胃癌组织MutL同系物1、羧基张力蛋白、跨膜丝氨酸蛋白酶4蛋白表达与患者临床病理特征、上皮间质转化及术后3年预后的关系

目的:探讨胃癌组织MutL同系物1(MLH1)、羧基张力蛋白(CTEN)、跨膜丝氨酸蛋白酶4(TMPRSS4)蛋白表达与患者临床病理特征、上皮间质转化(EMT)及术后3年预后的关系。方法:选择胃癌患者62例,取手术切除的癌组织及癌旁组织,行免疫组织化学法检测MLH1、CTEN、TMPRSS4蛋白表达,分析临床病理特征、EMT标志物和术后3年预后与蛋白表达的相关性。结果:胃癌组织CTEN、TMPRSS4蛋白阳性表达率高于癌旁组织,MLH1阳性表达率低于癌旁组织(均P<0.05)。胃癌组织上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)阳性表达率分别为37.09%、64.52%、75.80%,CTEN、TMPRSS4蛋白阳性表达与E-cadherin呈负相关,与Vimentin和N-cadherin表达呈正相关(均P<0.05);MLH1阳性表达与Vimentin、N-cadherin呈负相关,与E-cadherin呈正相关(均P<0.05)。胃癌组织MLH1、CTEN、TMPRSS4蛋白阳性表达与TNM分期有关(均P<0.05)。术后3年随访结果显示,62例患者中44例存活(存活组),18例病死(病死组),存活组MLH1阳性表达率高于病死组,CTEN、TMPRSS4阳性表达率低于病死组(均P<0.05)。结论:CTEN、TMPRSS4在胃癌中高表达,且与Vimentin和N-cadherin表达呈正相关,与E-cadherin表达呈负相关。MLH1在胃癌中低表达,与Vimentin、N-cadherin表达呈负相关,与E-cadherin表达呈正相关。三者均与TNM分期密切相关。胃癌患者中,MLH1阳性表达率较高者术后3年预后较好。

Ⅱ型跨膜丝氨酸蛋白酶4在胰腺导管腺癌中的表达及其与E-cadherin的相关性研究

目的探讨Ⅱ型跨膜丝氨酸蛋白酶4(TMPRSS4)和上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)在胰腺导管腺癌组织中的表达及两者相关性以及其临床意义。方法 Western blot法检测16例胰腺导管腺癌和配对癌旁组织TMPRSS4和E-cadherin蛋白表达情况;免疫组织化学方法检测54例胰腺导管腺癌标本和4例正常胰腺组织中TMPRSS4和E-cadherin蛋白表达情况。结果胰腺导管腺癌组织TMPRSS4蛋白表达明显高于配对癌旁组织,E-cadherin蛋白表达癌旁组织明显高于癌组织(P<0.01);TMPRSS4蛋白阳性表达和E-cadherin表达缺失与胰腺导管腺癌分化程度、淋巴结移、临床分期相关(P<0.05);TMPRSS4和E-cadherin蛋白表达呈负相关(r=-0.419,P=0.002)。结论 TMPRSS4及E-cadherin在胰腺导管腺癌中的表达缺失与肿瘤恶性程度密切相关,联合检测2种蛋白有助于提高胰腺癌恶性程度的判断。

跨膜丝氨酸蛋白酶4蛋白在直肠癌中的表达及临床意义

目的:探讨TMPRSS4蛋白在直肠癌中的表达及临床意义。方法:应用免疫组织化学SP法检测TMPRSS4蛋白在62例患者的直肠癌组织中的表达,取癌旁组织62例作为对照组。结果:直肠癌中TMPRSS4蛋白的表达明显高于癌旁组织(P<0.01)。TMPRSS4蛋白在穿透浆膜层、TNM(III+IV)期、有淋巴结转移组中的表达显著高于未穿透浆膜层(P<0.05)、TNM(I+II)期(P<0.01)、无淋巴结转移组(P<0.01),且与年龄、性别、肿瘤部位、肿瘤大小和分化程度无关(P>0.05);TMPRSS4蛋白阳性表达组的五年生存期明显短于阴性表达组(P<0.05)。结论:TMPRSS4蛋白在直肠癌中高表达,联合检测直肠癌的临床病理参数和TMPRSS4蛋白的表达有助于判断患者的预后。

Ⅱ型跨膜丝氨酸蛋白酶4表达水平与肿瘤患者预后关系的Meta分析

目的:探讨Ⅱ型跨膜丝氨酸蛋白酶4(TMPRSS4)和肿瘤患者预后的关系。方法:采用计算机检索的方法,检索考克兰图书馆(TheCochraneLibrary)、荷兰医学数据库(EMBASE)、美国国家医学图书网(PubMed)、中国知网及万方等数据库从建库到2019年10月含有关于TMPRSS4表达水平与肿瘤预后相关文献,由两位研究员进行文献筛选及阅读并收集相关资料。采用StataSE12.0软件对数据进行Meta分析。结果:共计纳入13篇文献,涉及1990例患者。Meta分析中TMPRSS4高表达可使肿瘤患者总生存时间缩短(HR=2.09,95%CI:1.56~2.81;P<0.001);亚组分析中TMPRSS4高表达可使非消化道肿瘤的总生存时间缩短,对消化道肿瘤的总生存时间无影响,非消化道肿瘤(HR=2.31,95%CI:1.71~3.10;P<0.001),消化道肿瘤(HR=1.59,95%CI:0.73~3.48;P>0.05)。TMPRSS4高表达可使女性肿瘤和非女性肿瘤的总生存时间均缩短,女性肿瘤(HR=2.41,95%CI:1.29~4.52;P<0.05),非女性肿瘤(HR=2.00,95%CI:1.38~2.91;P<0.001)。TMPRSS4高表达可使肿瘤患者的无病生存时间缩短(HR=2.52,95%CI:1.48~4.26;P<0.001),TMPRSS4高表达会缩短肿瘤患者的无复发生存时间(HR=2.00,95%CI:1.52~2.64;P<0.001)。结论:TMPRSS4高表达可能是影响肿瘤预后的一个不利因素。

胃癌组织中跨膜丝氨酸蛋白酶4的表达及其与上皮间质转化的关系

目的探讨跨膜丝氨酸蛋白酶4(TMPRSS4)在人胃癌组织中的表达与临床病理特征之间的关系及对判断患者预后的意义,进一步研究其与上皮间质转化(EMT)的关系。方法采用免疫组织化学方法(SABC法)同时检测100例胃腺癌标本及其癌旁组织中TMPRSS4、波形蛋白(Vimentin)、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)的表达。结果在胃癌组织中TMPRSS4、E-cadherin、Vimentin的阳性率分别为47%、45%、37%,其癌旁组织阳性率分别为9%、30%、4%。3种蛋白在肿瘤组织和对应癌旁组织中的表达率之间差异有统计学意义(P<0.05)。TMPRSS4蛋白的表达与胃癌患者淋巴结转移、TNM分期有关(P<0.05),而与患者的性别、年龄、肿瘤组织大小、分化程度、浸润深度无显著相关性(P>0.05)。TMPRSS4蛋白表达阳性患者的5年生存率显著低于其阴性表达的患者。TMPRSS4与E-cadherin蛋白表达呈负相关(rs=-0.207,P=0.038),与Vimentin蛋白表达呈正相关(rs=0.233,P=0.020)。结论 TMPRSS4蛋白在人胃癌组织中的表达与肿瘤的生物学特性密切相关,并对预测肿瘤的侵袭转移有一定的参考价值。TMPRSS4可能通过降低E-cadherin的表达诱导EMT的发生来促进胃癌细胞的侵袭和转移。

跨膜丝氨酸蛋白酶4在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的探索跨膜丝氨酸蛋白酶4(TMPRSS 4)在胃癌组织中的表达情况及与胃癌病理学特征的关系,以及明确TMPRSS 4表达与胃癌临床预后的关系。方法使用RTq PCR技术和免疫组化检测TMPRSS 4在115例胃癌组织样本(胃癌及癌旁组织)中的表达情况;分析TMPRSS 4表达水平与胃癌病理学特征和预后的关系。结果 RT-q PCR结果提示胃癌组织中的TMPRSS 4 mRNA水平显著高于其在匹配癌旁组织中的表达水平,差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组化结果显示TMPRSS 4在胃癌组织中的表达比在良性组织高(56.5%vs 19.5%,P<0.001)。TMPRSS 4的过度表达与胃肿瘤的分化程度、淋巴道转移及TNM分期肿瘤显著相关(P<0.01)。TMPRSS 4是影响胃癌总体生存率及无病生存率的独立因素。结论 TMPRSS 4高表达与胃癌患者相关临床病理特征及患者的预后密切相关,TMPRSS 4有可能作为一个常规的胃癌的生物标志物,在一定程度上预测肿瘤的侵袭转移。

跨膜丝氨酸蛋白酶4在乳腺癌细胞MCF-7中影响细胞侵袭和转移的作用机制

目的研究跨膜丝氨酸蛋白酶4(TMPRSS4)在乳腺癌的发生和发展,以及侵袭和转移中所发挥的生物学作用,旨在为乳腺癌的诊断和治疗找到新的靶点和理论依据。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)和Western blot检测乳腺癌细胞中TMPRSS4的mRNA和蛋白表达水平;通过慢病毒转染乳腺癌细胞,干涉TMPRSS4表达水平,采用qPCR和Western blot检测干涉效果;采用细胞划痕实验和Transwell小室实验检测乳腺癌细胞转染前后细胞转移和侵袭能力的改变情况。结果TMPRSS4在多种乳腺癌细胞中的mRNA和蛋白水平均呈高表达;慢病毒转染后,TMPRSS4在MCF-7细胞中的mRNA和蛋白表达水平均明显下降;且慢病毒转染后,MCF-7细胞的转移和侵袭能力与未转染MCF-7细胞和不含干涉片段的病毒转染MCF-7细胞比较均明显减弱。结论TMPRSS4在乳腺癌细胞中呈高表达,并且能够增强乳腺癌MCF-7细胞的转移和侵袭能力。

Ⅱ型跨膜丝氨酸蛋白酶4在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的探讨Ⅱ型跨膜丝氨酸蛋白酶4(TMPRSS4)在非小细胞肺癌中的表达及临床意义。方法选取宾阳县人民医院2013年6月—2015年12月收治的非小细胞肺癌患者67例,采取实时荧光定量RCR(RealTime PCR)法测定TMPRSS4信使核糖核酸(mRNA)并进行比较。结果非小细胞肺癌癌组织中TMPRSS4 mRNA表达量高于癌旁组织(P<0.05),腺癌患者TMPRSS4 mRNA表达阳性率高于鳞癌患者(P<0.05)。Ⅲ~Ⅳ期患者TMPRSS4 mRNA表达阳性率高于Ⅰ~Ⅱ期者(P<0.05),淋巴结转移患者TMPRSS4 mRNA表达阳性率高于无淋巴结转移者(P<0.05)。结论在非小细胞肺癌组织中,TMPRSS4 mRNA呈明显的高表达,与疾病的发生、发展、临床分期及恶性程度密切相关。

跨膜丝氨酸蛋白酶4诱导放疗后肝细胞癌转移的机制研究

目的 探讨跨膜丝氨酸蛋白酶4（transmembrane protease serine 4,TMPRSS4）在放疗后残余肝细胞癌转移中的作用及机制.方法 建立具有肺转移潜能的人肝癌裸鼠原位模型,模拟临床分割放射治疗.将放疗后残余肝癌组织切除后再种植于正常裸鼠肝脏.6周后处死,测量放疗后再种植肝癌体积,计算其肝内移灶数目及肺转移率.HE染色观察放疗后肝癌组织学形态.Westernblot及RT-PCR检测放疗前后肝癌组织内上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）相关基因及TMPRSS4的表达.结果 对照组肝癌切除再种植后42 d,其肿瘤大小及肺转移率分别为（2.25士0.52）cm3和66.7％,而放疗后2d和放疗后30 d残癌切除再种植组,肿瘤大小分别为（1.61±0.51）cm3 （P＜0.05）和（2.60±0.61）cm3 （P＞0.05）,肺转移率分别为12.5％ （P＜0.05）和100％ （P＜0.05）.对照组及放疗后2d残癌切除再种植组无肝内转移灶,放疗后30 d残癌切除再种植组肝内转移灶数为18±8.05（P＜0.05）.放疗后30 d残癌组织EMT相关蛋白N-cadherin、Vim-entin及TMPRSS4、SIP1的表达显著高于对照组及放疗结束后2d残癌组织,而E-cadherin表达则显著降低.结论 放疗后残癌的转移潜能先降低后增强.放疗后残癌TMPRSS4表达增加进而诱导EMT的发生可能是后期转移潜能增强重要原因之一.

跨膜丝氨酸蛋白酶4诱导肝细胞癌血管生成的实验研究

目的探索跨膜丝氨酸蛋白酶4（TMPRSS4）对肝癌血管生成的影响及机制。方法转染慢病毒载体构建TMPRSS4稳定过表达的人肝癌HUH-7细胞株，运用实时荧光定量PCR（qRT—PCR）、蛋白免疫印迹法（Westernblot）检测其表达量。Matrigel胶成管实验检测各组肿瘤细胞上清液对人脐静脉细胞融合细胞株EA．hy926细胞血管拟态形成的影响。接种肿瘤细胞于裸鼠皮下成瘤，免疫组化标记TMPRSS4、CD34验证TMPRSS4对肝细胞癌血管生成的影响。qRT．PCR检测血管内皮生长因子（VEGF）以明确诱导肿瘤血管生成的机制。结果qRT—PCR、Westernblot结果显示转染TMPRSS4慢病毒的HUH-7细胞株，其TMPRSS4表达较对照组显著上调。Matrigel胶成管实验结果显示过表达TMPRSS4的细胞上清液使人脐静脉内皮血管细胞血管拟态形成能力显著增强。免疫组化标记TMPRSS4、CD34结果显示，TMPRSS4阳性表达的肿瘤组织微血管密度显著高于对照组。qRTPCR结果显示过表达TMPRSS4的肝癌细胞VEGF水平显著高于对照组。结论TMPRSS4可通过上调VEGF的表达促进肝癌血管生成。

跨膜丝氨酸蛋白酶4在肝癌中的表达及临床意义

目的探讨11型膜丝氨酸蛋白酶4（TMPRSS4）在肝癌中的表达及临床意义。方法应用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白一过氧化物酶（sP）法检测30例正常肝组织、30例肝硬化组织及121例原发性肝细胞癌组织中TMPRSS4蛋白的表达，同时分析肝癌中TMPRSS4的表达与临床病理特征的关系。结果TMPRSS4在肝癌中、肝硬化及正常肝组织的高表达率分别为70．3％、26．7％、0，组内比较差异有统计学意义（P〈0．01）；TMPRSS4在肝癌中的表达与TNM分期及淋巴结转移密切相关（P〈0．05）。结论TMPRSS4与肝癌的发生及发展密切相关。

跨膜丝氨酸蛋白酶4在胆囊癌中的表达及意义

[目的]探讨跨膜丝氨酸蛋白酶4 (TMPRSS4)在胆囊癌中的表达及与预后的关系。[方法]应用免疫组织化学方法检测TMPRSS4在67例胆囊癌组织中的表达,分析其与临床病理特征及预后的关系。[结果]胆囊癌组中TMPRSS4的表达高于癌旁非肿瘤组织(56.72%vs 14.93%,P<0.01);TMPRSS4在TNM分期Ⅲ+Ⅳ期、有淋巴结转移组中的表达明显高于TNM分期Ⅰ+Ⅱ期(P=0.014)、无淋巴结转移组(P=0.029);其表达与性别、年龄、组织学分级、合并胆囊结石和组织学类型无关(P>0.05)。TMPRSS4阳性表达组的3年生存率明显低于阴性表达者(P=0.009)。[结论] MPRSS4在胆囊癌中高表达,检测TMPRSS4的表达有助于判断患者预后。

跨膜丝氨酸蛋白酶4对肝细胞癌增殖侵袭作用的影响

目的探讨跨膜丝氨酸蛋白酶4（transmembrane protease serine4，TMPRSS4）对肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）增殖侵袭的作用。方法构建并鉴定慢病毒转染TMPRSS4过表达的人肝细胞癌细胞系BEL-7402。Western blot及RT-PCR检测TMPRSS4的表达。MTT实验检测TMPRSS4对BEL-7402细胞增殖能力的影响。Transwell实验检测TMPRSS4对细胞侵袭性的影响。结果RT-PCR及Western blot结果显示TMPRSS4过表达组细胞TMPRSS4蛋白及mRNA表达均显著高于对照组及空白载体转染组。MTT实验结果显示，慢病毒转染后，对照组、空白载体转染组和TMPRSS4过表达组细胞增殖能力无显著差异（P〉0．05）。侵袭实验显示TMPRSS4过表达组细胞穿过Matrigel胶到达Transwell小室膜背面的细胞数为49．3±7．4，显著高于对照组（23．3±5．0）和空白载体转染组（19．3±3．2）（P〈0．05）。结论HCC细胞表达TMPRSS4。TMPRSS4过表达可促进HCC细胞的侵袭能力，但是不影响HCC细胞增殖。

跨膜丝氨酸蛋白酶4在结直肠癌中表达情况的研究

目的 探讨跨膜丝氨酸蛋白酶4(TMPRSS4)在结直肠癌(CRC)中的表达及其临床意义.方法 收集2003年1月至2008年12月中国医科大学附属第一医院胃肠肿瘤外科384例CRC病例及其相关的临床资料,将组织标本制作成组织芯片,采用免疫组化法检测组织芯片中TMPRSS4蛋白表达情况,分析TMPRSS4表达与临床病理资料的相关性.结果 免疫组化结果显示TMPRSS4在CRC肿瘤组织和癌旁组织中表达阳性率分别为72.40％(278/384)和36.98％(142/384).TMPRSS4在CRC肿瘤组织中表达水平明显高于癌旁组织(P<0.01).TMPRSS4在CRC中的表达与TNM分期有关(χ2=4.516,P=0.034).Kaplan-Meier生存曲线显示TMPRSS4高表达组比低表达组5年生存率低.单因素和多因素COX回归分析显示TNM分期、TMPRSS4表达程度为独立的预后因素(P<0.01).结论 TMPRSS4蛋白在结直肠肿瘤组织中高表达与肿瘤的发生发展密切相关,对预测结直肠癌的侵袭转移能力、评估术后病理分期及术后生存期有重要的意义,在未来可能成为一个新的肿瘤治疗靶点.

跨膜丝氨酸蛋白酶4与E-钙黏蛋白在105例结直肠癌中的表达及意义分析

[目的]探讨跨膜丝氨酸蛋白酶4(transmembrane protease serine 4,TMPRSS4)和E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)在结直肠癌中的表达及其临床意义。[方法]选取手术切除的结直肠腺癌标本105例,应用免疫组织化学方法检测TMPRSS4与E-cad的表达,分析两者表达与临床病理特征及预后的关系。[结果] TMPRSS4在结直肠癌组织和癌旁组织中的阳性表达率分别为56.19%(59/105)和21.90%(23/105),差异有统计学意义(χ2=25.93,P<0.05);E-cad在结直肠癌组织和癌旁组织中的阳性表达率分别为28.57%(30/105)和85.71%(89/105),差异有统计学意义(χ2=67.50,P<0.05)。TMPRSS4在Ⅲ+Ⅳ期组、有淋巴结转移组中的阳性率高于Ⅰ+Ⅱ期组(P=0.035)、无淋巴结转移组(P=0.019);E-cad在Ⅲ+Ⅳ期组、有淋巴结转移组中的阳性率低于Ⅰ+Ⅱ期(P=0.001)、无淋巴结转移组(P=0.001);两者表达均与性别、年龄、肿瘤部位、组织学分期无关(P>0.05)。结直肠癌中TMPRSS4与E-cad表达呈负相关(r=-0.33,P=0.01)。TMPRSS4高表达组及E-cad低表达组5年生存率低(P<0.05)。[结论]结直肠癌中TMPRSS4表达上调、E-cad表达下调,两者可能在结直肠癌的发生发展过程中发挥作用。

HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶和NS5B RNA聚合酶抑制剂的临床研究进展

丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)NS3/4A丝氨酸蛋白酶和NS5B RNA依赖的RNA聚合酶是病毒蛋白前体加工成熟和复制过程中十分重要的两个酶,是抗HCV治疗的理想靶点.近年来,关于HCV NS3/4A蛋白酶和NS5B RNA聚合酶抑制剂的研究是抗HCV研究最为活跃的方向,本文综述了他们在临床试验中的最新研究进展.

HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶在大肠杆菌中表达、纯化

在大肠杆菌中HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶获得表达并进行纯化。根据NS3与NS4A两者形成异源二聚体的结构要求,并参照文献,通过基因拼接的方法设计了单链NS3/4A丝氨酸蛋白酶的基因。合成相应引物,利用反转录PCR从HCV患者血液中扩增出该蛋白酶的编码基因,克隆入原核表达载体pRSET-A,将重组表达质粒pRSET-A-ns3/4a转化BL211(DE3)大肠杆菌,并诱导表达与纯化。成功地构建了重组表达质粒pRSET-A-ns3/4a;重组质粒转化的BL21工程菌经IPTG诱导表达后,表达产物经SDS-PAGE和Western-blot证实为NS3/4A丝氨酸蛋白酶,并用镍离子亲和层析方法获得纯化蛋白酶。获得的纯化NS3/4A丝氨酸蛋白酶为建立其酶活性测定系统奠定了基础。

丙型肝炎病毒NS3/4A丝氨酸蛋白酶瞬时表达小鼠模型的建立

目的:建立丙型肝炎病毒NS3/4A丝氨酸蛋白酶体内活性评价模型。方法:利用NS4A/B是NS3/4A丝氨酸蛋白酶作用底物的特性,构建融合基因NS3/NS4A/B-SEAP,底物片段NS4A/B插在NS3/4A和人分泌性碱性磷酸酶(SEAP)之间,融合基因表达后SEAP的分泌依赖于有活性的NS3/4A在NS4A/B位点的切割。将含融合基因的质粒NS3/4A(△4AB)SEAP通过水动力转染技术转染到小鼠体内,检测小鼠血清中SEAP的活性,高活性的SEAP是该评价体系成立的证据。结果与结论:在瞬时表达NS3/4A的小鼠血清中检测到了高活性的SEAP,建立了可用于评价抗NS3/4A的小鼠体内瞬时模型。

跨膜丝氨酸蛋白酶-4对2009甲型H1N1流感病毒HA的切割及其融合活性研究

流感病毒血凝素(HA)被宿主蛋白酶切割活化是流感病毒复制和扩散的关键步骤。2009甲型H1N1流感病毒HA的裂解位点为单碱性氨基酸,只能被宿主特定组织部位表达的某些蛋白酶所切割活化。本研究构建了主要存在于人呼吸道和肺脏的跨膜丝氨酸蛋白酶4(TMPRSS4)的真核表达重组质粒pCA-TMPRSS4-Flag与表达2009甲型H1N1流感病毒中国四川分离株HA的真核重组表达质粒pCA-SCHA共转染293T细胞,利用westernblot证明2009甲型H1N1流感病毒的HA蛋白能够被TMPRSS4切割;通过激光共聚焦确定TMPRSS4和HA在293T细胞膜上共定位;并进一步通过细胞融合试验证明经正确切割的HA具有在低pH条件下介导细胞膜发生融合的生物学功能。本实验为研究自然感染情况下参与活化流感病毒的宿主胰蛋白酶提供了实验依据。

第二代丙型肝炎病毒NS3/4A丝氨酸蛋白酶抑制剂研究进展

本文综述了近年来基于特拉匹韦(telaprevir)、波西匹韦(boceprevir)和BILN-2061等第一代HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶抑制剂的第二代抑制剂的结构改造。第二代抑制剂可有效提高抑制效力,显著改善药代动力学参数,可在一定程度上克服由第一代抑制剂诱导产生的耐药性。同时探讨了各类抑制剂的构效关系。