新型丝氨酸蛋白酶SNC19在不同细胞系中表达及其对细胞生物学行为的影响

目的 :研究新型丝氨酸蛋白酶SNC19编码蛋白的功能及可能在肿瘤转移过程中的作用。方法 :制备针对它胞外区的单克隆抗体 ;免疫印迹法检测在不同细胞系中该蛋白的表达 ;Northernblot检测在不同上皮来源细胞系中其mRNA的表达 ;用单抗阻断法研究其对细胞迁移能力和细胞粘附能力的影响。结果 :自制抗体做West ernblot显示在BCAP37、COLO2 0 5、SW4 80中该蛋白存在两种形式 ,大小为 12 0kD和 6 0kD左右 ,而在SW6 2 0中只存在 6 0kD一种形式 ;Northernblot显示该蛋白在大部分细胞系中均有较高表达 ,大小为 3 4kd左右 ,mRNA水平只有一种形式 ,而在卵巢癌细胞系OV、舌癌细胞系TCA8113、口腔表皮样癌细胞系KB及胃癌细胞系SGC790 1中未检测到其表达 ;单抗阻断法发现实验组SW4 80 (anti-SNC19mAb 2 0mg/L)迁移速度明显慢于对照组 ,在SW4 80 /SW4 80同质粘附和SW4 80 /NIH3T3异质细胞粘附实验中 ,在实验的初始阶段 ,实验组SW4 80 (anti -SNC19mAb 2 0mg/L) /SW4 80、SW4 80 (anti-SNC19mAb 2 0mg/L) /NIH3T3粘附率明显大于对照组 ,但随着时间的推移这种差异逐渐缩小。结论 :SNC19编码蛋白与同质、异质细胞之间的粘附以及细胞的迁移运动密切相关。作为一种新型丝氨酸蛋白酶 ,SNC19编码蛋白可能与细胞迁移、组织重建甚?

刺参体壁胰/类胰丝氨酸蛋白酶的性质及其在自溶中的作用

以刺参体壁中丝氨酸蛋白酶为研究对象,对其部分酶学性质及其与刺参自溶的关系进行研究。采用Tris-HCl缓冲溶液提取、硫酸铵盐析、透析及超滤获得刺参体壁粗酶液。结果显示,以Boc-Phe-Ser-Arg-MCA为底物时,粗酶液的丝氨酸蛋白酶活力最高;以其为底物,测得该类蛋白酶在pH值为6.2和8.5时呈现较强酶活力峰值,两者最适温度范围均为50~55℃;Cu^2+、Fe^3+、Pb^2+、Zn^2+强烈抑制该酶的活性,Ca^2+可提高该酶活力;邻菲咯啉、乙二胺四乙酸以及半胱氨酸修饰剂均能够部分抑制该酶活力。4-(2-氨乙基)苯磺酰氟盐酸盐、苯甲基磺酰氟、Na-对甲苯磺酰-L-苯丙氨酸氯甲基酮、(3S)-7-氨基-1-氯-3-磺酰氨基-2-庚酮盐酸盐、大豆胰蛋白酶抑制剂能够显著抑制蛋白酶的活力以及自溶过程中可溶性蛋白、三氯乙酸可溶性多肽的生成。上述结果表明,刺参体壁中存在至少2种具有一定的金属离子依赖性的胰/类胰丝氨酸蛋白酶,其活性中心或底物识别位点可能有半胱氨酸的参与,该类蛋白酶很可能参与刺参自溶过程中蛋白质的降解。

胰腺癌胰液差异蛋白质丝氨酸蛋白酶2在胰腺癌组织和细胞株中的表达

目的研究胰腺癌胰液差异蛋白质丝氨酸蛋白酶2(PRSS2)在胰腺癌组织和细胞株中的表达,为临床胰腺癌的早期诊断及治疗提供新靶点。方法在4株胰腺癌细胞株、20例胰腺癌组织及20例正常胰腺组织中,以PCR法检测PRSS2 mRNA的表达,并分析其与胰腺癌临床特征之间的关系。结果PRSS2在正常胰腺、胰腺癌组织和胰腺癌细胞株中均有表达,在胰腺癌和正常组织中的相对表达量(RQ值)分别为33.76(6.47,107.98)和3.74(0.96,28.83),前者明显高于后者(P<0.05);PRSS2在癌组织中的表达与肿瘤分化程度、肿瘤大小、肿瘤淋巴结转移、血清CA19-9水平、血清CEA水平均无相关性。结论胰腺癌胰液中的PRSS2可作为胰腺癌诊断的潜在肿瘤标志物;从胰液筛查差异蛋白质作为胰腺癌早期诊断的肿瘤标志物是可行的。

血浆丝氨酸蛋白酶-Corin在慢性心力衰竭患者中的表达及临床意义

利用酶联免疫吸附试验方法检测138例慢性心力衰竭患者和200例健康体检者的血浆可溶性Corin的表达水平,分析其与慢性心力衰竭患者疾病严重程度及近期预后的关系。血浆可溶性Corin水平在慢性心力衰竭患者中明显降低,其与慢性心力衰竭患者疾病严重程度及近期预后密切相关。

血清抗环瓜氨酸肽抗体检测在类风湿关节炎诊断中的价值

目的分析抗环瓜氨酸肽(抗-CCP)抗体检测在类风湿关节炎诊断中的应用价值。方法对2011年1月至2012年7月收治的80例类风湿关节炎患者、75例非类风湿关节炎患者及50例健康体检者进行血清抗-CCP抗体和类风湿因子的检测,比较三组受检者血清抗-CCP抗体和类风湿因子水平的差异。结果抗-CCP抗体联合类风湿因子检测的灵敏度高于单独检测类风湿因子,差异有统计学意义(P<0.05)。抗-CCP抗体的特异性显著高于类风湿因子,差异有统计学意义(P<0.05)。结论抗-CCP抗体对诊断类风湿关节炎具有较好的灵敏度与特异性,是诊断类风湿关节炎的特异性血清学指标。血清抗-CCP抗体联合类风湿因子检测有助于类风湿关节炎的早期诊断与病情预测。

神经系统显著表达的丝氨酸/精氨酸富集蛋白1在小鼠大脑发育过程中的表达与分布

目的：研究神经系统显著表达的丝氨酸/精氨酸富集蛋白1（NSSR1）在中枢神经系统中的表达情况,比较在小鼠发育过程中NSSR1在中枢神经系统中的表达差异.方法：收集不同胎龄的胎鼠中枢神经系统样本以及不同生长时期的小鼠大脑样品,通过蛋白质印迹法检测NSSR1蛋白在各样品中的表达量,通过免疫组织化学法检测NSSR1在小鼠大脑不同部位发育过程中的表达分布.结果：小鼠中枢神经系统中NSSR1的蛋白表达量在胚胎期9~14 d期间显著增加,其相对表达量从0.186增加至0.445,在出生后则一直维持着比较高水平的表达.免疫组织化学法分析结果显示,在胚胎期12 d的胎鼠中,NSSR1蛋白表达集中在室管膜外侧的套层和边缘层中,在室管膜层中未见表达.在新生小鼠和成年小鼠大脑中NSSR1的表达存在差异：在大脑海马中,成年小鼠NSSR1的表达显著增强,而新生小鼠NSSR1的表达较低;在小脑中,成年大鼠的NSSR1广泛分布在小脑皮质包括浦肯野氏细胞、颗粒细胞等神经元细胞中,而新生鼠的NSSR1主要在浦肯野氏细胞中表达.结论：NSSR1在小鼠大脑中的表达受到发育调控.

丝氨酸蛋白酶家族相关成员与肿瘤的关系

DPPⅣ和Seprase是丝氨酸蛋白酶家族成员,结构上具有高度同源性,可能在肿瘤浸润和转移中发挥作用。关于DPPⅣ和Seprase的研究仍处于起步阶段,其在肿瘤中的浸润转移作用、相关机制和临床价值有待进一步研究。综述有关DPPⅣ和Seprase的结构和功能研究进展,为DPPⅣ和Seprase有望成为肿瘤治疗的靶点提供理论基础。

L-精氨酸联合整蛋白复方制剂对食管癌根治术后患者免疫功能及肿瘤标志物水平的影响

【目的】探讨L-精氨酸联合整蛋白复方制剂对食管癌根治术后患者免疫功能及肿瘤标志物水平的影响。【方法】在本院行食管癌根治术的98例患者,随机分为观察组与对照组,每组各49例。观察组患者在术后接受L-精氨酸联合整蛋白复方制剂治疗,对照组患者在术后给予葡萄糖盐水肠内营养。比较两组患者治疗前后的T淋巴细胞亚群(CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+))、癌胚抗原(CEA)、糖类抗原19-9(CA19-9)、糖类抗原125(CA125)、细胞角蛋白19血清片段21-1(CYFRA21-1)、白蛋白(ALB)、前白蛋白(PA)、转铁蛋白(TRF)、尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、丙氨酰氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸转移酶(AST)水平。【结果】两组治疗后CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)显著高于治疗前,CD8^(+)显著低于治疗前(P<0.05),观察组治疗后CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)显著高于对照组,CD8^(+)显著低于对照组(P<0.05);两组治疗后CEA、CA19-9、CYFRA21-1、CA125显著低于治疗前,且观察组显著低于对照组(P<0.05);两组治疗后ALB、PA、TRF显著高于治疗前,且观察组显著高于对照组(P<0.05);两组治疗前、治疗后及治疗前后BUN、Scr、ALT、AST比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。【结论】L-精氨酸联合整蛋白复方制剂可改善食管癌根治术后患者的营养状态和免疫功能,降低肿瘤标志物水平。

大鼠继发性脊髓损伤中半胱氨酸蛋白酶水平的变化

目的:通过半胱氨酸蛋白酶(Calpain)的活性变化探讨其在急性脊髓损伤中的作用。方法:将18只雌性SD大鼠随机分为Calpain高选择性抑制剂组(EST)、二甲基亚砜赋形剂对照组(DMSO)和空白对照组(Sham),每组6只。3组大鼠通过Allen′s方法(50gcm)制作急性脊髓损伤模型后,在15min内,EST组给予EST(1mg·kg-1),DMSO组给予1.5%DMSO,Sham组仅行椎板切除。24h后每组收集脊髓标本(长度约5.0cm),分成均等的5份:S1远头侧、S2近头侧、S3损伤段、S4近尾侧和S5远尾侧。通过Westernblotting对5份样品中的相对分子质量为68000神经丝蛋白(NFP)进行分析。结果:S1～S5段EST组和Sham组NFP条带密度值显著高于DMSO组(P<0.005),EST组与Sham组比较差异无显著性(P>0.05);Westernblotting条带分析S3段EST组NFP条带密度值较DMSO组高9.55,S4段高11.66(P<0.01)。结论:Calpain在急性脊髓损伤中活性显著增高,加重脊髓损伤。

半胱氨酸蛋白酶激动剂、X连锁凋亡抑制蛋白、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3在鼻腔鼻窦鳞状细胞癌中的表达

现代肿瘤学认为肿瘤的发病与细胞凋亡数量的减少密切相关,第二个线粒体衍生的半胱氨酸蛋白酶激动剂（second mitochondria-derived activator of caspase,Smac）、X连锁凋亡抑制蛋白（X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（cysteine containing aspartate specific protease,caspase-3）在细胞凋亡过程中起着重要的调控及效应作用。本研究采用免疫组化方法观察三者在鼻腔鼻窦鳞状细胞癌（nasal squamous cellcarcinoma,NSCC）及不同病理分期中的表达情况。

HtrA丝氨酸肽酶1基因新突变导致的常染色体隐性遗传性脑动脉病伴皮质下梗死及白质脑病一例

目的总结1例HtrA丝氨酸肽酶1（HTRA1）基因新突变导致的常染色体隐性遗传性脑动脉病伴皮质下梗死及白质脑病（CARASIL）患者临床特点。方法患者为34岁女性，下肢肌肉痉挛疼痛16年，腰痛、头痛、脱发5年，右侧轻偏瘫5个月，尿、便潴留1个月。脊椎MRI示颈椎和腰椎退行性变和椎间盘突出。头MRI示广泛脑白质损害、多发腔隙性梗死灶。患者进行腓肠神经和皮肤活体组织检查。患者及其父母和2个弟弟均进行了HTRA1基因的直接测序，患者进行Notch3基因直接测序，以100名健康者作为对照。结果光镜下可见小动脉内弹力板不连续和内膜增厚，毛细血管基底膜增厚，电镜下呈现细颗粒样改变。患者HTRA1基因第2号外显子存在c．524T〉A纯合突变，其父母及2个弟弟存在c．524T〉A杂合突变。未发现Notch3基因突变。100名健康对照无此突变。结论HTRA1基因c．524T〉A新突变导致的CARASIL可以伴随偏头痛和尿、便潴留。

植物细胞程序性死亡中的类胱天蛋白酶研究进展

胱天蛋白酶(caspases)在动物细胞程序性死亡(programmed cell death,PCD)的起始、执行以及信号转导阶段起着关键作用,目前在植物中也发现有类胱天蛋白酶(caspase-like proteases,CLPs)的存在,并确认液泡加工酶(VPEs)、metacaspases和丝氨酸内肽酶(sapases)具有CLPs的作用,并证实CLPs参与植物的生长发育、抗病性及胁迫诱导的细胞程序性死亡等.本文对植物CLPs活性、生化结构及生理作用等方面的研究进展进行综述,并与动物caspases进行比较,为今后CLPs活性调节、作用方式及其在植物细胞程序性死亡中的作用等方面的研究提供参考.

一种新的具有纤溶活性的N-V蛋白酶酶学性质分析

目的：测定N-V蛋白酶的最适反应温度、最适反应pH值及酶促反应动力学常数（Km），并对其进行蛋白酶分类。方法：利用纤维蛋白平板法测定N-V蛋白酶最适反应温度、最适反应pH值。以卜亮氨酸-p-硝基苯胺酯（Leu-pNA）作为底物，测定N-V蛋白酶的Km值。利用卜反式环氧琥珀酰亮氨酰氨基（4-胍基）丁烷（E64）、苯甲基磺酰氟（PMSF）、1，10-邻菲哕啉、抑肽酶作为抑制剂对N-V蛋白酶的纤溶活性进行抑制作用，确定其蛋白酶分类。结果：N-V蛋白酶最适反应温度为50℃，最适反应pH值为8～9，Km值为1．97×10^-3mol·L^-1，PMSF有效抑制N-V蛋白酶的纤溶活性（P〈O．01），而E64、1，10-邻菲哕啉啉、抑肽酶对其活性均无明显抑制作用（P〉0．05）。结论：N-V蛋白酶属于丝氨酸蛋白酶类。

研究鉴别原发性肺腺癌与转移性肺肿瘤的一组免疫组化标志物

目的:探讨原发性肺腺癌和转移性肺肿瘤中天门冬氨酸蛋白酶(Napsin A)、肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)、甲状腺转移因子-1(TTF-1)临床病理学意义。方法:用免疫组化技术Super PicTureTM Polymer二步法检测Napsin A、SP-A、TTF-1在76例原发性非小细胞肺癌和40例转移性肺肿瘤中的表达水平。结果:Napsin A与原发性肺腺癌的分化程度呈正相关(P<0.05)。Napsin A、SP-A和TTF-1在原发性非小细胞肺癌中的阳性表达与其分型密切相关(均P<0.05)。Napsin A比SP-A、TTF-1具有较高的敏感性和特异性。结论:Napsin A是原发性肺腺癌发生发展过程中较早出现的一种较为敏感的肿瘤标志物,其表达强度与肿瘤的恶性程度密切相关,而且联合使用SP-A、TTF-1有助于鉴别原发性肺腺癌与转移性肺肿瘤。

选择性免疫蛋白酶体抑制剂研究进展

免疫蛋白酶体与血液肿瘤、感染性疾病、自身免疫性疾病、中枢神经系统疾病等密切相关,这些疾病均呈现免疫蛋白酶体高表达。免疫蛋白酶体抑制剂可通过抑制相关细胞诱导因子的生成和自身反应性T细胞的活性来阻断免疫蛋白酶体的表达,从而治疗相关疾病。选择性免疫蛋白酶体抑制剂研发的关键是针对免疫型蛋白酶体的高度选择性,兼顾蛋白酶体上三个活性亚基的活性水平,才能在达到良好疗效的同时减少不良反应。本文介绍了免疫蛋白酶体的结构、功能,以及与多种疾病之间的关系,针对目前已报道的环氧酮肽类共价结合、其他短肽类共价结合、短肽类非共价结合选择性免疫蛋白酶体抑制剂的结构、活性及发展现状作一综述。

丝氨酸肽酶基因变异和STOX1基因多态性与淮安地区汉族孕妇发生子痫前期的相关性

目的 探讨丝氨酸肽酶（serine peptidase）基因（即CORIN基因）变异和STOX1（storkhead box 1）基因多态性与子痫前期发病的相关性. 方法 选择2008年6月至2013年4月在淮安市妇幼保健院产科住院分娩的淮安地区汉族孕妇共712例,其中子痫前期孕妇395例（子痫前期组）,健康足月孕妇31 7例（对照组）.采用基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱技术对CORIN基因Lys317Glu、Ser472Gly和R539C位点的变异情况,及STOX1基因Try 153His和Glu608Asp单核苷酸多态性进行基因分型检测.组间基因频率和基因型频率比较采用x2检验.结果 在子痫前期组和对照组中,CORIN基因Lys317Glu位点均为AA基因型,Ser472Gly位点也均为AA基因型,R539C位点均为GG基因型,未检测到变异.子痫前期组STOX1基因Try153HisG等位基因频率为89.4％（706/790）,A等位基因频率为10.6％（84/790）,与对照组[分别为90.9％（576/634）和9.1％（58/634）]差异无统计学意义（x2=0.864,P=0.353）;GG、AG和AA基因型频率2组差异也无统计学意义[80.0％ （316/395）与82.3％ （261/317）、18.7％（74/395）与17.0％ （54/317）、1.3％（5/395）与0.6％（2/317）,x2=1.122,P=0.571].STOX1基因Glu608Asp等位基因频率与基因型频率在子痫前期组与对照组间差异也均无统计学意义（x2值分别为0.596和0.921,P值均＞0.05） 结论 CORIN基因3个位点的基因变异和STOX1基因2个位点的多态性可能与淮安汉族人群散发性子痫前期的发病无关.

分化抑制因子-1和磷酸化Akt在鼻咽癌组织中的表达及意义

目的研究分化抑制因子-1(inhibitor ofdifferentiation or DNA binding 1,Id1)和磷酸化Akt(p-Akt)在鼻咽癌组织中的表达情况及其临床意义。方法采用免疫组织化学方法检测81例NPC组织、25例鼻咽炎症组织中Id1、p-Akt蛋白的表达情况。结果 Id1、p-Akt蛋白在NPC组织中阳性表达率分别为75.3%、81.5%,与鼻咽炎症组织比较,差异有统计学意义。Id1蛋白在NPC中的表达与T分级相关,且Id1、p-Akt蛋白在NPC中的表达均与淋巴结转移、临床分期相关,而与年龄、性别、治疗后复发转移无明显相关性。Id1、p-Akt蛋白在NPC组织中的表达呈显著正相关。生存分析显示Id1、p-Akt的表达均与NPC患者5年生存率相关。Cox回归分析显示,p-Akt是影响NPC预后的独立危险因素。结论 Id1、p-Akt可能在NPC发生发展过程中起重要作用,二者有望成为判断NPC患者预后的分子生物学指标。

胰岛素信号通路磷脂酰肌醇-3激酶／丝氨酸苏氨酸蛋白激酶对海马神经元β-淀粉样前体蛋白裂解酶1表达的影响

目的通过胰岛素和磷脂酰肌醇-3激酶（P13K）抑制剂渥曼青霉素（wortmannin，WORT）对P13K／丝氨酸苏氨酸蛋白激酶（P13K／Akt）信号通路的激活和抑制作用，观察P13K／Akt信号通路对海马神经元β-淀粉样前体蛋白裂解酶1（BACEI）表达的影响。方法40只sD大鼠随机分为空白对照组、假手术组、胰岛素组和WORT组（每组10只），海马立体定向注射胰岛素和PDK抑制剂WORT。免疫组织化学和Westernblot法检测P13K／Akt信号传导相关蛋白以及BACEI的表达水平。结果注射胰岛素的海马P13K信号通路下游信号分子较对照组：Akt表达增加（0．952±O．060与0．835±0．029，t=4．9150，P=0．0001），Aktser473位点磷酸化（pAkt）水平上调（0．800±O．075与0．657±0．025，t：4．5598，P=0．0002），糖原合成激酶-3α（GSK-3α）磷酸化水平降低（0．604±0．062与0．726±0．041，t=3．5871，P=0．0018），而成熟的BACEl及其裂解产物p分泌酶C末端（母-CTF）表达下调。WORT组的P13K下游信号分子Akt、pAkt表达明显被抑制，磷酸化GSK-3仪表达增加，同时成熟的BACE1（1．004±0．096）和β-CTF（1．031±0．048）的表达较对照组（分别0．498±O．064，0．786±O．101）上调（分别t=11．5980，P=0．0000；t=4．2194，P=0．0004）。结论胰岛素信号通路P13K／Akt可以调节BACE1的表达和活性并参与阿尔茨海默病的发病机制。