转化生长因子-β3与基质金属蛋白酶抑制剂-2联合转染兔骨髓间充质干细胞复合丝素蛋白/壳聚糖生物支架修复兔软骨缺损

目的 探讨单纯转化生长因子-β3（TGF-β3）和TGF-β3与基质金属蛋白酶抑制剂-2联合转染兔骨髓间充质干细胞复合丝素蛋白/壳聚糖（SF-CS）生物支架植入动物体内修复兔膝关节软骨缺损的可行性及效果差异.方法 将新西兰大白兔20只分为4组（支架组、未转染组、reAAV-TGF-β3转染组、联合转染组）,每组5只.按组别重组腺相关病毒转染兔骨髓间充质干细胞与SF-CS生物支架复合,分别植入兔膝关节软骨缺损处.2个月后处死家兔,肉眼观察以及苏木素-伊红（HE）染色评定缺损软骨修复情况.并进行软骨细胞特征性甲苯胺蓝染色鉴定.结果 2个月后除支架组外各实验组兔膝关节软骨缺损处均有软骨样物质形成,且联合转染组诱导的新生软骨更接近缺损处周围正常软骨.Moran观察评分分别为支架组（0.600±0.548）分、未转染组（1.800±0.447）分、reAAV-TGF-β3转染组（3.800±0.837）分、联合转染组（5.400±0.548）分.联合转染组与reAAV-TGF-β3转染组间,reAAV-TGF-β3转染组与未转染组间差异均有统计学意义（P＜0.05）.HE染色结果提示联合转染组软骨修复效果较单纯TGF-β3转染组更好.结论 单纯TGF-β3转染兔骨髓间充质干细胞对兔膝关节软骨缺损有修复作用,TGF-β3与基质金属蛋白酶抑制剂-2（TIMP-2）联合转染组修复缺损效果更明显,提示TIMP-2与TGF-β3具有协同效应.

丝素蛋白-壳聚糖支架复合骨髓间充质干细胞体内构建组织工程化软骨的生物相容性

背景:课题组前期的研究中发现,丝素蛋白-壳聚糖支架材料复合诱导后骨髓间充质干细胞在兔体内能修复缺损的软骨组织,但对于该组织工程化软骨组织的生物相容性还未进一步研究。目的:研究丝素蛋白-壳聚糖支架材料复合骨髓间充质干细胞在体内构建组织工程化软骨的生物相容性。方法:使用丝素蛋白-壳聚糖按1∶1比例混合制备三维支架材料,提取兔骨髓间充质干细胞,将诱导后的骨髓间充质干细胞与丝素蛋白-壳聚糖支架构建修复体,再将修复体移植到兔关节软骨缺损模型中修复软骨组织。实验分为3组,实验组植入诱导后骨髓间充质干细胞+丝素蛋白-壳聚糖支架,对照组植入丝素蛋白-壳聚糖支架干预,空白组未植入修复体。结果与结论:①实验成功制备丝素蛋白-壳聚糖三维支架材料及提取骨髓间充质干细胞,并构建软骨缺损的修复体,将修复体植入兔体内能成功修复缺损的软骨组织;②建模后2,4,8,12周,3组血常规、降钙素原、血沉、C-反应蛋白结果提示无明显的全身感染征象,3组血常规及肝肾功能各时间段比较差异无显著性意义(P>0.05);③一般观察、苏木精-伊红染色及扫描电镜观察:建模后12周,相比其他两组,实验组软骨缺损已修复,支架材料已吸收,修复组织周围未见炎性细胞,修复组织已正常组织整合良好;④结果证实,丝素蛋白-壳聚糖支架复合骨髓间充质干细胞在体内构建的组织工程化软骨具有良好的生物相容性。

丝素蛋白/壳聚糖生物支架复合骨髓间质干细胞修复老年兔软骨缺损

目的 探讨丝素蛋白（SF）/壳聚糖（CS）生物支架复合诱导后骨髓间质干细胞（BMSCs）修复老年兔膝关节软骨缺损的可行性. 方法 分离培养及诱导BMSCs,将成功诱导后的BMSCs接种在SF-CS生物支架上构成修复体.54只16～18月龄兔,随机分为支架修复体组、单纯支架组和对照组,每组18只.采用右膝关节制备软骨缺损模型并植入支架.术后4、8、12周取材进行大体观察,组织学染色和改良Wakitani法组织学评分. 结果 SF-CS支架为相通性好的多孔结构,孔径平均151.72 μm,孔隙率为（92.72±4.78）％,吸水膨胀率为（141.10±6.87）％.BMSCs诱导后在SF-CS支架上生长良好,增殖活跃.12周时,支架修复体组软骨缺损基本修复,Ⅱ型胶原明显的阳性反应,生物材料基本吸收；单纯支架组以纤维样组织修复为主,Ⅱ型胶原阳性反应弱,未见支架残留；空白对照组修复不良；改良Wakitani评分显示支架修复体组优于单纯支架组和对照组（P＜0.05）.结论 SF-CS生物支架可以作为BMSCs载体修复老年兔膝关节软骨缺损.

制备缓释骨形态发生蛋白2的丝素蛋白/壳聚糖/纳米羟基磷灰石生物支架

背景:骨形态发生蛋白2在骨形成及修复过程中起着至关重要的作用,但存在易流失、易降解、难以持续作用等缺点。目的:探讨缓释骨形态发生蛋白2丝素蛋白/壳聚糖/纳米羟基磷灰石生物支架的制备方法及性能。方法:将蚕丝脱胶、溶解并提纯得到2%丝素蛋白溶液,将骨形态发生蛋白2溶于2%壳聚糖溶液中,搅拌均匀后与等体积丝素蛋白溶液和适量纳米羟基磷灰石充分混合,采用冷冻干燥法制备成缓释骨形态发生蛋白2的丝素蛋白/壳聚糖/纳米羟基磷灰石生物生物支架,作为实验组;以相同浓度骨形态发生蛋白2浸泡丝素蛋白/壳聚糖/纳米羟基磷灰石支架材料,作为对照组;采用阿基米德法测定两组支架的孔隙率,扫描电子显微镜观察两组支架表面形貌,万能测试机测试两组支架的抗压强度。将两组支架分别浸泡于PBS中,与不同的时间点采用ELISA法检测骨形态发生蛋白2的释放量。结果与结论:(1)两组支架为不规则多孔结构,孔间相通,孔壁凹凸不平,两组支架平均孔径、孔隙率及最大抗压强度比较差异无显著性意义;(2)实验组第1天的骨形态发生蛋白2释放量为4.63%,释放曲线缓慢上升,第28天之后释放曲线转入平台期;对照组第1天的骨形态发生蛋白2释放量高达58.84%,呈显著的初始爆发释放,并迅速上升,在第10天之后释放曲线转入平台期。两组第1,2,4,10天的骨形态发生蛋白2释放量比较差异有显著性意义(P<0.05);(3)结果表明,缓释骨形态发生蛋白2的丝素蛋白/壳聚糖/纳米羟基磷灰石生物支架可持续缓慢释放骨形态发生蛋白2。

丝素蛋白-壳聚糖三维多孔支架材料生物相容性及促成骨性能研究

目的研究丝素蛋白-壳聚糖支架材料的生物相容性及成骨性能,为其在骨组织工程方面的应用提供理论基础。方法采用冷冻干燥合并化学交联的方法制备出2组支架材料,实验组采用丝素蛋白-壳聚糖支架(质量比为2∶3),对照组采用壳聚糖支架。将MG-63成骨细胞接种于这2组支架上,通过Hoechst荧光染色观察其在支架材料上的生长,计算细胞粘附率和增殖率,最后通过矿化结节的形成以及MG-63成骨细胞分泌碱性磷酸酶能力来研究支架的成骨性能。以载玻片培养MG-63细胞为空白对照组。结果细胞培养1、3 d时,对照组细胞粘附率分别为(26.63±0.57)%、(49.88±0.78)%,实验组细胞粘附率分别为(31.88±0.94)%、(62.13±0.36)%,实验组的细胞粘附率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。细胞培养3 d时,对照组和实验组细胞增殖率检测的光密度值分别为0.491±0.010、0.596±0.008,实验组的细胞增殖率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组碱性磷酸酶活性和矿化结节的生长状况也均优于对照组。结论丝素蛋白-壳聚糖支架(质量比为2∶3)具有良好的生物相容性和优良的促成骨性能,对于骨组织工程研究有良好的应用前景。

丝素蛋白-壳聚糖三维支架的构建及其生物相容性

目的:筛选出最适合用于骨组织工程的丝素蛋白-壳聚糖三维支架比例。方法:将提取的丝素蛋白溶液与壳聚糖溶液以不同质量比混合,冷冻干燥后构建以下各组丝素蛋白-壳聚糖三维多孔支架:20%丝素蛋白∶80%壳聚糖(20%丝素蛋白组)、30%丝素蛋白∶70%壳聚糖(30%丝素蛋白组)、40%丝素蛋白∶60%壳聚糖(40%丝素蛋白组)、50%丝素蛋白∶50%壳聚糖(50%丝素蛋白组)、纯丝素蛋白组、纯壳聚糖组。采用扫描电镜观察各组三维支架表面形态;将MG-63细胞与丝素蛋白/壳聚糖三维支架共培养(对照组采用盖玻片培养MG-63细胞),通过细胞计数计算细胞黏附率,通过MTT检测细胞增殖;通过扫描电镜观察MG-63细胞在40%丝素蛋白、50%丝素蛋白三维支架中的形态分布;采用p NPP显色液检测40%丝素蛋白、50%丝素蛋白三维支架中MG-63细胞碱性磷酸酶(ALP)含量。结果:不同比例丝素蛋白/壳聚糖三维支架中,50%丝素蛋白、40%丝素蛋白支架表面孔隙结构相对规则;黏附率结果显示,三维支架中丝素蛋白含量最少时,支架的细胞黏附率也最低;MTT显示50%丝素蛋白组细胞增殖能力强于其他组支架;MG-63细胞与支架共培养时,50%丝素蛋白支架中细胞量多于40%丝素蛋白组;在共培养第5天,50%丝素蛋白组细胞分泌的ALP含量高于40%丝素蛋白组。结论:质量比为1∶1的丝素蛋白-壳聚糖支架孔隙结构规则,最适合成骨细胞MG-63的黏附、增殖。

丝素蛋白/壳聚糖三维支架材料的制备方法

背景:很多研究表明丝素蛋白、壳聚糖为天然高分子材料,无毒无味,有良好的生物特性和理化性质。目的:探讨符合软骨组织工程支架材料要求的丝素蛋白/壳聚糖三维支架材料制备方法。方法:将丝素蛋白与壳聚糖按质量比分别为3∶1,1∶1,1∶3,0∶1的比例混合制备丝素蛋白-壳聚糖复合材料,通过孔径大小、孔隙率、吸水膨胀率及热水溶失率的测定,寻找丝素蛋白/壳聚糖最佳混合比例。结果与结论:丝素蛋白/壳聚糖按质量1∶1的比例混合更符合要求:孔径90～280μm,平均孔径为151.72μm;孔隙率为(92.72±4.78)%;吸水膨胀率为(141.10±6.87)%;热水溶失率交联后较交联前降低,交联前后比较差异有显著性意义(P<0.05)。说明丝素蛋白/壳聚糖按1∶1复合支架材料符合软骨组织工程支架材料理化性质的要求,该材料有望作为软骨组织工程研究较理想的支架材料。

纳米羟基磷灰石/丝素蛋白复合支架材料的降解特性及生物相容性研究

应用共混法制备了纳米羟基磷灰石/丝素蛋白复合支架材料,通过体外降解和细胞培养实验研究了复合支架材料的降解特性和生物相容性.体外降解实验结果显示,复合支架材料具有稳定的降解能力;在降解过程中,羟基磷灰石由于与降解液发生钙、磷等离子的交换,使其结晶得到了进一步生长和完善.利用细胞计数法、四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法和碱性磷酸酶(ALP)活性测定等分析了复合支架材料的生物相容性,结果表明,MG63细胞在复合支架材料上具有良好的粘附、增殖能力,并可引起早期的骨分化.因此,纳米羟基磷灰石/丝素蛋白复合支架作为骨组织工程的支架材料具有良好的应用前景。

丝素蛋白/壳聚糖三维多孔支架的构建及结构表征

背景:丝素蛋白和壳聚糖均无毒性且具有良好的生物相容性,但是单一成分作为生物支架时都不能满足支架材料的需求。目的:制备各种不同组分的丝素蛋白及壳聚糖复合支架材料,观察其微观结构及相关性能,筛选出适合成骨细胞生长的理想支架材料。方法:通过CaCl2:C2H5OH:H2O=1:2:8(摩尔比)溶解体系溶解、过滤、浓缩提纯,制备出2%的丝素蛋白溶液,壳聚糖溶解于乙酸溶液配制成的3%壳聚糖溶液,将两者以不同的比例相混合,经数次冷冻干燥后,得到成品支架材料。采用电镜观察形貌,计算孔隙率并对支架的结构进行红外、X射线衍射、电子能谱分析观察。结果与结论:将壳聚糖和丝素蛋白共混后,互为改性,制备出了结构较稳定的支架材料。其中40%丝素蛋白-60%壳聚糖组具有适合成骨细胞生长的较佳孔径,可作为细胞支架的首选配比。

丝素蛋白/壳聚糖复合支架材料的细胞相容性

背景:大量研究表明丝素蛋白、壳聚糖为天然高分子材料,具有良好的细胞生物相容性。目的:探讨丝素蛋白/壳聚糖复合支架材料与诱导的兔骨髓间充质干细胞的生物相容性。方法:将兔骨髓间充质干细胞分离培养、诱导后,与丝素蛋白/壳聚糖三维支架材料体外共培养,以材料的细胞毒性、细胞增殖活力、材料细胞黏附率及扫描电镜等检测评价材料的细胞相容性。结果与结论:经诱导后的骨髓间充质干细胞在支架材料上黏附、生长良好,保持正常的分裂增殖速度;随时间的增加,细胞黏附率增加,材料组较对照组黏附率强,差异有显著性意义(P<0.05)。扫描电镜观察发现细胞接种48h后细胞生长良好,与支架黏附紧密,增殖分裂活跃。说明丝素蛋白/壳聚糖三维支架材料具有良好的细胞相容性。

缓释左氧氟沙星三维丝素蛋白/壳聚糖/纳米羟基磷灰石复合骨组织工程支架材料的制备与表征

背景:课题组前期实验成功制备了三维丝素蛋白/壳聚糖/纳米羟基磷灰石复合骨组织工程支架材料。目的:制备缓释左氧氟沙星的三维丝素蛋白/壳聚糖/纳米羟基磷灰石复合骨组织工程支架材料,探讨其机械性能、物理特性和化学构成及抗生素缓释能力。方法:采用乳化固定过滤方法制备左氧氟沙星/壳聚糖载药微球,其中左氧氟沙星与壳聚糖的质量比为3/1。将5,7.5,10 g的载药微球分别加入质量分数2%的丝素蛋白/壳聚糖/纳米羟基磷灰石混合溶液中,通过冷冻干燥化学交联得到负载抗生素支架。对负载抗生素的支架进行扫描电镜观察、化学成分分析、药物缓释性能及力学、孔隙率、吸水膨胀率、热水溶失率检测。结果与结论:①扫描电镜显示,支架内壁可见载药微球,并且随着载药微球质量的增加,负载抗生素支架的空隙密度逐渐减小;②能谱分析显示,3种负载抗生素支架均含有丰富的钙离子、磷离子;③3种负载抗生素支架的释放趋势相同,在前3 d释放大于50%,呈突释效应,而后进入相对平稳的释放阶段;负载10 g载药微球支架的药物释放速率最慢,负载5g载药微球支架的药物释放速率最快;④随着载药微球质量的增加,负载抗生素支架的抗压能力与抗牵张能力逐渐增加,孔隙率、平均孔径、吸水膨胀率逐渐减小,热水溶失率逐渐增加;⑤结果表明,采用冷冻干燥化学交联法可合成负载氧氟沙星的三维骨组织工程支架,其具有良好的缓释性能、抗压抗压缩能力、吸水率及热水溶失率。

蚕丝丝素蛋白/壳聚糖支架在骨科再生医学中的作用与特点

背景:蚕丝蛋白/壳聚糖支架具有良好的生物相容性、良好的骨诱导性及良好的降解性等多种特性。目的:综述蚕丝蛋白/壳聚糖支架的结构和性能及其在骨、软骨及软组织工程再生中的应用。方法:以"壳聚糖,丝素蛋白,骨组织工程;chitosan,silk protein,bone tissue engineering"为关键词,应用计算机检索Pub Med数据库、万方数据库、CNKI数据库1998至2016年的文献,选择与壳聚糖/蚕丝蛋白支架结构、性能及在骨科领域中应用的文献。结果与结论:蚕丝丝素蛋白/壳聚糖支架兼顾丝素蛋白与壳聚糖的优点,具有良好的生物相容性,能够保证细胞在支架上良好生长,在骨组织工程中应用广泛,不仅对骨缺损修复有很大的帮助,而且在软骨损伤治疗方面也有突出的表现。同时蚕丝丝素蛋白/壳聚糖支架也常被用于软组织工程,对创口愈合、脊髓神经损伤及其他软组织损伤治疗起到重要作用。但由于各方面的原因,目前蚕丝丝素蛋白/壳聚糖支架在临床上使用仍然较少,这将是未来努力的主要方向;基于蚕丝蛋白能用于制备十字韧带和构建工程化髓核,未来丝丝素蛋白/壳聚糖支架可在肌腱韧带损伤、椎间盘组织工程方面进一步研究。

丝素蛋白/壳聚糖复合支架有良好的细胞相容性与渗透性

背景:丝素蛋白与壳聚糖为组织工程常用的支架材料,但二者单独应用均存在一定的不足,将两者混合使用可以互为改性,充分发挥优点,获取理想的复合支架材料。目的:制备丝素蛋白/壳聚糖复合支架并对其进行性能测定。方法:通过冷冻干燥方法制备丝素蛋白/壳聚糖复合支架,采用电镜扫描检测复合支架的形态结构,并进行热重分析、力学性能及细胞毒性检测。制备季铵化壳聚糖,利用核磁共振仪表征其核磁氢谱,Zeta电位仪检测其电位和粒径分布,凝胶电泳实验检测其保护DNA的情况,透射电镜观察其与DNA结合情况。结果与结论:①扫描电镜显示丝素蛋白/壳聚糖复合支架具体良好的三维孔洞结构,孔径为50-100μm;②热重分析显示当温度小于200℃时,丝素蛋白/壳聚糖复合支架的质量损失下降速度较低;当温度上升至200-500℃时,支架质量损失速度开始加快,损失量增多;在800℃时,复合支架的残余质量为38%;③丝素蛋白/壳聚糖复合支架的最大应变可以达到94.94%,最大承受应力为7.01 MPa;④CCK-8实验显示,丝素蛋白/壳聚糖复合支架对兔骨髓间充质干细胞没有细胞毒性,具有良好的细胞相容性;⑤核磁氢谱检测显示,季铵化壳聚糖的季铵化程度约为20%;⑥季铵化壳聚糖的粒径分布为(588.56±52.39)nm,季铵化壳聚糖颗粒的表面带正电荷,电位为(16.3±3.92)mV,有利于与DNA结合;⑦凝胶电泳实验显示,季铵化壳聚糖材料的比例越高,对DNA的包裹越好,当其与DNA的比例为1∶3时,对DNA达到包裹作用;⑧透射电镜显示,季铵化壳聚糖/DNA大部分的微粒呈实心圆形,微粒粒径差别较小,平均粒径约为200 nm;⑨结果表明,丝素蛋白/壳聚糖复合支架有良好的细胞相容性与细胞渗透性,利于细胞在支架间的生长。

丝素蛋白/壳聚糖三维支架与骨髓间充质干细胞的体外培养

背景:前期实验发现丝素蛋白、壳聚糖以适当的比例混合,可以互相弥补各自的不足,表现出良好的理化性质和生物学特性。目的:观察骨髓间充质干细胞在丝素蛋白/壳聚糖混合三维支架材料上的生长情况。方法:将诱导后的兔骨髓间充质干细胞接种在丝素蛋白/壳聚糖支架材料上,检测细胞黏附率,倒置显微镜及扫描电镜观察细胞生长情况。结果与结论:细胞黏附率随时间的延长而增加。倒置显微镜观察显示,丝素蛋白/壳聚糖支架上的细胞看不清,随着时间的延长,支架周围细胞增多,且有细胞伸入支架内;扫面电镜观察显示,细胞生长活跃、增殖分裂正常,细胞周围见颗粒状、丝状基质物质,细胞的微丝与支架材料黏附紧密;细胞不仅可以在材料表面贴附生长,并伸入材料之中。说明丝素蛋白/壳聚糖混合支架材料具有良好的细胞生物相容性。

丝素/壳聚糖支架的基本性能及其生物降解性的测定

目的 通过冷冻干燥法制作丝素/壳聚糖（silk fibroin/chitosan,SFCS）支架材料,为后续实验选取合适的支架奠定基础.方法将蚕丝脱胶、溶解并提纯得到适当浓度的丝素溶液,与壳聚糖溶液按4∶6混合,通过冷冻干燥法制备SFCS支架材料,测试其孔道直径、断裂强度、孔隙率、吸水溶胀率、体内外降解率等特点,通过HE染色及Micro-CT从形态学上观察支架生物降解性.结果 SFCS孔道的直径为100～120μm,断裂强度为（8.31±1.271）MPa,孔隙率为（84.32±5.14）%,吸水膨胀率为（137±7.15）%,体内降解率和体外降解率在2周时无差异（P〉0.05）,在6周和10周之间差异显著（P〈0.05）,HE染色和Micro-CT从形态学方面进一步证明其在体内有良好的生物降解性.结论 成功制作SFCS支架材料,其孔道直径、断裂强度、孔隙率、吸水膨胀率、体内外降解率等特点完全符合脊髓组织工程对支架材料的要求,为运用组织工程技术修复脊髓损伤的后续实验奠定了扎实的基础.

同轴静电纺壳聚糖/聚氧化乙烯-丝素纤维的制备及其生物活性

以壳聚糖(CS)、聚氧化乙烯(PEO)和丝素蛋白(SF)为原料,采用同轴静电纺丝制备了具有核-壳结构的CSPEO-SF纤维。通过SEM、TEM和FTIR等对纤维形貌和结构进行表征分析,研究纤维的溶胀率、孔隙率和机械性能,并对其抗菌性能和体外生物活性进行评估。结果表明:所制备的纤维具有核壳结构,孔隙率均在80%以上,溶胀率最大可达675%,断裂强度最高可达7.85 MPa;该纤维对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均具有显著抗菌性,并且具有良好的体外生物活性,在骨组织工程领域的应用具有良好的应用前景。

壳聚糖-丝素蛋白-磷酸三钙复合体用于牙周组织工程支架初探

目的构建壳聚糖-丝素蛋白-磷酸三钙多孔复合体,观察其微观结构与体内外降解情况,探讨其作为牙周组织工程软骨支架的可行性。方法采用二次冻干技术制备壳聚糖-丝素蛋白-磷酸三钙复合体,冰冻切片和扫描电镜观察微观形态;将壳聚糖-丝素蛋白-磷酸三钙复合体支架置于人工降解液及植入大鼠背部肌肉,观察体内外降解情况及生物相容性。结果壳聚糖-丝素蛋白-磷酸三钙复合体呈海绵状,孔隙较均匀,孔形态不规则,孔隙之间彼此联通,孔隙率约80%,孔径200μm左右。4周体外降解率60%,在植入早期可见一过性炎性反应,随后逐渐降解,12周时基本降解吸收。结论壳聚糖-丝素蛋白-磷酸三钙多孔复合体具有良好的三维立体结构及可降解性,是一种可行的牙周组织工程支架。

丝素蛋白/壳聚糖复合材料软骨组织工程支架的制备初探

目的三维多孔支架材料是软骨组织工程研究的重要基础,本实验用全物理过程将天然材料丝素蛋白(silk fibroin,SF)和壳聚糖(Chitosan,CS)适当比例混合制备三维支架材料,探索其方法的可行性。方法将蚕丝脱胶、溶解并提纯得到适当浓度的丝素蛋白溶液,将丝素蛋白溶液与壳聚糖溶液按适当比例混合,用冷冻干燥法制备成SF-CS三维支架材料。观察指标:采用液体替代法检测SF-CS支架材料空隙率,并应用显微镜观测其平均孔径及扫描电镜观察其超微结构。结果SF-CS三维支架材料平均孔径为60um,孔隙率为82.9%,完全符合作为组织工程材料的要求。结论用全物理过程可初步制备SF-CS三维支架材料,具有良好的三维结构和较好孔隙率,该方法有简单易操作,可重复性好等优点,该材料有望作为软骨组织工程研究中较为理想的支架材料。

丝素蛋白三维支架与骨髓间充质干细胞的生物相容性观察

目的制备丝素蛋白三维支架,并与大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）复合培养,观察二者的生物相容性。方法将家用蚕丝反复脱胶,计算脱胶率;将脱胶的蚕丝溶于Li Br溶液中获得丝素蛋白溶液,置于真空冷冻干燥机中作用24 h,获得成型的丝素蛋白三维支架。液体置换法计算支架孔隙率;将该支架与MSCs复合培养,记录支架降解1~8周降解液的p H值变化,MTT法检测支架的细胞毒性（以吸光度值表示）,扫描电镜下观察支架结构及MSCs生长情况。结果平均脱胶率为20.72%,平均支架孔隙率为65.25%。复合培养1~8周降解液p H值分别为6.98、6.93、6.90、6.83、6.72、6.75、6.78、6.76。两组吸光度值比较,P均〉0.05。扫描电镜下观察到该支架具有三维空间结构,孔隙大小分布较均匀;复合物中可见MSCs在支架上生长良好,部分细胞嵌入支架孔隙中,与支架黏附良好;细胞外基质分泌量多,细胞与细胞间、细胞与支架间通过细胞外基质紧密相连。结论成功制备丝素蛋白三维支架,该支架对MSCs无毒性作用,具有良好的生物相容性,是一种理想的韧带组织工程学支架材料。

壳聚糖-丝素蛋白-磷酸三钙支架的力学性能及异位成骨能力的研究

目的对壳聚糖-丝素蛋白支架(CS-SF)与壳聚糖-丝素蛋白-磷酸三钙支架(CS-SF-TCP)的力学性能及早期体内成骨能力进行实验研究,以寻求更适合牙周组织工程的支架材料。方法采用二次冻干技术制备2种支架,用Instron5544拉伸实验机对该2种支架的压缩模量进行测试,并将2种支架与矿化诱导后的骨髓基质细胞(BMSCs)复合培养3d后无菌条件下移植入裸鼠背部皮下,4周时取出标本行大体观察、苏木精-伊红染色、Ⅰ型胶原免疫组织化学染色,观察2种支架的体内成骨能力。结果力学性能检测结果显示:CS-SF组与CS-SF-TCP组的抗压强度分别为(0.44±0.15)MPa、(1.44±0.96)MPa。CS-SF-TCP组高于CS-SF组(P<0.05)。早期体内成骨能力结果:肉眼观察取出的植入物均有薄膜包绕。HE染色可见CS-SF+BMSCs与CS-SF-TCP+BMSCs组可见支架中心长入大量的细胞并有胶原样物质生成。免疫组织化学见2组均有不同程度的Ⅰ型胶原阳性表达,CS-SF-TCP+BMSCs组表达要高于CS-SF+BMSCs组(P<0.05)。结论与CS-SF支架相比,CS-SF-TCP支架有更好的力学性能及诱导BMSCs形成新生的骨组织的能力,更适合于牙周组织工程的支架。