物理交联再生丝素膜组织工程角膜的生物相容性研究

背景角膜组织工程生物材料在体内应当具备透明性、一定的机械强度、生物相容性和缓慢降解的特点，丝素膜生物材料具备这些特征。目的研究采用物理交联再生丝素膜构建组织工程角膜的可行性。方法用常规培养法培养人角膜上皮细胞（CECs），将对数生长期的CECs在用家蚕丝制备的物理交联再生丝素膜上进行培养，分别于培养后24、48、72h在倒置显微镜、扫描电子显微镜下观察CECs的生长状态和形态学，并与细胞培养板培养的人CECs形态进行对照。MTT法每日检测和记录再生丝素膜培养后人CECs的增生情况，流式细胞仪检测再生丝素膜培养人CECs的细胞周期和凋亡率。将再生丝素膜4mm×3mm植入新西兰白兔右眼角膜基质层间，于术后1个月、2个月时裂隙灯下检查眼表，术后2个月摘除兔眼并制备移植眼角膜组织切片行组织病理学检查，观察再生丝素膜材料的降解情况及角膜新生血管（CNV）的生长情况。采用免疫组织化学法检测术后1个月、2个月CD34在移植眼角膜组织中的表达，并与正常眼进行对照。结果在24、48、72h3个时间点，倒置显微镜、扫描电子显微镜下见再生丝素膜培养的人CECs与细胞培养板培养法培养的人CECs形态结构无明显差别。再生丝素膜或细胞培养板培养CECs在1、2、3、4、5、6、7d各个时间点A490值比较，差异无统计学意义（F=0．641，P〉0．05）。再生丝素膜和细胞培养板培养的CECs凋亡率分别为1．8％、2．0％，细胞G2／G1期分别为1．956、1．945。再生丝素膜角膜植入后2个月时，再生丝素膜为排列整齐的胶原组织替代，角膜内新生血管和炎性细胞均少于移植后1个月。角膜免疫组织化学染色检测显示再生丝素膜植入角膜后1个月、2个月CD34表达量均明显低于Ad—VEGF165诱导的阳性对照，而与正常的角膜相比差异无统计学意义（P〉0．05）。术后1个月与术后2个月比较，角膜中CD34阳性率的差异无统计学意义（P〉0．05）。结论物理交联再生丝素膜构建组织工程角膜可行，再生丝素膜与角膜组织生物相容性良好，再生丝素膜植入兔角膜基质后无明显的炎症反应和新生血管。

丝素蛋白支架修复颊黏膜缺损

背景:丝素蛋白属于天然的大分子材料,含有一种与细胞黏附关系密切的特殊三肽结构,即精-甘-天冬氨酸肽结构,能促进细胞在纤维材料表面迁移、黏附和增殖,影响细胞的形态和功能。目的:比较不同丝素蛋白支架修复大鼠颊黏膜缺损的效果。方法:取90只SD大鼠,制作单侧颊黏膜缺损模型,随机分为3组,每组30只,实验组于颊黏膜缺损处置入多孔丝素蛋白支架,对照组于颊黏膜缺损处置入复层物理交联丝素蛋白膜,空白对照组于颊黏膜缺损处覆盖凡士林纱布并缝合。术后15 d检测创面直径;术后30 d取缺损部位,进行苏木精-伊红染色。结果与结论:(1)颊黏膜创面直径检测结果:术后15 d,实验组颊黏膜创面直径显著小于对照组、空白对照组(P<0.05),对照组小于空白对照组(P<0.05)。(2)苏木精-伊红染色结果:术后30 d,实验组上皮细胞钉突相对较多,丝素蛋白纤维部分吸收降解,成纤维细胞数明显多于对照组、空白对照组(P<0.05),炎性细胞数少于对照组、空白对照组(P<0.05)。(3)结果证明,多孔丝素蛋白支架在颊黏膜缺损修复中能够加速上皮化,更加有利于创面愈合。