汉黄芩素调节磷脂酰肌醇3激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶/核因子κB信号通路对慢性阻塞性肺疾病大鼠辅助性T细胞17/调节性T细胞平衡的影响

目的探讨汉黄芩素(Wog)调节磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)/核因子κB(NF-κB)信号通路对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)平衡的影响。方法2022年8-12月,大鼠采用随机数字表法分为Model组、低剂量Wog组(Wog-L组,50 mg/kg)、高剂量Wog组(Wog-H组,100 mg/kg)、阳性药物氨茶碱组(Ami组,2.3 mg/kg)、IGF-1(PI3K激活剂)组(1.33 mg/kg)、Wog-H+IGF-1组(100 mg/kg+1.33 mg/kg)、对照组(CK组),每组12只。除CK组外,其他组大鼠均需利用烟熏法联合气管滴注脂多糖(LPS)的方法构建COPD模型,建模成功24 h后,进行给药处理,每天1次给药,持续4周。检测呼气峰流量(PEF)、每分钟通气量(MV)、吸气峰流量(PIF);流式细胞术检测外周血中Th17/Treg;HE染色检测肺组织病理;酶联免疫吸附法检测大鼠肺组织中白细胞介素(IL)-17、IL-10水平;蛋白质印迹法检测肺组织中维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)、叉头框蛋白P3(Foxp3)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、磷酸化Akt(p-Akt)、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)蛋白。结果与CK组比较,Model组大鼠PEF(12.56±0.47比8.72±0.39)、PIF(9.35±0.32比7.24±0.17)、MV(132.26±5.78比96.63±3.28)、Treg(31.18±2.62比15.52±1.01)比例、IL-10(23.35±1.16比8.85±0.27)明显降低(均P<0.05);Th17(3.14±0.13比18.86±1.67)比例、Th17/Treg(0.10±0.01比1.22±0.11)、肺泡间隔(33.36±1.48比49.78±1.73)、气道炎症评分(0比4.56±0.23)及IL-17(75.83±3.60比185.56±8.62)水平明显升高(均P<0.05)。与Model组比较,Wog-L组、Wog-H组PEF(9.66±0.40,11.49±0.51)、PIF(8.28±0.19,9.03±0.22)、MV(105.54±4.11,126.67±5.72)、Treg(19.93±1.18,27.73±2.05)比例、IL-10(11.56±0.33,20.72±0.59)水平明显升高(均P<0.05);Th17(3.14±0.13比18.86±1.67)比例、Th17/Treg(0.10±0.01比1.22±0.11)、肺泡间隔(43.45±1.26,35.78±1.12)、气道炎症评分(3.75±0.17,0.86±0.07)、IL-17(162.27±7.14,103.35±4.33)水平明显降低(均P<0.05)。与CK组比较,Model组大鼠RORγt(0.15±0.01比1.34±0.11)、p-PI3K(0.22±0.01比0.86±0.07)、p-Akt(0.18±0.01比0.75±0.06)、p-NF-κB p65(0.11±0.01比0.69±0.06)蛋白表达升高,Foxp3(1.45±0.27比0.35±0.02)蛋白表达降低(均P<0.05)。与Model组相比,Wog-L组、Wog-H组RORγt(1.08±0.10,0.36±0.02)、p-PI3K(0.71±0.06,0.35±0.03)、p-Akt(0.62±0.06,0.28±0.02)、p-NF-κB p65(0.52±0.05,0.26±0.02)蛋白表达明显降低,Foxp3(0.57±0.04,1.13±0.09)蛋白表达明显升高(均P<0.05)。Wog-H组与Ami组大鼠上述各指标水平近似,均差异无统计学意义(P>0.05)。IGF-1逆转了高剂量Wog对COPD大鼠Th17/Treg的影响。结论Wog促进COPD大鼠Th17/Treg平衡的机制可能与下调PI3K/Akt/NF-κB通路有关。

血清3-硝基酪氨酸、丝氨酸蛋白酶抑制剂B1水平对老年急性缺血性卒中患者静脉溶栓预后的预测价值

目的探讨及研究血清3-硝基酪氨酸(3-nitrotyrosine,3-NT)、丝氨酸蛋白酶抑制剂B1(serine protease inhibitors B1,SerpinB1)水平对老年急性缺血性卒中患者静脉溶栓预后的预测价值。方法前瞻性连续纳入2019年1月—2021年1月延安大学附属医院神经内科收治的老年(≥65岁)急性缺血性卒中静脉溶栓患者,根据患者90 dmRS评分分为预后良好组(0~2分)和预后不良组(>2分)。收集患者基线临床资料、溶栓前血清3-NT和SerpinB1水平,采用多因素logistic回归分析不良预后的危险因素。结果共纳入80例接受静脉溶栓治疗的老年急性缺血性卒中患者,其中预后良好组45例,预后不良组35例。预后不良组SerpinB1水平高于预后良好组[(75.24±8.54)ng/mL vs.(57.32±5.68)ng/mL,P<0.001];预后不良组3-NT水平高于预后良好组[(75.67±11.22)ng/mL vs.(61.68±11.54)ng/mL,P<0.001]。ROC分析显示,当3-NT截断值为70.23 ng/mL时,评估老年急性缺血性卒中患者静脉溶栓预后不良的敏感度为72.54%,特异度为73.28%;SerpinB1截断值为68.17 ng/mL时,评估老年急性缺血性卒中患者静脉溶栓不良预后的敏感度为66.55%,特异度为78.64%。多因素回归分析显示,高NIHSS评分(OR=6.404,95%CI 3.993~10.271,P<0.001)、SerpinB1高水平(OR=26.154,95%CI 11.460~59.690,P<0.001)、3-NT高水平(OR=12.769,95%CI 4.635~35.174,P<0.001)是老年急性缺血性卒中患者静脉溶栓预后不良的危险因素。结论基线血清3-NT、SerpinB1水平在老年急性缺血性卒中患者静脉溶栓的预后评估中具有一定价值。

HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶和NS5B RNA聚合酶抑制剂的临床研究进展

丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)NS3/4A丝氨酸蛋白酶和NS5B RNA依赖的RNA聚合酶是病毒蛋白前体加工成熟和复制过程中十分重要的两个酶,是抗HCV治疗的理想靶点.近年来,关于HCV NS3/4A蛋白酶和NS5B RNA聚合酶抑制剂的研究是抗HCV研究最为活跃的方向,本文综述了他们在临床试验中的最新研究进展.

肿瘤坏死因子α诱导蛋白3和乳腺丝氨酸蛋白酶抑制剂表达与鼻咽癌组织放疗敏感的相关性

目的检测肿瘤坏死因子α诱导蛋白3(TNFAIP3)和乳腺丝氨酸蛋白酶抑制剂(Maspin)在放疗敏感及放疗抗拒鼻咽癌中的表达差异,探讨该表达差异与放疗抗拒发生发展的关系。方法采用TNFAIP3和Maspin多点标记的DIG探针原位杂交方法检测TNFAIP3 mRNA和Maspin mRNA在放疗敏感及放疗抗拒鼻咽癌中的表达。结果放疗敏感和放疗抗拒鼻咽癌中,TNFAIP3 mRNA中度和强阳性表达率分别为27.50%和48.33%(P=0.037),Maspin mRNA中度和强阳性表达率分别为67.50%和46.67%(P=0.040)。放疗抗拒鼻咽癌中,TNFAIP3 mRNA中度和强阳性表达率与TNM分期呈正相关(P=0.005),有远处转移者表达率显著高于无远处转移者(70.00%比37.50%,P=0.018);Maspin mRNA中度和强阳性表达率与TNM分期呈正相关(P=0.039),与T分期亦呈正相关(P=0.021),有远处转移者表达率显著高于无远处转移者(65.00%比37.50%,P=0.044)。结论 TNFAIP3可能参与放疗抗拒鼻咽癌的发生和发展,Maspin可能参与放疗抗拒鼻咽癌的侵袭与转移。

冠心病患者血清脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂与炎性因子的相关性

目的探讨冠心病(CHD)患者血清脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂(vaspin)与炎性因子的关系。方法选择CHD患者139例,健康对照者52例,依据相关诊断标准将CHD患者分为稳定性心绞痛(SAP)组54例、不稳定性心绞痛(UAP)组48例、急性心肌梗死(AMI)组37例,同时根据冠状动脉病变支数将CHD患者分为1支病变组60例、2支病变组46例、≥3支病变组33例。采用ELISA法测定血清中vaspin、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、IL-10、1,25二羟维生素D3〔1,25(OH)_2D_3〕,并做统计学处理。结果 CHD组vaspin、1,25(OH)_2D_3低于健康对照组,TNF-α、IL-6、IL-10高于健康对照组(P<0.05)。按临床类型分组:AMI组vaspin、1,25(OH)_2D_3低于SAP组、UAP组,TNF-α、IL-6、IL-10高于SAP组、UAP组(P<0.05);UAP组vaspin、1,25(OH)_2D_3低于SAP组,TNF-α、IL-10高于SAP组,(P<0.05)。将CHD患者按照血管病变的情况分组:≥3支病变组vaspin、1,25(OH)_2D_3低于1支病变组和2支病变组,TNF-α、IL-6、IL-10、Gensini积分高于1支病变和2支病变组(P<0.05)。2支病变组vaspin、1,25(OH)_2D_3低于1支病变组,(TNF)-α、(IL)-10、Gensini积分高于1支病变组,(P<0.05)。Spearman相关分析显示,在CHD组血清vaspin与BMI、1,25(OH)_2D_3呈正相关(r值分别为0.462、0.214,P<0.05),与TNF-α、IL-6、IL-10呈负相关(r值分别为-0.320、-0.238、-0.321,P<0.05)。根据血管病变支数分组:Gensini积分与vaspin、1,25(OH)_2D_3呈负相关(r值分别为-0.538、-0.242,P<0.05),与TNF-α、IL-6、IL-10呈正相关(r值分别为0.385、0.265、0.341,P<0.05)。结论 CHD患者具有较低浓度的vaspin,vaspin含量与炎性因子相关,与CHD的血管病变严重程度有关。

妊娠期糖尿病患者血清β细胞营养因子、丝氨酸蛋白酶抑制剂B1水平及其与血脂代谢、胰岛素抵抗的相关性

目的研究妊娠期糖尿病(GDM)患者血清β细胞营养因子(β-trophin)、丝氨酸蛋白酶抑制剂B1(SerpinB1)水平及其与血脂代谢、胰岛素抵抗(IR)的相关性。方法选取2018年6月至2020年5月我院收治的220例GDM患者作为GDM组,同期入院的120例非GDM孕妇作为对照组。比较两组的β-trophin、SerpinB1、FPG、INS、TC、LDL、TG水平及HOMA-IR、HOMA-β。使用Pearson法分析β-trophin、SerpinB1与GDM患者血脂代谢、IR的相关性。结果GDM组的β-trophin、SerpinB1、FPG、INS、TC、TG水平及HOMA-IR、HOMA-β均明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。两组的LDL水平无显著差异(P>0.05)。GDM患者中,β-trophin与TC、TG呈明显正相关,与HOMA-β呈明显负相关(P<0.05);SerpinB1与LDL、TG呈明显正相关,与HOMA-IR呈明显负相关(P<0.05)。结论GDM患者中β-trophin、SerpinB1水平异常增高,其中β-trophin水平与血脂代谢明显相关,但与IR无关,SerpinB1水平与血脂代谢和IR均明显相关。

妊娠期糖尿病患者血清内脏脂肪组织源性丝氨酸蛋白酶抑制剂检测及意义

目的探讨内脏脂肪组织源性丝氨酸蛋白酶抑制剂(Vaspin)与妊娠期糖尿病(GDM)的关系。方法严格按照入组及排除标准,设置孕前肥胖GDM组84例,孕前正常GDM组84例,84名糖耐量正常(NGT)健康孕妇为对照组。检测3组空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)及血清Vaspin水平,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。以单因素相关分析、多元逐步回归分析统计分析相关性及线性关系。结果 1 GDM组中FPG、FINS及HOMA-IR均明显高于健康对照组,且后二者还表现为:孕前肥胖GDM组大于孕前正常GDM组大于健康对照组(P<0.05);2 GDM组血清Vaspin出现孕前肥胖GDM组约等于孕前正常GDM组大于健康孕妇对照组(P<0.05);3相关性分析:血清Vaspin与体质量指数(BMI)、FPG、FINS及HOMA-IR呈正相关(P<0.05);4多元回归分析显示BMI、FPG、FINS是孕妇血清Vaspin的重要影响因素。结论 Vaspin与GDM关系密切,能反映孕妇糖、脂代谢紊乱和胰岛素抵抗程度,可能参与了GDM疾病的发生和发展。

SerpinB3蛋白表达上调促进前列腺癌进展的研究

目的:探讨丝氨酸蛋白酶抑制剂因子B3基因(serine protease inhibitor,SerpinB3)与前列腺癌的相关性。方法:运用Western blot方法检测SerpinB3蛋白在29例前列腺癌组织和35例正常对照前列腺增生组织中的表达差异;免疫组织化学方法检测SerpinB3蛋白在48例各期前列腺癌组织,33例良性对照组织芯片中的表达差异。应用脂质体法将合成的SerpinB3小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)瞬转前列腺癌DU145及PC3细胞;分为SerpinB3-siRNA1、SerpinB3-siRNA2和SerpinB3-siRNA3,随机干扰SerpinB3-siRNA-NC为阴性对照,未转染为空白对照组。选择干扰最佳的实验组行后续细胞迁移实验;判断干扰SerpinB3基因表达后对前列腺癌DU145及PC3细胞侵袭能力的影响。结果:Western blot证实SerpinB3蛋白在前列腺癌组织中的表达均高于对应的良性组织(P<0.001);免疫组化检测发现SerpinB3蛋白在前列腺癌和良性组织中染色强度差异明显(P<0.001);SerpinB3蛋白表达情况和患者年龄、肿瘤是否转移间无统计学差异(P=0.268,P=0.178);和肿瘤病理及临床分期组间差异明显(P=0.031,P=0.042)。SerpinB3-siRNA能明显抑制肿瘤细胞迁移。结论:SerpinB3蛋白的明显上调表达能增强前列腺癌细胞侵袭能力。

前列腺癌细胞中核因子κB家族成员调控乳腺丝氨酸蛋白酶抑制剂表达的机制

目的探讨核因子κB（NF—κB）家族成员（RelA、pSO、RelB和p52）调控抑癌基因乳腺丝氨酸蛋白酶抑制剂（Maspin）表达的可能机制。方法采用Westernblot法检测前列腺癌细胞株DUl45、PC-3和LNCaP中NF-κB家族成员和Maspin蛋白的表达情况。采用RNA干扰技术结合Westernblot法，检测RelB或RelA沉默对前列腺癌DUl45细胞中Maspin蛋白表达的影响。采用流式细胞术检测RelB沉默后前列腺癌DUl45细胞的死亡情况。通过转染RelB表达质粒并建立稳定表达细胞株，观察过表达RelB对前列腺癌PC-3细胞中Maspin蛋白表达的影响。结果RelA、pSO、RelB和p52蛋白在雄激素非依赖型前列腺癌细胞株DUl45和PC-3中呈持续性高表达，其中RelB蛋白在DUl45细胞中的表达最为显著。Maspin蛋白在LNCaP和DUl45细胞中低表达，而在PC-3细胞中高表达。在DUl45细胞中，沉默RelB可以诱导Maspin蛋白表达上调，同时促进细胞死亡[死亡率为（13．3±4．2）％]。在PC．3细胞中，过表达RelB可抑制Maspin的内源性表达。RelA沉默对DUl45细胞中Maspin蛋白的表达无显著影响。结论在雄激素非依赖型前列腺癌细胞株中，NF-κB经典与非经典通路蛋白持续性活化，RelB与Maspin的表达呈负相关性。RelB负性调控了内源性Maspin的表达，进而影响了前列腺癌细胞的存活。RelA并不参与对Maspin表达的调控。

2型糖尿病患者血清尿酸、胱抑素C、半乳糖凝集素-3、丝氨酸蛋白酶抑制剂B1与血糖及颈动脉粥样硬化的关系研究

目的:研究2型糖尿病(T2DM)患者血清尿酸(UA)、胱抑素C(CysC)、半乳糖凝集素-3(Gal-3)、丝氨酸蛋白酶抑制剂B1(Serpin B1)与血糖及颈动脉粥样硬化(CAS)的关系。方法:选取2020年4月-2022年4月青岛市中医医院内分泌科收治的110例T2DM患者,根据有无CAS分为CAS组36例和非CAS组74例,检测并对比两组血清UA、CysC、Gal-3、Serpin B1水平。通过Pearson/Spearman相关系数分析T2DM患者血清UA、CysC、Gal3、Serpin B1水平与血糖指标的相关性。收集患者基础资料,采用多因素Logistic回归分析T2DM患者发生CAS的影响因素。结果:CAS组血清UA、CysC、Gal-3、Serpin B1水平均明显高于非CAS组(P<0.05)。CAS组平均年龄大于非CAS组,吸烟史患者比例、空腹血糖、糖化血红蛋白(HbA1c)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平高于非CAS组(P<0.05)。相关性分析显示,T2DM患者血清UA、CysC、Gal-3、Serpin B1水平与HbA1c、HOMA-IR呈正相关(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,年龄较大、HbA1c、HOMA-IR、血清UA、CysC、Gal3、Serpin B1水平较高是T2DM患者发生CAS的危险因素(P<0.05)。结论:血清UA、CysC、Gal-3、Serpin B1水平升高与T2DM患者血糖水平有关,同时也是T2DM患者发生CAS的影响因素。

周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂和3-磷酸甘油醛脱氢酶复合基因真核表达载体的构建及免疫研究

目的构建周期型马来丝虫（Bm）半胱氨酸蛋白酶抑制剂（CPI）和3-磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）重组复合基因真核表达质粒，观察其在小鼠体内的细胞免疫应答效应。方法将重组质粒pGEM—T／BmCPI和pGEM—T／BmGAPDH以及真核重组表达载体分别进行双酶切，构建真核重组表达质粒pcDNA3．1（＋）-BmCPI／BmGAPDH。将纯化的pcDNA3．1（＋）-BmCPI／BmGAPDH和含非甲基化胞嘧啶和鸟嘌呤的寡聚脱氧核苷酸（CpGODN）免疫BALB／c小鼠，并设PBS对照组及空质粒对照组，共免疫3次，每次间隔2周。采用RT-PCR方法检测肌肉组织内的目的基因，采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法和ELISA法分别检测免疫小鼠T淋巴细胞刺激增殖指数和血清中IFN-γ、IL-4水平。统计学分析采用t检验。结果pcDNA3．1（＋）-BmcPI／BmGAPDH复合基因真核表达载体免疫小鼠后，从小鼠肌肉组织内扩增出目的基因。免疫6周后，pcDNA3．1（＋）-BmCPI／CpG组和pcDNA3．1（＋）-BmCPI／BmGAPDH／CpG组T淋巴细胞刺激增殖指数分别为1．466±0．635和1．610±0．112，显著高于PBS组的1．004±0．019和pcDNA3．1（＋）-CpG组的1．078±0．129（t=64．438、45．318、42．749、34．314，均P〈0．05）。免疫4周后，pcDNA3．1（＋）-BmCPI／BmGAPDH／CpG组IFN-γ、IL-4水平均高于pcDNA3．1（＋）-CpG组（t=288．053、76．453，均P〈0．05），其中IFN-γ水平与pcDNA3．1（＋）-BmCPI／CpG组相比也有明显提高（t=129．642，P〈0．05）。结论pcDNA3．1（＋）-BmCPI／BmGAPDH重组复合基因真核表达载体能在小鼠体内表达，并可有效诱导特异性细胞免疫应答。

隐丹参酮调节Rac1/AKT/NF-κB信号通路对脓毒症大鼠肠损伤的影响

目的:探究隐丹参酮(CRY)调节Ras相关C3肉毒素底物1(Racl)/丝氨酸-苏氨酸蛋白酶(AKT)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路对脓毒症大鼠肠损伤的影响。方法:建立脓毒症大鼠模型。大鼠分为Control组、Model组、隐丹参酮高、中、低剂量组(7.0mg·kg^(-1)·d^(-1)CRY-H组、14.0mg·kg^(-1)·d^(-1)CRY-M组、28.0mg·kg^(-1)·d^(-1)CRY-L组)和隐丹参酮高剂量+NF-κB通路激活剂组(28mg·kg^(-1)·d^(-1)CRY-H+5 mg·kg^(-1)·d^(-1)PMA组),每组12只,Control组与Model组使用同等剂量生理盐水进行处理,每天1次,连续21d。用试剂盒检测脓毒症大鼠血清炎症因子、氧化应激、肠黏膜屏障指标水平;HE染色观察大鼠肠组织病理形态;免疫组化和免疫印迹法分别检测大鼠肠组织中ZO-1、occludin和通路蛋白表达。结果:与Control组比较,Model组黏膜绒毛排列紊乱,部分黏膜脱落、坏死,大量炎细胞浸润,组织病理评分较高,血清TNF-α、IL-1β、MDA、内毒素、D-乳酸水平上升,SOD水平降低,Rac1、p-AKT/AKT、p-NF-κB/NF-κB表达上调,ZO-1、occludin下调表达(P<0.05);与Model组比较,CRY-L、CRY-M、CRY-H组肠黏膜绒毛相对完整,炎细胞浸润减轻,组织病理评分降低,血清TNF-α、IL-1β、MDA、内毒素、D-乳酸水平降低,SOD水平上升,Rac1、p-AKT/AKT、p-NF-κB/NF-κB表达下调,ZO-1、occludin上调表达(P<0.05);与CRY-H组相比,CRY-H+PMA组肠黏膜细胞有较多炎细胞浸润,组织病理评分升高,血清TNF-α、IL-1β、MDA、内毒素、D-乳酸水平升高,SOD水平降低,Rac1、p-AKT/AKT、p-NF-κB/NF-κB表达上调,ZO-1、occludin下调表达(P<0.05)。结论:隐丹参酮抑制Rac1/AKT/NF-κB信号通路改善脓毒症大鼠肠损伤。

周期型马来丝虫3-磷酸甘油醛脱氢酶/半胱氨酸蛋白酶抑制剂复合基因真核重组质粒的构建与表达

目的 构建周期型马来丝虫3-磷酸甘油醛脱氰酶/半胱氨酸蛋白酶抑制剂（GAPDH/CPI）复合基因真核重组表达质粒,为研制复合多价疫苗奠定基础.方法 依据GenBank中BmGAPDH及BmCPI基因序列设计引物,以周期型马来丝虫总RNA为模板,RT-PCR扩增目的 编码基因.PCR产物经TA克降后,克隆至载体pGEM-T Easy中.取阳性重组质粒pGEM-T/BmGAPDH和pGEM-T/BmCPI以及真核重组表达载体分别双酶切,将酶切后的载体和目的 片段进行连接,构建真核重组表达质粒pcDNA3.1（＋）/BmGAPDH/BmCPI.将复合基因重组质粒瞬时转染人HeLa细胞后,进行RT-PCR验证,将表达产物用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）进行分析和鉴定.结果 分别克隆了pGEM-T/BmGAPDH和pGEM-T/BmCPI重组质粒,经酶切鉴定分别得到877、621 bp特异性片段,与预期值吻合.成功构建了复合基因重组真核表达载体pcDNA3.1（＋）/BmGAPDH/BmCPI,酶切鉴定所产生的片段大小与预期吻合.复合基因真核重组表达质粒转染HeLa细胞后得到高水平表达,SDS-PAGE分析显示重组蛋白相对分子质量（Mr）约为54×103.结论 成功构建了周期型马来丝虫GAPDH/CPI复合基因重组表达质粒,并在哺乳动物细胞内得到正确表达.

三氧化二砷对恶性黑素瘤A_(375)细胞NF-κB、C-IAP2及caspase-3表达的影响

目的：探讨三氧化二砷（arsenic trioxide,As2O3）在诱导人黑素瘤A375细胞凋亡中,对核因子-κB（NF-κB）、细胞凋亡抑制蛋白2（C-IAP2）以及半胱氨酸-天冬氨酸特异性蛋白酶-3（caspase-3）表达的影响。方法：Western blot法检测A375细胞中NF-κB p65核蛋白的表达和caspase-3蛋白的活化,半定量RT-PCR法检测C-IAP2mRNA的表达。结果：2.5、5.0、10.0μmol/LAs2O3作用于A375细胞24h,NF-κB p65核蛋白表达比值分别为（39.60±7.76）%、（10.17±0.90）%和（4.43±0.91）%;caspase-3蛋白比值分别为（10.03±2.06）%、（23.43±3.28）%和（35.70±4.61）%;C-IAP2mRNA表达的比值为（66.78±15.46）%、（30.16±5.52）%和（6.46±4.54）%,上述各指标与相应对照组比较及组内两两比较差异均有统计学意义（P〈0.05~P〈0.01）,随着As2O3作用浓度的增加,caspase-3激活型蛋白增多,NF-κB p65核蛋白和C-IAP2mRNA表达下降。结论：As2O3能抑制NF-κB、C-IAP2基因的表达,活化caspase-3蛋白表达。推测NF-κB-C-IAP2-caspase-3通路可能是As2O3诱导A375细胞凋亡的途径之一。

下调高迁移率族蛋白B1对宫颈癌细胞侵袭、迁移的影响及机制

目的观察下调高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对宫颈癌细胞侵袭、迁移的影响,并探讨其机制。方法将宫颈癌Si Ha细胞随机分成对照组和实验组,分别加入0.01%DMSO和HMGB1抑制剂正丁酸钠0.5 mmol/L作用24 h。采用Transwell小室实验观察两组细胞侵袭、迁移能力,RT-PCR法和Western blotting法检测两组HMGB1及Toll样受体4(TLR4)/核因子-кB(NF-кB)信号通路相关分子[TLR4、NF-кB、整合素av、整合素β3、原肌球蛋白1(TPM1)、丝氨酸蛋白酶抑制剂(maspin)]、TLR4/PI3K/Akt信号通路相关分子[磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(pPI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、整合素β1]。结果实验组迁移和侵袭实验中的穿膜细胞数均少于对照组(P均<0.05)。与对照组相比,实验组HMGB1、TLR4、NF-кB p65、整合素av、整合素β3、整合素β1 mRNA和蛋白表达下降,TPM1、maspin mRNA和蛋白表达升高(P均<0.05)。结论在宫颈癌细胞中,下调HMGB1可以通过影响TLR4/NF-кB和TLR4/PI3K/Akt信号通路,促进宫颈癌细胞的侵袭和迁移。

API-2靶向抑制PI3K/Akt信号通路干预胃癌细胞生长的研究

目的研究蛋白激酶B抑制剂-2(API-2)靶向抑制PI3K/Akt信号通路中Akt位点,从而对胃癌细胞生长的影响。方法使用API-2处理人胃癌细胞株SGC7901。MTT法检测0,2,4,6,8μmol/LAPI-2作用不同时间对细胞增殖的影响;荧光染料AO/EB染色观察不同浓度API-2作用24h后细胞凋亡情况;流式细胞仪检测细胞周期变化;Western blot法检测p-AKT蛋白以及下游蛋白NF-κB表达情况。结果API-2可抑制SGC7901细胞的增殖,并呈浓度和时间依赖性;不同浓度API-2作用24h后,对细胞的部分周期有明显的影响,也可直接导致肿瘤细胞凋亡、坏死,并且p-AKT蛋白及下游蛋白NF-κB表达均减少。结论API-2有效地抑制PI3K/Akt信号通路中Akt位点,影响SGC7901细胞的周期,减少NF-κB的表达,具有增殖抑制及诱导凋亡作用。

旋毛虫重组成虫丝氨酸蛋白酶抑制剂对小鼠脓毒症急性肾损伤的保护作用

目的探讨旋毛虫重组成虫丝氨酸蛋白酶抑制剂(TsadSPI)对小鼠脓毒症急性肾损伤的保护作用。方法 BALB/c雄性小鼠随机分为假手术组、模型组、TsadSPI治疗组,每组6只,共18只。模型组和TsadSPI治疗组小鼠采用盲肠结扎穿孔术(CLP)构建脓毒症急性肾损伤模型,假手术组小鼠剖腹探查,不结扎、不穿孔盲肠。术后30 min,假手术组和模型组小鼠腹腔注射100μL PBS溶液,TsadSPI治疗组小鼠腹腔注射100μL含有2μg TsadSPI蛋白的PBS溶液。造模后12 h,检测小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)水平以评价肝肾功能,HE染色观察小鼠肾脏结构改变,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、IL-10、转化生长因子(TGF)-β水平,采用免疫组化染色评估肾脏组织中髓样分化因子88(MyD88)、核因子-κB p65(NF-κB p65)表达水平。结果术后12 h,3组小鼠血清ALT(F=41.031,P <0.001)、AST(F=54.757,P <0.001)、Cr(F=24.142,P <0.001)和BUN水平(F=214.849,P <0.001)差异均有统计学意义,模型组小鼠ALT、AST、Cr和BUN水平均显著高于假手术组(P <0.001),而TsadSPI治疗组小鼠ALT、AST、Cr和BUN水平均显著低于模型组(P <0.001)。HE染色结果显示,小鼠CLP术后肾脏损伤严重,TsadSPI治疗后损伤明显缓解。ELISA检测结果表明,3组小鼠血清TNF-α(F=47.502,P <0.001)和IL-6水平(F=222.061,P <0.001)差异均有统计学意义,TsadSPI治疗组小鼠TNF-α、IL-6水平较模型组显著下降(P <0.001);3组小鼠血清IL-10(F=16.227,P <0.001)和TGF-β水平(F=52.092,P <0.001)差异均有统计学意义,TsadSPI治疗组小鼠血清IL-10、TGF-β水平较模型组均显著升高(P <0.001)。免疫组化染色结果表明,模型组小鼠肾脏组织内MyD88表达水平及NF-κB p65核阳性率显著高于TsadSPI治疗组。结论TsadSPI可减少小鼠肾脏组织内MyD88表达及NF-κB p65核阳性率,进而上调免疫调节因子、下调促炎因子水平,从而保护脓毒症造成的肾脏损伤。

肝细胞癌患者血清SPINK1、SEMA-3B表达及其预后的相关性研究

目的:探讨肝细胞癌患者血清丝氨酸蛋白酶抑制剂Kazal1(SPINK1)、信号素-3B(SEMA-3B)的表达水平与患者临床预后的关系。方法:选取2014年1月至2016年12月收治的肝细胞癌患者120例作为观察组,同期体检健康者100例作为对照组。采用酶联免疫吸附法检测受试人群血清SPINK1、SEMA-3B水平差异。观察组患者肝癌切除术后随访3年,根据患者的预后状态分为预后良好组(n=78)和预后不良组(n=42)。采用多因素Logistic回归分析影响肝癌患者预后的危险因素;绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析血清SPINK1、SEMA-3B对肝癌患者不良预后的预测价值。结果:观察组患者血清SPINK1、SEMA-3B水平与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。预后不良组患者血清SPINK1水平高于预后良好组,血清SEMA-3B水平低于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,TNM分期Ⅲ+Ⅳ期、低分化、淋巴结转移、血清SPINK1升高和SEMA-3B降低是肝癌患者预后不良的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线示血清SPINK1、SEMA-3B及二者联合检测预测肝癌患者不良预后的AUC分别为0.830、0.842、0.901。结论:肝细胞癌患者血清SPINK1水平升高、SEMA-3B水平降低与肝癌患者的不良预后有关,可用于临床评估肝癌患者预后。

抑制EZH2表达对宫颈癌细胞凋亡的影响及机制

目的观察抑制人类Zest同源增强子(EZH2)表达对宫颈癌细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响。方法选择人宫颈癌细胞系Siha和C33A细胞,采用MTT法确定EZH2抑制剂3-去氮腺嘌呤(DZNep)在两种细胞中的半数抑制浓度(IC_(50))。将两种细胞分为DMSO组、1/2 IC_(50)组和IC_(50)组,分别以DZNep终浓度0、3、6μmol/L处理Siha细胞各组,以0、2、4μmol/L处理C33A细胞各组。培养48 h后收集各组细胞,采用流式细胞仪检测细胞早期凋亡情况,采用Western blotting法检测EZH2蛋白、抗凋亡蛋白B淋巴细胞瘤-X基因长片段(Bcl-xL)、促凋亡蛋白Bcl-2家族细胞凋亡相互作用因子(Bim)、半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)表达。结果在Siha、C33A细胞中,1/2 IC_(50)组、IC_(50)组早期凋亡率均高于DMSO组,IC_(50)组早期凋亡率均高于1/2 IC_(50)组(P均<0. 05)。IC_(50)组EZH2蛋白表达均低于1/2 IC_(50)组、DMSO组(P均<0. 05); IC_(50)组Bcl-xL蛋白表达均低于1/2 IC_(50)组、DMSO组,Bim和Caspase-3蛋白表达均高于1/2 IC_(50)组、DMSO组(P均<0. 05)。结论利用DZNep抑制宫颈癌细胞EZH2的表达后,能够诱导宫颈癌细胞早期凋亡,其机制可能与下调Bcl-xL蛋白表达并上调Bim和Caspase-3蛋白表达有关。

维生素C对冠心病PCI术后患者炎性损伤、心肌纤维化及Fractalkine、Vaspin、HMGB1的影响

目的探究维生素C对冠心病经皮冠状动脉介入术(PCI)术后患者炎性损伤、心肌纤维化及分形趋化因子(Fractalkine)、内脏脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂(Vaspin)、高迁移率族蛋白(B1HMGB1)的影响。方法回顾性分析2018年6月至2021年8月在陕西中医药大学第二附属医院心内科接受PCI术治疗的160例冠心病患者的临床资料,依据治疗方式进行分组,其中80例术后进行常规对症治疗的患者纳入对照组,80例在术后常规治疗的基础上联合维生素C治疗的患者纳入观察组。比较两组患者治疗前后的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、Ⅰ型前胶原(PCⅠ)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、半乳糖凝集素-3(Gal-3)、胎盘生长因子(PLGF)、分形趋化因子(Fractalkine)、内脏脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂(Vaspin)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)水平。结果治疗后,观察组患者的血清TNF-α、IL-6分别为(60.41±9.63)pg/mL、(29.72±5.04)pg/mL,明显低于对照组的(65.02±14.30)pg/mL、(34.01±4.78)pg/mL,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后,观察组患者的血清PCⅠ、Gal-3、Fractalkine、HMGB1分别为(162.44±15.8)ng/mL、(3.67±0.64)ng/mL、(483.74±47.10)ng/L、(4.98±0.92)μg/L,明显低于对照组的(167.17±13.21)ng/mL、(3.92±0.86)ng/mL、(506.54±49.55)ng/L、(5.29±0.84)μg/L,差异均有统计学意义(P<0.05);而治疗后,两组患者的血清PCⅢ、PLGF、Vaspin比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论维生素C联合常规PCI术后冠心病二级预防治疗可有效减轻冠心病PCI术后炎性损伤,改善其心肌纤维化,优化Fractalkine、B1HMGB1因子,有利于降低炎症反应。