丝聚蛋白与皮肤病相关性的研究进展

丝聚蛋白是与表皮角蛋白相关的一种蛋白,它能够连接角蛋白(主要是角蛋白1和10,或其他角蛋白),并使其聚集成角蛋白纤维束,因而在表皮的屏障功能中也具有重要作用。一些研究者发现,丝聚蛋白的失功能突变可能是寻常型鱼鳞病的发病原因,同时也是特应性皮炎的一个重要遗传易感因素。随后研究进一步证实了其与一些特应性疾病的表型具有较强的关联性。然而关于其失功能突变在表皮屏障功能中的确切作用机制仍不清楚。本文主要对近年来关于丝聚蛋白的研究作一综述。

银屑病患者皮损中角蛋白10、14、17及丝聚蛋白表达与分布

目的:研究银屑病患者皮损中角蛋白10、14、17及丝聚蛋白的分布、表达与皮肤屏障功能受损的相关性。方法以20例银屑病患者皮损及10例正常人皮肤为研究对象,运用免疫组化及western blot测定两组角蛋白10、14、17及丝聚蛋白的分布与表达。结果:与正常人皮肤相比,银屑病患者的皮损组织中角蛋白10表达和丝聚蛋白表达下调;角蛋白14及17表达上调,但表达程度及部位不同,其差异均具有统计学意义。结论银屑病患者的皮肤屏障功能有受损,可能是银屑病持续发病机制之一。

丝聚蛋白、转谷酰胺酶和hornerin mRNA在银屑病皮损中的表达

目的:检测银屑病皮损中丝聚蛋白(filaggrin)、转谷酰胺酶(transglutaminase)及hornerin等细胞分化标志分子基因的表达。方法:应用RT-PCR方法检测银屑病皮损中丝聚蛋白、转谷酰胺酶及hornerin mRNA的表达。结果:正常皮肤丝聚蛋白和转谷酰胺酶只有少量mRNA表达,而银屑病皮损区丝聚蛋白和转谷酰胺酶mRNA的表达显著升高。正常皮肤未见hornerin mRNA的表达,而银屑病皮损区有明显表达。结论:丝聚蛋白、转谷酰胺酶及hornerin三种细胞分化分子在银屑病有异常表达,这些分子可能参与银屑病的发病。

特应性皮炎与丝聚蛋白研究进展

丝聚蛋白(FLG)基因的失功能突变可使表皮FLG含量减少或缺失,进而引起表皮屏障功能发生改变,增加特应性皮炎(AD)的患病风险。本文对FLG在表皮屏障形成中的作用、FLG基因结构、FLG基因在AD患者中的突变情况及FLG基因突变与AD临床表型的相关性进行综述。

快速斑点酶标法检测抗丝聚蛋白抗体

目的建立一种快速、简便的抗丝聚蛋白抗体（anti-filaggrin antibody,AFA）的检测方法。方法采用快速斑点酶标法（Rapid-Dot-ELISA,R-Dot-ELISA）检测15份AFA阳性的类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis,RA）患者和15份AFA阴性的正常健康者血清的AFA。检测中采用不同浓度的丝聚蛋白、不同的封闭液、不同浓度的酶标抗体,摸索检测条件。确定检测条件后,采用R-Dot-ELISA和ELISA法检测100例RA患者和150例包括系统性红斑狼疮（SLE）、强直性脊柱炎等非RA的自身免疫病患者和50例健康者血清的AFA,比较两种方法检测AFA的一致性,并判断R-Dot-ELISA检测AFA对RA的诊断价值。结果丝聚蛋白浓度为40-160μg/m L,封闭液为含1%BSA和10%小牛血清的PBS,酶标抗体稀释度为1∶80-1∶320是较合适的检测条件。R-Dot-ELISA与ELISA法检测AFA,结果一致率为98%（r=0.947,P〈0.05）,对RA诊断的敏感度、特异度等统计学指标无差异。结论 R-Dot-ELISA检测AFA快速、简便,且对RA的诊断具有较高的敏感性及特异性,适用于基层流行病学调查和临床快速诊断。

丝聚蛋白在口腔黏膜下纤维性变中的表达

目的研究丝聚蛋白(filaggrin,FLG)在口腔黏膜下纤维性变(oral submucous fibrosis,OSF)组织中的表达与分布,探讨FLG在OSF发生发展中的意义。方法选取10例人正常口腔颊黏膜组织(正常口腔黏膜组)和OSF早期(OSF早期组)、中期(OSF中期组)、晚期(OSF晚期组)各10例颊黏膜组织,采用免疫组织化学方法检测各组FLG的表达和分布情况,观察FLG在上皮中的表达情况,对FLG表达阳性的细胞进行计数,计算各组的FLG阳性细胞表达率。结果正常口腔颊黏膜组大部分标本上皮中FLG表达为阴性;OSF颊黏膜上皮中均可见FLG的阳性表达,随着OSF病变程度加重,FLG阳性表达细胞数目增加。在OSF早期组FLG阳性表达主要集中在上皮的颗粒层和角化层,OSF中期组FLG阳性表达的上皮细胞逐渐增多;在OSF晚期组中几乎整个上皮层细胞可见胞浆胞核中呈FLG阳性表达。OSF早期组、OSF中期组、OSF晚期组的FLG阳性细胞表达率分别为(24.63±9.06)%、(54.23±10.63)%和(83.97±8.72)%,且OSF组中的FLG阳性细胞表达率均高于正常黏膜组(P<0.05),差异具有统计学意义。结论 FLG在OSF上皮中表达较正常口腔黏膜上皮增强,且随着OSF病变加重,FLG在OSF上皮中的表达水平上调。FLG的表达异常可能与OSF上皮角质形成细胞的终末分化发生紊乱有关。

特应性皮炎与丝聚蛋白基因突变相关性研究进展

特应性皮炎(AD)是一种常见的慢性反复性炎症性皮肤疾病。遗传因素是特应性皮炎发生、发展的重要因素。丝聚蛋白基因(FLG)被定位于人类染色体1q21的EDC区域内,该基因发生突变后导致丝聚蛋白功能缺失进而皮肤屏障发生破坏,与AD的发生密切相关。研究表明,不同种族和不同区域间AD患者FLG基因突变位点可能不同。FLG基因突变与AD发病关系的研究有利于进一步加深对AD发病机制的认识,并可能为AD的治疗提供新的方向。

斑秃患者皮损丝聚蛋白的表达

目的探讨丝聚蛋白表达水平与斑秃患者特应性素质和疾病严重程度的关系。方法分析37例斑秃患者的临床资料及实验室资料，取斑秃皮损和正常对照的头皮进行免疫组化染色，用荧光半定量RT—PCR检测22例斑秃皮损和正常对照的头皮丝聚蛋白在蛋白质和信使RNA的表达水平。结果斑秃皮损丝聚蛋白和其mRNA的表达水平较正常对照明显降低（P〈0．05或0．01），而且这种降低在脱发面积较大、病程较长和有指甲改变的斑秃患者中更明显，但降低水平与是否伴发特应性疾病无关。斑秃患者伴特应性疾病组与不伴特应性疾病组之间性别、发病年龄、病程、脱发面积、家族史、甲改变、血清IgE和嗜酸粒细胞升高的发生率等方面差异均无统计学意义。结论斑秃患者其皮损丝聚蛋白及其mRNA的表达水平均降低，提示丝聚蛋白可能参与斑秃的发病，并和疾病的严重程度有关。

镇心安神方对特应性皮炎样动物模型维生素D及丝聚蛋白表达的影响

目的探讨镇心安神方(ZXASF)对特应性皮炎(AD)样小鼠模型血清及皮肤组织1,25(OH)2-D3、维生素D受体及Filaggrin表达的影响。方法采用1-氯-2,4-二硝基苯(DNCB)反复刺激BALB/c小鼠背部皮肤,建立AD样动物模型。54只小鼠随机分为6组(正常对照组、模型组、维生素D组、ZXASF低、中、高剂量组),每组9只。造模14 d后,ZXASF低、中、高剂量组分别按含ZXASF生药量9.9 g/(kg·d)、18.18 g/(kg·d)及36.36 g/(kg·d)的颗粒水溶液灌胃,维生素D组灌服维生素D滴剂2000 IU/(kg·d),模型组及正常对照组灌服生理盐水0.1 mL/(10g·d),共治疗14 d,观察各组模型小鼠皮损面积及皮炎评分,ELISA检测模型动物血清1,25(OH)2-D3、维生素D受体及皮肤组织Filaggrin含量,HE染色观察皮损组织病理学变化,免疫组织化学检测皮肤组织FLG的表达。结果末次给药后模型组皮炎评分、皮炎面积均高于正常对照组(P<0.01),模型组皮肤组织病理学表现为角化过度、棘层肥厚、海绵形成、真皮层炎性细胞浸润,ZXASF低、中、高剂量组及维生素D组小鼠背部皮损的红斑、糜烂、渗液及结痂减轻,皮炎评分及皮损面积均低于模型组(P<0.05)。与正常对照组比较,模型组血清1,25(OH)2D3、维生素D受体及皮肤组织Filaggrin含量均降低(P<0.05)。与模型组比较,ZXASF中剂量组血清1,25(OH)2D3、维生素D受体及皮肤组织Filaggrin含量升高(P<0.05),ZXASF低、高剂量组血清1,25(OH)2D3含量低于维生素D组(P<0.05),ZXASF中剂量组血清VDR含量高于维生素D组(P<0.05)。结论ZXASF可以改善AD样动物模型皮损,上调动物模型血清1,25(OH)2-D3、维生素D受体及皮肤组织Filaggrin的表达,以中剂量组作用最为显著。

寻常性银屑病皮肤屏障功能及丝聚蛋白表达水平的检测及意义

目的通过两种不同的方法对咪喹莫特(imiquimod,IMQ)诱发银屑病样小鼠模型进行皮肤屏障功能检测,并通过寻常性银屑病患者皮损中皮肤屏障功能生物学指标的变化证实皮肤屏障功能参与银屑病的发病过程,从而对早期银屑病的临床治疗提供一定的理论依据。方法通过HE及免疫荧光染色证实IMQ可诱发银屑病样炎症,通过伊文思蓝(evans blue)染料渗出实验和异硫氰酸荧光素(FITC)结合血清白蛋白渗透性实验评估小鼠皮肤屏障功能,应用免疫组化及Real-time PCR对银屑病患者皮损中丝聚蛋白的表达水平进行检测。结果在咪喹莫特诱发银屑病样小鼠模型中,伊文思蓝染料渗出实验及异硫氰酸荧光素(FITC)结合血清白蛋白渗透性实验结果显示,银屑病模型组皮肤由内向外的渗透性及由外向内的渗透性较正常对照组均增加,差异有统计学意义(P<0.05),说明银屑病模型组小鼠的皮肤屏障功能较正常对照组减弱;寻常性银屑病患者皮损中丝聚蛋白表达水平及m RNA表达水平均较正常人降低(P<0.05),说明皮肤屏障功能亦有受损。结论皮肤屏障破坏存在于寻常性银屑病的发病过程中,恢复银屑病患者的皮肤屏障功能应当作为银屑病治疗的重要内容之一,在银屑病治疗中早期就应当重视应用止痒药物及保湿剂,从而加快皮肤屏障的修复。

窄谱中波紫外线照射对特应性皮炎小鼠皮损中丝聚蛋白和胸腺基质淋巴生成素表达的影响及可能机制

目的检测窄谱中波紫外线(narrow-band ultraviolet B,NB-UVB)照射对特应性皮炎(atopic dermatitis,AD)小鼠皮损中丝聚蛋白(filaggrin,FLG)和胸腺基质淋巴生成素(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)表达的影响,探讨其治疗AD的可能机制。方法16只C57BL/6J小鼠分为照光组和非照光组,每组8只,于实验第1~9天,每日将钙泊三醇(2 nmol/L)局部外用于2组小鼠背部制备AD小鼠模型,模型制备同时照光组采用NB-UVB照射,隔日1次。观察2组小鼠皮损临床表现及第2、4、6、8天皮损严重程度评分和病理学表现;采用实时荧光定量PCR法检测AD小鼠皮损中FLG、TSLP mRNA相对表达量及AD小鼠皮损引流淋巴结中白细胞介素(interleukin,IL)-4、IL-13、协同刺激分子配体(OX40-ligand,OX40L)、TSLP受体(thymic stromal lymphopoietin receptor,TSLPR)mRNA相对表达量。结果照光组小鼠第2、4、6、8天皮损严重程度评分[(0.670±0.516)、(1.330±0.516)、(1.670±0.516)、(2.170±0.408)分]均低于非照光组[(1.500±0.548)、(2.160±0.408)、(2.500±0.548)、(2.830±0.408)分](P<0.05),且皮损组织海绵水肿、淋巴细胞浸润等炎症表现较非照光组轻。照光组皮损组织TSLP mRNA相对表达量(0.417±0.040)低于非照光组(1.000±0.092)(P<0.05),FLG mRNA相对表达量(1.860±1.187)高于非照光组(1.000±0.523)(P<0.05);照光组皮损引流淋巴结中IL-13 mRNA(0.528±0.160)、OX40L mRNA(0.634±0.178)及TSLPR mRNA(0.669±0.075)相对表达量均低于非照光组(1.000±0.404、1.000±0.312、1.000±0.241)(P<0.05),IL-4 mRNA相对表达量(0.909±0.180)与非照光组(1.000±0.205)比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论NB-UVB照射可能通过上调AD小鼠皮损中屏障蛋白FLG表达,下调TSLP表达,并降低IL-13、OX40L及TSLPR等相关炎性因子表达,从而发挥治疗AD的作用。

温清饮软膏对小鼠特应性皮炎皮损表皮中间丝聚合蛋白表达的影响

目的探讨温清饮对小鼠特应性皮炎模型皮损表皮中间丝聚合蛋白(FLG)蛋白表达的影响。方法构建小鼠特应性皮炎模型,检测温清饮作用前后皮损表皮中FLG蛋白的变化。结果温清饮作用后小鼠特应性皮炎模型皮损表皮中FLG蛋白的表达增高,表达水平明显高于对照组。结论温清饮上调小鼠特应性皮炎模型皮损表皮中FLG蛋白的表达。

ELISA法检测血清抗丝聚蛋白抗体对类风湿性关节炎的诊断价值

目的探讨ELISA法检测血清抗丝聚蛋白抗体(AFA)对类风湿性关节炎(RA)的诊断价值。方法分别采用ELISA法和免疫荧光法检测RA(RA组,50例)、系统性红斑狼疮(SLE组,20例)、强直性脊柱炎(AS组,20例)患者和健康者(C组,20例)的血清AFA,比较两种方法检测血清AFA对RA诊断的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、正确率。结果 ELISA法和免疫荧光法检测AFA阳性率:RA组为74%和52%,SLE组为15%和0,AS组为5%和10%,C组均为0。ELISA法检测AFA对RA诊断的敏感度高于免疫荧光法(P<0.05),两种方法检测AFA对RA诊断的特异度、阳性预测值、阴性预测值、正确率无统计学差异。两种方法检测AFA的结果密切相关(r=0.63,P<0.05)。结论 ELISA法检测血清AFA对RA有较高的诊断价值。

丝聚蛋白与相关皮肤病发病机制的研究进展

丝聚蛋白通过参与角质形成细胞的终末角化过程，在表皮屏障中发挥重要作用。中间丝聚合蛋白基因突变弓l起蛋白表达下降，导致多种过敏性疾病。丝聚蛋白基因突变导致特应性皮炎，也是欧洲和亚洲人种寻常型鱼鳞病的主要诱发因素。丝聚蛋白基因与特应性皮炎发病的婴儿期或早期儿童期关系密切，而与晚期儿童期和成人期无关。有研究发现，小鼠体内缺氧诱导因子引起丝聚蛋白表达降低，提示丝聚蛋白可能不是疾病的单一致病因素。

丝聚蛋白的研究进展

丝聚蛋门在表皮含量丰富，主要存在于表皮的最外层，对表皮的屏障功能起着重要的作用。近年的研究发现，寻常性鱼鳞病及特应性皮炎的发病与丝聚蛋白的编码基因Flg有明显的相关性。Flg失功能突变使表皮丝聚蛋白表达减少或缺如，导致表皮的屏障功能受损，使环境中的变应原、刺激物等易于进入表皮，继而引起各种病理生理变化。

丝聚蛋白代谢的相关研究进展

皮肤在保护身体免受环境损伤和水分流失方面发挥着关键作用。角化套膜和天然保湿因子被认为是皮肤水合功能的主要调节剂,其中丝聚蛋白作为角化套膜中最为重要的蛋白质,不仅维系角质层细胞间相互交联,而且可以降解形成天然保湿因子,对角质层的保水能力起着至关重要的作用。目前已有研究从多种途径证实了丝聚蛋白与皮肤保湿之间的关系,本文旨在对丝聚蛋白及降解过程对皮肤保湿的影响方面进行综述。

肌动蛋白解聚因子/丝切蛋白:肌动蛋白重塑蛋白质家系

肌动蛋白解聚因子/丝切蛋白(actindepolymerizingfactor/cofilin,ADF/cofilin)是肌动蛋白结合蛋白(actin-bindingprotein)家系。迄今为止,可以在所有的真核细胞中检测到ADF/cofilin。它们调节(纤)丝状肌动蛋白细胞骨架(F-actincytoskeleton),影响细胞的各种生理功能。不同的生物有不同的ADF/cofilin,但其功能基本相似。ADF/cofilin可以使(纤)丝状肌动蛋白(F-actin)解聚合,而且这种解聚合活性是可逆的,ADF/cofilin切割F-actin并且能提高球状肌动蛋白(G-actin)离开纤维突出端(pointedend)的能力,其作用受很多因素调控。

嗜酸细胞性食管炎和胃食管反流病患儿聚丝蛋白和骨膜蛋白表达水平分析

目的评估嗜酸性粒细胞性食管炎(eosinophilic esophagitis,EOE)患儿食管组织样本中聚丝蛋白(filaggrin,FLG)和骨膜蛋白(periostin,POSTN)的免疫组织化学表达水平。方法选取2015年3月至2017年3月在延安大学附属医院接受治疗的患儿为受试对象,EOE患儿、胃食管反流病(gastroesophageal reflux disease,GERD)患儿及对照组儿童各16例。EOE组患儿接受饮食和/或药物(皮质类固醇)治疗,并对患儿和对照受试者开展活检、FLG和POSTN的免疫组织化学表达水平评估。结果对照组所有食管活组织检查均显示FLG染色阳性和POSTN染色阴性结果。相反,所有EOE患儿预治疗后活检时FLG和POSTN染色分别呈阴性和阳性,而GERD患儿中FLG和POSTN染色阳性比例分别为62.5%和87.5%(P<0.001)。在EOE组中,二次活检时,FLG阴性和POSTN阳性染色结果的病例比例相比首次活检显著降低,差异有统计学意义(P均<0.001)。结论活动性EOE患儿食管黏膜FLG和POSTN表达可能分别出现下调和上调,治疗后显著比例的受试者上述变化得到恢复。但仍需开展大型研究对该发现作进一步调查。

检测抗聚丝蛋白抗体在类风湿关节炎诊断中的意义

目的探讨抗聚丝蛋白抗体(AFA)对类风湿关节炎(RA)诊断的价值,并比较与RA的其他早期诊断指标的相关性。方法从人表皮细胞中提取并部分纯化聚丝蛋白(filaggrin)抗原,用于免疫印迹检测(Western blot)103例RA血清标本和140例对照血清,包括系统性红斑狼疮(SLE)、干燥综合征(SS)、骨性关节炎(OA)95份及正常人45份。APF和AKA用间接免疫荧光法检测。结果103例RA病人的AFA阳性率、特异性分别为35.9%,93.7%,显著高于疾病对照组和正常人(P<0.001)。在AFA阳性的37例中,AKA也阳性的为26例,重叠率为70.3%;APF亦阳性的为31例,重叠率为83.8%,AFA与AKA、APF之间存在相关性。结论AFA对RA具有很高的特异性。AFA的检测可用于RA的临床诊断。AFA与APF及AKA有相关性,但不能完全取代它们的检测。

人甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2N端片段的原核表达

目的在大肠杆菌中表达人甘露聚糖结合凝集素(MBL)相关丝氨酸蛋白酶2(MASP2)N端片段。方法应用PCR技术从含人MASP2 cDNA的质粒pGEM-MASP2中扩增MASP2-N端基因片段,将其克隆至pGEX4T-1原核表达载体,转化BL21(DE3)感受态菌诱导表达MASP2-N端蛋白,通过GSTrap亲合层析柱纯化目的蛋白,以SDS-PAGE和Western blot进行鉴定,并以ELISA分析了目的蛋白与MBL-CLR结合的活性。结果从pGEM-MASP2中扩增得到约840 bp的基因片段,构建成重组载体经酶切出现约4900 bp和840 bp片段,测序结果与预期的完全一致。纯化蛋白经SDS-PAGE可见Mr 60000蛋白带,该蛋白可与抗GST抗体反应并能与重组人MBL-CLR蛋白结合。结论获得了表达人MASP2 N端片段的大肠杆菌菌株和重组人MASP2N端片段/GST融合蛋白,为MASP2分子的进一步研究提供了条件。