金黄色葡萄球菌丝氨酸类蛋白酶B的表达及活性鉴定

目的:以金黄色葡萄球菌基因组DNA为基础,在枯草芽孢杆菌中得到具有剪切功能的金黄色葡萄球菌丝氨酸类蛋白酶B。方法:以金黄色葡萄球菌基因组DNA为模板,PCR扩增得到SplB基因,同源重组到表达载体pHTSHIS上,再转化枯草芽孢杆菌;优化诱导条件发酵枯草芽孢杆菌,离心后超滤浓缩上清液,再经镍柱分离纯化;利用SDS-PAGE、Lowry法对蛋白的相对分子质量、浓度等进行分析,对蛋白的酶切活性进行鉴定。结果:金黄色葡萄球菌基因组DNA经PCR扩增得到与预计大小相符的DNA片段,通过同源重组构建了表达载体pHTS-SplB-His;选取诱导前菌液D_(600nm)为2.0、IPTG浓度为0.5 mmol/L、诱导4 h的最优条件发酵枯草芽孢杆菌,表达大量金黄色葡萄球菌丝氨酸类蛋白酶B;蛋白浓缩后,经镍柱分离纯化得到纯度较高且具有剪切功能的金黄色葡萄球菌丝氨酸类蛋白酶B。结论:采用枯草芽孢杆菌进行发酵表达,可提高金黄色葡萄球菌丝氨酸类蛋白酶B的表达量,并且能够得到具有剪切功能的蛋白。本研究可为外源蛋白在枯草芽孢杆菌中的发酵技术提供重要参考。

SERPINB3、β-catenin和VEGF—C在宫颈癌中的表达

目的探讨SERPINB3、β-连环蛋白（β-catenin）及血管生成因子（VEGF—C）在宫颈癌中的表达情况。方法应用量子点技术、免疫组织化学sP法，及Western印迹技术检测30例正常宫颈组织和30例宫颈癌组织中SERPINB3、β-catenin和VEGF—C的表达情况。结果正常宫颈组织中β-catenin在细胞膜阳性表达，SERPINB3表达阴性。宫颈癌组织中β-catenin主要在细胞核和／或细胞质异位表达，且呈强阳性．SERPINB3表达亦为强阳性。VEGF—C定位于细胞膜，在宫颈癌组织中阳性表达。结论研究发现SER—PINB3、Wnt／β-catenin在宫颈癌组织中异常表达，且SERPINB3可能参与了宫颈癌发生发展中的Wnt/β-catenin／VEGF—C通路的调节。