丝聚合蛋白在特应性皮炎儿童表皮中的表达及神经酰胺对其影响的研究

目的研究特应性皮炎（AD）儿童急性病变处表皮丝聚合蛋白（FLG）表达的情况，并探讨神经酰胺对FLG表达的影响。方法通过皮肤环钻术获取2012年6月至2013年6月解放军空军总医院儿科门诊收集的15例AD患儿（AD组）急性期病损皮肤标本，并选取我院整形科患儿进行皮肤移植手术剩余的正常皮肤作为对照组皮肤标本，通过免疫组织化学方法研究FLG表达情况。培养原代角质形成细胞和HaCaT细胞，分为实验组和平行对照组，应用细胞计数试剂盒（CCK-8）检测不同浓度的神经酰胺（0．25、0．5、1．25、2．5、5、10μmol／L）对2种细胞的毒性作用，筛选对细胞无毒的较大浓度作为实验浓度。给予实验浓度神经酰胺干预24、48h后（平行对照组不加入神经酰胺），通过实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应及蛋白质印迹法（Western blot）在mRNA水平及蛋白水平检测FLG的表达变化。结果免疫组织化学染色结果提示，与对照组相比，AD组皮肤FLG的表达明显减弱。CCK-8试剂盒检测结果显示神经酰胺对细胞的损伤有明显的浓度依赖性，最终选取2μmol／L为实验浓度。给予神经酰胺2μmol／L干预24、48h后，HaCaT细胞和原代角质形成细胞FLGmRNA水平均高于平行对照组[干预24h后：（2．31±0．11）比（1．00±0．47）、（1．92±0．75）比（1．00±0．42），干预48h后：（4．20±0．32）比（1．00±0．52）、（3．73±0．55）比（1．00±0．49）]，且干预48h后mRNA水平高于干预24h后，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。给予神经酰胺2μmol／L干预48h后，Western blot检测结果显示，原代角质形成细胞FLG蛋白表达水平明显高于平行对照组。结论AD患儿表皮FLG表达减少，其异常表达导致皮肤屏障功能障碍可能是AD发病的病因之一。神经酰胺可能通过改善AD患儿FLG的表达，从而改善AD的皮肤屏障功能。

丝聚合蛋白在寻常型鱼鳞病发病机制中的研究进展

寻常型鱼鳞病(ichthyosis vulgaris,IV)是一种常见的基因遗传性疾病,以干燥,鳞屑为特征,在人类遗传性疾病中占有较高发病率;寻常型鱼鳞病常与其他过敏性疾病相伴随,丝聚合蛋白(filaggrin,FLG)基因的突变导致表皮屏障功能的受损,可加重或者诱发过敏反应。鱼鳞病尚无满意的治疗方法,目前治疗以外用药为主,主要用润肤剂,因此,进一步探讨寻常型鱼鳞病的发病机制,研制新的、高效的药物,对治疗寻常型鱼鳞病及其相关疾病都具有重要意义。

性别对皮肤屏障障碍模型小鼠表皮厚度及丝聚合蛋白表达的影响

目的探索性别对小鼠皮肤屏障功能的影响。方法用丙酮-乙醚法和胶带粘贴法复制皮肤屏障功能障碍模型、观察性别对皮肤屏障障碍模型小鼠的表皮厚度和丝聚合蛋白(FLG)表达的影响。结果与正常对照组相比,丙酮-乙醚组和胶带粘贴组小鼠表皮厚度增宽(P<0.05);正常对照组雄鼠与雌鼠相比,表皮厚度无差异;而丙酮-乙醚组和胶带粘贴组雌鼠表皮厚度均较同组雄鼠增加(P<0.05)。丙酮-乙醚组和胶带粘贴组与正常对照组相比,FLG蛋白表达水平降低(P<0.05),同组雄鼠表达水平均低于雌鼠(P<0.05)。结论皮肤机械屏障功能被破坏后,小鼠的表皮厚度变化存在性别差异,而FLG蛋白表达在正常或是皮肤屏障障碍小鼠中的性别差异均有统计学意义,提示在研究小鼠皮肤屏障障碍相关疾病的发病机制和治疗措施时应重视性别差异。

特应性皮炎儿童表皮丝聚合蛋白表达的变化

目的研究特应性皮炎(atopic dermatitis,AD)患儿急性病损期表皮丝聚合蛋白(FLG)的表达情况,从皮肤屏障功能障碍方面探讨特应性皮炎的发病机制,从而为临床治疗提供依据。方法选取中、重度AD患儿作为研究对象(n=15),通过皮肤环钻术获取急性期病损皮肤标本;以正常皮肤为对照(n=15例),采用免疫组化和图像分析系统对丝聚合蛋白的表达进行测定,并对2组儿童表皮丝聚合蛋白的表达情况进行对比分析。结果 AD组患儿表皮丝聚合蛋白染色强度较正常对照组减弱,应用图像分析系统对其染色结果进行分析显示,平均光密度、积分光密度分别为0.208±0.047、4.032±0.919,均明显低于正常对照组(0.296±0.039、9.418±2.264),差异有显著性(P<0.05,P<0.01);阳性面积百分比为(14.6±6.6)%,略低于正常对照组的(16.7±2.4)%,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论 AD患儿急性病损期皮肤存在丝聚合蛋白表达的异常,其异常表达导致皮肤屏障功能障碍可能是AD发病的病因之一。

丝聚合蛋白在正常人及银屑病患者皮肤的原位探测

目的：了解丝聚合蛋白在正常及银屑病皮损中的分布及维甲酸对其影响。方法：应用免疫组化技术原位探测正常人正常及维甲酸处理后皮肤、银屑病皮损及未累及皮肤丝聚合蛋白的分布。结果：正常人阳性区仅见于颗粒层细胞间。维甲酸使阳性带“上移”。银屑病皮损阳性着色程度及范围明显强于正常人及维甲酸处理后皮肤，也强于未累及皮肤，差异有统计学意义。结论：丝聚合蛋白在银屑病皮损中过早及过度表达，维甲酸可能对这种异常表达有抑制作用。

针对丝聚合蛋白基因RNA干扰重组慢病毒载体的构建及筛选

目的构建丝聚合蛋白（FLG）基因RNA干扰（RNA interference,RNAi）慢病毒表达载体。方法设计针对人FLG基因的mRNA干扰靶序列,合成相应双链DNA,通过BamH I和EcoRI酶切后的PGLV/H1/GFP载体连接产生shRNA载体,并与pHelper 1.0、pHelper 2.0两种载体共转染293T细胞培养,获得重组慢病毒载体后,转染目的细胞,实现针对FLG基因的RNA干扰。结果经鉴定该实验的慢病毒载体,对人正常皮肤细胞HACAT干扰效果达75%-95%,以RNAi3的沉默效应最佳。结论重组的慢病毒载体为有关FLG基因的进一步研究奠定良好实验基础,并能广泛用于体内基因治疗及基因功能研究。

汉族寻常型鱼鳞病丝聚合蛋白基因突变的研究

目的:检测汉族寻常型鱼鳞病(Ⅳ)丝聚合蛋白基因的突变。方法:提取65例Ⅳ患者及70例健康对照者的基因组DNA,采用MassARRAY(r)分子量阵列技术分析丝聚合蛋白基因5个突变位点(3321delA,441delA,1249 insG,E1795X和S3296X)。结果:34例(52.31%)Ⅳ患者发现丝聚合蛋白3321delA基因突变,对照组有4例(5.71%)发生该基因突变;1例(1.54%)患者发现丝聚合蛋白441delA基因突变,对照组没有发现该基因突变。患者组及对照组均未见丝聚合蛋白1249insG,E1795X及S3296X基因突变。结论:丝聚合蛋白基因突变可能与汉族人群Ⅳ易感性相关。丝聚合蛋白33-21delA基因突变可能是汉族Ⅳ主要的突变位点。

中间丝聚合蛋白在特应性皮炎患者皮损中的表达

目的:探讨中间丝聚合蛋白(Filaggrin,FLG)在特应性皮炎(Atopic dermatitis,AD)患者皮损的表达及其临床意义。方法:采用SP免疫组化方法检测16例AD患者皮损及14例对照组皮肤组织内FLG的表达,用图像分析软件Image-Pro Plus(IPP)判定FLG在AD患者皮损及健康者皮肤组织中阳性染色面积百分比。结果:FLG在AD患者皮损及健康者皮肤角质层及颗粒层均有表达,胞质染色多见;阳性染色面积百分比分别为(18.92±4.40)%及(23.00±2.28)%;FLG在AD患者皮损阳性染色面积明显低于健康人皮肤(t=-3.11,P=0.004)。结论:FLG在AD患者皮损中表达降低,可能是导致AD患者皮肤屏障功能障碍的原因。

丝聚合蛋白基因突变及其相关皮肤病的研究进展

丝聚合蛋白又称为微丝凝聚蛋白,是一种广泛存在于皮肤表皮的碱性蛋白质。主要功能是与角蛋白中间丝相互作用,协同角蛋白的聚集,从而起到维护皮肤的屏障的功能。近几年来,随着对丝聚合蛋白基因(FLG)的研究的不断深入,越来越多的证据显示,该基因的突变与多种皮肤疾病的发生相关。明确FLG基因与其相关疾病的关系,不仅能够加深对该疾病的认识,而且还可以从基因水平改变FLG基因的表达来改善皮肤的屏障功能。本文主要对FLG基因突变所引起的皮肤相关疾病进行综述。

特应性皮炎与丝聚合蛋白基因的相关性研究

特应性皮炎(Atopic Dermatitis,AD),又称异位型湿疹,是一种常见的慢性皮肤病,其特征是皮肤干燥、瘙痒、皮损多形性并有渗出倾向,常伴有哮喘、过敏性鼻炎及血清IgE增高等特点,在儿童及青少年中常见。近些年来,AD发病率呈逐年上升趋势。本病病因和发病机制尚不清楚。通过对大量临床文献研究发现,遗传因素是特应性皮炎发病的主要的易感因素,有学者指出特应性皮炎属多基因遗传病。大量文献报道指出,特应性皮炎的发病与丝聚合蛋白基因(Filag Grin,FLG)相关,兹以综述。

荆豆凝集素-1受体及丝聚合蛋白在某些增生性皮肤病中的表达

荆豆凝集素－１受体及丝聚合蛋白在某些增生性皮肤病中的表达高兴华王雅坤左旭陈洪铎荆豆凝集素－１（ｕｌｅｘｅｕｒｏｐｅｕｓａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ－１，ＵＥＡ－１）是与Ｌ－岩藻糖呈特异结合的凝集素；丝聚合蛋白（ｆｉ－ｌａｒｇｒｉｎ）是一种３００００的角蛋白，...

南方汉族人特应性皮炎中间丝聚合蛋白基因多态性检测与分析

目的探讨中间丝聚合蛋白（filaggrin，FLG）基因多态性与南方汉族人特应性皮炎（atopic dermatitis，AD）的相关性。方法提取50例南方汉族AD患者及100名健康对照者的基因组DNA，采用PCR及直接测序法，对FLG基因已报道的13个单核苷酸多态性（3321delA、441delA、1249insG、E1795X、S3296X、R501X、2282de14、R2447X、S2889X、7945delA、3702delG、Q2417X、R4307X）进行测序。结果14例（28oA）AD患者检测到FLG3321delA多态性位点，6例（12％）AD患者检测到FLG441delA多态性位点，健康对照组无1例检测到该多态性位点。患者组及对照组均未检测到FLG（1249insG、E1795X、S3296X、R501X、2282del4、R2447X、S2889X、7945delA、3702delG、Q2417X、R4307X）基因多态性。结论FLG基因可能与南方汉族人群AD易感性相关。

寻常型鱼鳞病患者皮损中间丝聚合蛋白及其基因的改变

目的探讨寻常型鱼鳞病患者中间丝聚合蛋白（FLG）基因突变与FLG及兜甲蛋白在寻常型鱼鳞病患者皮损组织中的表达及其临床意义。方法采用sP免疫组化方法检测10例汉族寻常型鱼鳞病患者皮损及14例健康对照皮肤组织内FLG及兜甲蛋白的表达，用图像分析软件ImagePro plus（IPP）判定FLG及兜甲蛋白在寻常型鱼鳞病患者皮损及正常皮肤组织中表达的阳性单位（PU值）。提取10例汉族寻常型鱼鳞病患者及100例健康对照者的基因组DNA，采用PCR及直接测序法，对FLG基因已报道的13个突变位点（3321delA、441delA、1249insG、E1795X、S3296X、R501X、2282del4、R2447X、S2889X、7945delA、3702delG、Q2417X、R4307X，进行测序。结果FLG在寻常型鱼鳞病皮损及健康对照皮肤角质层、颗粒层、棘层及基底层细胞均有表达，胞质染色多见；寻常型鱼鳞病皮损阳性染色PU值明显低于健康对照皮肤（分别为0．2082±0．0080和0．2300±0．0228，两组比较，t=3．30，P〈0．01）。兜甲蛋白在寻常型鱼鳞病皮损及健康对照皮肤颗粒层、棘层及基底层细胞均有表达，胞质及胞核染色多见；寻常型鱼鳞病皮损表达的PU值明显低于健康对照皮肤（分别为0．1370±0．0112和0．1493±0．0073，两组比较，t=3．07，P〈0．01）。7例寻常型鱼鳞病患者检测到FLG 3321delA突变位点，2例检测到FLG 441delA突变位点，健康对照组未检测到FLG基因突变位点。结论FLG（3321delA，441delA）可能是汉族寻常型鱼鳞病患者的突变位点之一。FLG及兜甲蛋白表达下降可能与寻常型鱼鳞病患者皮肤屏障功能障碍有关。

中间丝聚合蛋白基因多态性与特应性皮炎发病及临床表型的相关性

目的 探讨中间丝聚合蛋白（FLG）基因多态性与特应性皮炎（AD）发病及临床表型的相关性。方法 采用问卷调查的形式收集261例AD患者伴发过敏性鼻炎、哮喘病史和疾病严重度评分等资料，对部分患者进行混合食物过敏原和混合吸入性过敏原筛选、血清总IgE抗体和嗜酸性粒细胞阳离子蛋白水平检测。采用重叠PCR和DNA测序法对上述AD患者和276例健康对照FLG基因3号外显子17个多态性位点（R444G、T454A、P478S、H519N、D836D、S1482Y、A1805V、R1891Q、1961Q、S2166S、Y2194H、H2330H、D2339N、S2366T、E2398Q、K2444E、E2652D）进行基因分型。结果 二项逻辑回归分析和卡方检验未发现17种FLG多态位点与AD发病相关（均P 〉 0.05）。H519N与AD伴发哮喘相关（χ2 = 8.680，P = 0.011），AA基因型可增加AD患者发生哮喘的风险（P = 0.004，OR = 1.061， 95% CI 1.016-1.109）。S2366T和K2444E与AD患者食物敏感相关（χ2值分别为6.520和6.121，P值分别为0.038和0.047），S2366T的GG ＋ GC基因型（P = 0.012，OR = 1.396， 95% CI 1.054-1.849）和G等位基因（P = 0.037，OR = 1.350， 95% CI 1.008-1.807）可提高AD患者食物敏感的风险。K2444E的AA ＋ AG基因型（P = 0.013，OR = 1.393， 95% CI 1.049-1.850）和G等位基因（P = 0.028，OR = 1.380， 95% CI 1.025-1.857）可提高AD患者食物敏感的风险。结论 中国汉族人群 FLG基因多态性可能是一些 AD相关临床表型的危险因素，H519N可能与AD伴发哮喘相关，S2366T和K2444E则可能与AD伴食物敏感相关。

蚕丝蛋白与类动物丝蛋白聚合物共混膜的振动光谱研究

Vibrational spectroscopy(ATR-FTIR and Raman) was used to investigate the interaction and conformation transition in the blend films of silk fibroin(SF) and silk-protein like polymers(P1, P2) containing the oligopeptide segments[(Ala) 4, GlyAlaGlyAla] which derived from the crystal region of spider dragline silk and silkworm(Bombyx mori) silk. The results revealed that the intermolecular hydrogen-bond interaction, which was formed between the molecular chains of SF and the oligopeptide segments in P1 and P2, induced a partial random coil/α-helix conformation transfer to β-sheet conformation after blending. And β-sheet and random coil/α-helix conformation coexisted in the SF/P1 and SF/P2 blend films, while the predominant conformations in the pure SF and P1 films were random coil/α-helix. These conclusions would be significant for artificial spinning of the regenerated silk fibroin.

基因工程类丝弹性蛋白聚合物（SELP）水凝胶在药物控制释放方面的研究进展

类丝弹性蛋白聚合物(SELP)是一种通过基因工程方法合成的蛋白质嵌段共聚物，其结构由类丝蛋白(GAGAGS)和类弹性蛋白(GVGVP)的肽段单元串连重复组成。由于具有良好的生物识别性，生物相容性和生物降解性，且能在生理条件下发生原位不可逆溶胶-凝胶转变，SELP在生物医学工程方面展示了广泛的应用前景，尤其作为用于药物控制释放的新型生物医学材料。本文就SELP的生物合成、性质及其水凝胶作为新型的生物材料基质在药物控制释放方面的应用做一综述。

儿童特应性皮炎皮肤屏障功能相关蛋白表达情况

目的:了解特应性皮炎患儿皮肤屏障功能相关蛋白的表达情况。方法:应用免疫组化方法检测特应性皮炎患儿和正常儿童的中间丝聚合蛋白、内披蛋白、兜甲蛋白等皮肤屏障功能相关蛋白(表皮终端分化蛋白)的表达差异,采用染色强度(0~5分)反映相关蛋白的表达水平。结果:正常儿童皮肤的中间丝聚合蛋白、内披蛋白、兜甲蛋白的染色强度分别为(4.49±0.14)分、(4.39±0.14)分、(4.56±0.15)分,特应性皮炎患儿受累部分皮肤分别为(2.19±0.17)分、(2.29±0.11)分、(1.89±0.22)分,两组比较差异均有统计学意义(P均<0.01)。特应性皮炎患儿和正常儿童的中间丝聚合蛋白、兜甲蛋白均主要表达于颗粒层,正常儿童内披蛋白主要表达于棘细胞上层和颗粒层,特应性皮炎患儿内披蛋白主要表达于棘细胞上层。结论:特应性皮炎患儿皮肤屏障功能相关蛋白表达下降,提示存在皮肤屏障功能障碍。

角蛋白裂解法治疗亚临床阶段人乳头瘤病毒感染的临床试验研究

目的探讨角蛋白裂解法治疗亚临床阶段人乳头瘤病毒感染的临床效果。方法自行配置药物治疗亚临床阶段人乳头瘤病毒感染尖锐湿疣患者31例,涂擦整个外阴表皮和肛周表皮,每周记录皮损情况,并记录是否有病理复发情况。同时在皮肤的第二个增殖周期是做HPV-DNA-PCR检查,并记录检查的结果。结果 31例患者在用药过程中,在一个皮肤增殖周期内有约20例复发,在第一个皮肤增殖周期中未见有疣体长出皮肤表面。HPV-DNA-PCR、阴性率为35.5%。第二个周期是为74.2%。第三个周期时为80.6%。仍然约有20%的病理查出HPV-DNA阳性,但是未见有疣体长出。在检验出的DNA分型中其中HPV6型阳性率最高,HPV6,HPV11,HPV42,HPV18,HPV52,HPV56这六种DNA分型出现约95%的概率。结论本法治疗亚临床阶段人乳头瘤病毒感染效果良好,副作用小。

FLG、分泌型卷曲相关蛋白1、转化生长因子β1在口腔黏膜下纤维化患者中的表达

目的 探讨丝聚蛋白(filaggrin, FLG)、分泌型卷曲相关蛋白1(secreted frizzled-related protein-1,SFRP1)、转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)在口腔黏膜下纤维化(oral submucous fibrosis,OSF)患者中的表达。方法 选取OSF患者70例,依据病理学分为OSF早期组、中期组、晚期组,另选取同时段健康人群27例,作为正常组。对四组研究对象FLG、SFRP1、TGF-β1表达水平进行检测,使用免疫组化SP法检测FLG水平;使用酶联免疫吸附法检测SFRP1水平;使用地高辛标记TGF-β1 DNA探针检测TGF-β1表达水平。分析上述指标在OSF中的相关性。对分析中具有统计学意义的指标进行多指标Logistics回归分析。结果OSF早期组患者FLG水平高于正常组,OSF中期组患者FLG水平高于正常组、OSF早期组,OSF晚期组患者FLG水平高于其他三组(P<0.05)。OSF早期组患者SFRP1表达高于正常组,OSF中期组患者SFRP1表达高于正常组、OSF早期组,OSF晚期组患者SFRP1表达高于其他三组(P <0.05)。OSF早期组患者TGF-β1水平高于正常组,OSF中期组患者TGF-β1水平高于正常组、OSF早期组,OSF晚期组患者TGF-β1水平高于其他三组(P<0.05)。FLG、分泌型卷曲相关蛋白1、转化生长因子β1之间呈正相关。FLG、分泌型卷曲相关蛋白1、转化生长因子β1水平与OSF严重程度具有相关性。结论 FLG、SFRP1、TGF-β1在OSF患者中均呈异常高表达,并且具有一定的相关性。对FLG、分泌型卷曲相关蛋白1、转化生长因子β1指标进行检测,对OSF严重程度的临床诊断具有一定帮助。

亚油酸对角质形成细胞屏障相关蛋白表达的影响

目的:检测亚油酸对角质形成细胞屏障相关蛋白Filaggrin、keratin-14和claudin-1表达的影响。方法:选用不同浓度的亚油酸(2 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL)刺激人角质形成细胞,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞存活率,并绘制细胞生存/抑制曲线;qRT-PCR和Western blot分别检测不同浓度亚油酸刺激后角质形成细胞Filaggrin、keratin-14和claudin-1的mRNA及蛋白水平的变化。结果:角质形成细胞生存率随亚油酸样品浓度升高而降低。角质形成细胞中Filaggrin和keratin-14的表达随着亚油酸样品浓度升高表达明显增加。claudin-1表达在2 ng/mL和10 ng/mL亚油酸作用下明显增加,而在20 ng/mL浓度下,claudin-1表达下降。结论:在2 ng/mL和10 ng/mL亚油酸作用下,Filaggrin、keratin-14和claudin-1表达随着亚油酸作用浓度升高而增加。