聚。10%FBS促进角质形成细胞和成纤维细胞中PEDF的集聚和表达,而且这一分布形式不受组胺和佛波肉豆蔻醋酸(PMA)的影响。结论:10%FBS促进角质形成细胞和成纤维细胞中PEDF的集聚和表达。

利用Cre/loxP系统构建无标记的htrA基因缺失的变链菌突变株

目的:利用Cre/loxP位点特异性重组系统构建口腔变异链球菌htrA基因缺陷株,并删除选择标记。方法:PCR扩增变链菌的htrA基因片段并克隆到pGEM-T-EasyTA载体。随后插入卡那霉素(Km)抗性基因盒(loxP-Km-loxP)并替换htrA基因的部分序列,使htrA基因失活,构建出htrA基因缺失的同源重组载体pIB△htrA-Km。将该质粒电转化变链菌标准株,抗生素筛选出发生同源重组的菌株,再用含cre基因的热敏质粒pCrePA电转化,删除Km抗性基因。在限制性温度下培养,消除质粒pCrePA,获得无标记的变链菌htrA基因缺陷株,经PCR及DNA测序鉴定。结果:PCR及DNA测序分析证明htrA基因的部分序列及Km抗性基因均被删除,该部位只留下一个loxP位点。结论:成功构建出了变链菌htrA基因缺失突变株,并删除了抗性标记,为进一步研究htrA基因缺失对变链菌致龋毒力的影响奠定了基础。

血清色素上皮源性因子与2型糖尿病胰岛素抵抗的关系

目的探讨血清色素上皮源性因子(sPEDF)与2型糖尿病(T2DM)胰岛素抵抗的关系。方法采用酶联免疫法检测176例受试者[糖调节正常组(NGT)52例,T2DM 124例]的sPEDF水平,同时检测空腹C肽(FCP)、2小时C肽(2h CP)糖化血红蛋白(HbA1c)、血糖、血脂、高敏C反应蛋白(hs-CRP)等生化指标的水平。结果 (1)T2DM组sPEDF水平显著高于NGT组[2893.45(1641.91～5533.13)μg/L vs 2672.95(1486.54～4039.13)μg/L(P<0.05)];(2)按sPEDF水平四分位分组,上四分位点的胰岛素抵抗指数(HO-MA-IR)值显著高于下四分位点者[1.90(1.60～2.70)vs 1.45(0.90～2.10)(P<0.01)];(3)单变量相关关系分析显示:sPEDF水平与HOMA-IR、SBP、DBP、FCP、hs-CRP呈显著正相关(r=0.206,0.210,0.170,0.213,0.221,P<0.05或0.01);(4)逐步多元回归显示HOMA-IR(β=0.174,P<0.05),SBP(β=0.189,P<0.05)是sPEDF的独立影响因素。结论中国人群中2型糖尿病患者sPEDF水平显著升高,与胰岛素抵抗指数显著独立相关。

慢性HBV感染者血清中人MASP水平检测的临床意义

目的研究甘露糖结合凝集素相关的丝氨酸蛋白酶(MASP)在病毒不同感染程度的乙肝患者中的表达及其临床意义。方法乙肝患者共140例,根据血清中丙氨酸转氨酶(ALT)和HBeAg的水平分为6组:A组(ALT正常,HBeAg阳性)、B组(ALT正常,HBeAg阴性)、C组(ALT轻度/中度升高,HBeAg阳性)、D组(ALT高度/重度升高,HBeAg阳性)、E组(ALT轻度/中度升高,HBeAg阴性)和F组(ALT高度/重度升高,HBeAg阴性)。采用ELISA检测甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶水平在健康对照组(即G组)及患者血清中的水平,并与ALT、AST、HBSAg、HBeAg、HBV-DNA作相关性分析。结果 F组的MASP水平显著高于A组、C组和D组,同时其显著低于B组和G组(P<0.05);D组的MASP水平显著低于其余6组(P<0.05);G组的MASP水平显著高于其余6组(P<0.05);MASP水平与ALT、AST、HBSAg、HBeAg、HBV-DNA的值存在相关性(P<0.05)。结论乙肝患者血清中MASP水平会降低,且其水平异常降低与患者肝损伤程度加重、病毒感染和复制水平加剧均有关系。

Matriptase与子宫内膜癌侵袭转移相关性的研究进展

侵袭和转移是恶性肿瘤的重要生物学特征之一,也是造成肿瘤患者死亡的主要原因。肿瘤的侵袭和转移是一个复杂的病理过程,涉及多种蛋白酶,包括基质金属蛋白酶和丝氨酸蛋白酶等。近来研究发现一种Ⅱ型跨膜丝氨酸蛋白酶Matriptase可通过激活尿激酶型纤溶酶原激活物、肝细胞生长因子/扩散因子、蛋白酶活化受体2和前列腺蛋白酶原促进肿瘤细胞的侵袭和转移,与多种恶性肿瘤,如乳腺癌、食管癌、前列腺癌、宫颈癌、卵巢癌、子宫内膜癌等的发生、发展密切相关。因而Matriptase有望成为恶性肿瘤一个新的诊断和治疗靶标。综述Matriptase与子宫内膜癌侵袭转移的相关性。

Matriptase与妇科恶性肿瘤关系的研究进展

肿瘤的侵袭和转移是一个复杂的病理过程,多种蛋白酶在这一过程中发挥着重要作用,包括基质金属蛋白酶及纤溶酶原系统等,其介导细胞外基质的降解及细胞膜蛋白的水解活化而促进肿瘤细胞的转移。新发现的一种丝氨酸蛋白酶——Matriptase是胰蛋白酶样Ⅱ型跨膜丝氨酸蛋白酶,其表达于许多上皮起源的正常及恶性肿瘤组织中。研究发现,Matriptase具有很强的癌基因潜能,可能参与肿瘤浸润和转移过程。综述Matriptase的基因结构、功能及其与妇科恶性肿瘤的关系。

一种新的具有纤溶活性的N-V蛋白酶酶学性质分析

目的：测定N-V蛋白酶的最适反应温度、最适反应pH值及酶促反应动力学常数（Km），并对其进行蛋白酶分类。方法：利用纤维蛋白平板法测定N-V蛋白酶最适反应温度、最适反应pH值。以卜亮氨酸-p-硝基苯胺酯（Leu-pNA）作为底物，测定N-V蛋白酶的Km值。利用卜反式环氧琥珀酰亮氨酰氨基（4-胍基）丁烷（E64）、苯甲基磺酰氟（PMSF）、1，10-邻菲哕啉、抑肽酶作为抑制剂对N-V蛋白酶的纤溶活性进行抑制作用，确定其蛋白酶分类。结果：N-V蛋白酶最适反应温度为50℃，最适反应pH值为8～9，Km值为1．97×10^-3mol·L^-1，PMSF有效抑制N-V蛋白酶的纤溶活性（P〈O．01），而E64、1，10-邻菲哕啉啉、抑肽酶对其活性均无明显抑制作用（P〉0．05）。结论：N-V蛋白酶属于丝氨酸蛋白酶类。