精氨酸–谷氨酸–天冬氨酸–缬氨酸改性丝素导管的制备及性能研究

目的:制备由REDV多肽修饰且具沟槽结构的丝素蛋白支架。方法:在含有30微米沟槽结构的PDMS膜上制备丝素薄膜,卷成管。通过多巴胺改性在丝素移植物表面共价连接REDV多肽进行修饰。扫描电镜观察其内表面微观形貌,电子万能试验机(TFW-58)检测REDV多肽修饰的丝素蛋白支架力学性能的改变。将RSC96细胞种植在丝素蛋白支架内表面1-3 d,观察丝素蛋白质支架内表面的沟槽结构对细胞趋向生长的影响。使用CCK-8 (cell counting Kit-8)测定法检测RSC96细胞在丝素移植物表面的增殖情况。采用SD大鼠制备坐骨神经损伤模型,分别用丝素导管(SF)、具沟槽丝素导管(TOPOLOGY)、REDV多肽修饰丝素导管(REDV)、REDV修饰且具沟槽结构丝素导管(TOPOLOGY/REDV)进行桥接修复。术后12 w测量靶肌湿重比、移植段坐骨神经纵切免疫荧光染色。结果:扫描电镜观察,TOPOLOGY组及TOPOLOGY/REDV组均具有均一的沟槽结构;力学测试结果表明REDV多肽修饰的丝素蛋白支架力学性能有所改善;RSC96细胞与丝素移植物共培养发现移植物表面沟槽结构对于细胞的趋向生长具有引导作用;CCK-8细胞活力检测表明REDV多肽修饰的丝素蛋白支架较单纯的丝素蛋白支架而言生物相容性有所改善;术后12 w靶肌恢复湿重比及坐骨神经纵切免疫荧光染色结果表明REDV多肽修饰且具沟槽结构的丝素蛋白支架对于细胞的吸附生长、损伤神经的修复具有促进作用。结论:REDV多肽修饰且具沟槽结构的丝素蛋白支架具有良好的生物相容性,对于细胞的粘附及趋向生长具有促进作用,为丝素蛋白在神经损伤再生领域提供了新的应用。

胶原/丝素导管介导雪旺细胞联合神经干细胞修复坐骨神经缺损

目的 观察胶原/丝素导管介导雪旺细胞联合神经干细胞所构建的组织工程化神经修复大鼠10 mm坐骨神经缺损的效果.方法 体外分离培养乳鼠坐骨神经雪旺细胞（SCs）,并做S-100蛋白免疫荧光鉴定;从孕14 - 15 d的SD大鼠体内取出子鼠,分离纯化获得原代神经干细胞（NSCs）进行体外培养.实验分为4组,每组10只：自体神经移植组（A组）、胶原/丝素导管介导雪旺细胞联合神经干细胞移植组（B组）、胶原/丝素导管移植组（C组）、单纯损伤组（D组）.SCs-NSCs与胶原/丝素导管联合培养14 d后,行扫描电镜观察.分别将3种不同移植物桥接于大鼠坐骨神经10 cm缺损处,并在12周后进行大体观察、电生理学检测、形态学观察及计量学分析.结果 术后12周,桥接组都不同程度地实现了坐骨神经缺损再通,且实验动物未出现明显排斥及炎性反应.神经电生理学检测坐骨神经复合肌动作电位（CMAPs）波幅分别为：未手术正常侧（21.00±1.83） mV,A组（15.00±1.12） mV,B组（13.00±1.06） mV,C组（6.00±0.58） mV,透射电子显微镜再生神经纤维髓鞘厚度分别为：A组（0.80±0.15） μm,B组（0.70±0.11） μm,C组（0.30±0.07） μm,D组（0.25±0.06） μm.统计结果表明：A组与B组之间差异无统计学意义（P＞0.05）,但两者相对C组及D组差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 SCs和NSCs能够在胶原/丝素导管上共同生长分化,生物相容性良好.胶原/丝素导管介导雪旺细胞联合神经干细胞所构建的组织工程化神经对坐骨神经缺损的修复具有良好的桥接和促神经生长作用.

丝素蛋白人工神经导管的皮肤致敏实验

目的评价本实验室自制的丝素蛋白人工神经导管对皮肤潜在的致敏性。方法以ISO 10993-10:1995标准,采用最大剂量法,将白化豚鼠分为SF-NGC组、阳性对照(甲醛溶液)、阴性对照(生理盐水)3组,先进行预试验确定主试验各阶段的浓度,然后进行主试验。在激发阶段的敷贴物去除后24h、48h、72h,观察记录各组动物激发部位的皮肤情况,按标准进行评分,并算出致敏率。结果丝素蛋白人工神经导管的皮肤反应记分为0,致敏率为0。结论在试验条件下丝素蛋白人工神经导管无潜在的皮肤致敏性。

Ames实验对丝素蛋白人工神经导管遗传毒性的研究

目的:初步评价自制的丝素蛋白人工神经导管的遗传毒性。方法:采用Ames试验常规方法进行检测。结果:丝素蛋白导管对TA97、TA98、TA100、TA102在加与不加S9条件下均无致突变性。结论:在本试验条件下丝素蛋白人工神经导管无直接或间接致突变性。