长链非编码RNA淋巴细胞白血病缺失基因2/微小RNA-30c-5p/丝裂原活化蛋白激酶1轴在食管癌细胞紫杉醇耐药中的作用机制实验研究

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)淋巴细胞白血病缺失基因2(DLEU2)/微小RNA(miR)-30c-5p/丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)轴在食管癌细胞紫杉醇(PTX)耐药中的作用机制。方法:构建EC109/PTX细胞,检测食管癌组织和癌旁正常组织,以及食管癌细胞EC109和KYSE150细胞、食管上皮细胞SHEE和EC109/PTX细胞DLEU2、miR-30c-5p、MAPK1 mRNA表达。取生长良好的EC109/PTX细胞,分为沉默(siRNA)DLEU2组、阴性对照(siRNA NC)组、siRNA DLEU2+miR-30c-5p抑制剂(inhibitor)组、siRNA DLEU2+inhibitor NC组、siRNA DLEU2+过表达(pcDNA)MAPK1组、siRNA DLEU2+pcDNA NC组和空白组。验证miR-30c-5p与DLEU2、MAPK1的靶向关系。检测各组EC109/PTX细胞DLEU2、miR-30c-5p、MAPK1 mRNA表达水平。检测EC109/PTX细胞活性、凋亡情况及对PTX的耐药性。检测谷胱甘肽S-转移酶π(GST-π)、MAPK1、P-蛋白(P-gp)蛋白表达水平。结果:食管癌组织和EC109/PTX细胞miR-30c-5p表达降低,DLEU2、MAPK1 mRNA表达增加(均P<0.05)。DLEU2靶向调控miR-30c-5p,miR-30c-5p靶向调控MAPK1。siRNA DLEU2组miR-30c-5p表达和细胞凋亡率较siRNA NC组、空白组增加,DLEU2和MAPK1 mRNA表达、细胞增殖率、药物半数抑制浓度(IC 50)以及GST-π、MAPK1、P-gp蛋白表达降低(均P<0.05)。siRNA DLEU2+miR-30c-5p inhibitor组miR-30c-5p表达和细胞凋亡率较siRNA DLEU2+inhibitor NC组降低,MAPK1 mRNA表达、细胞增殖率、IC 50以及GST-π、MAPK1、P-gp蛋白表达增加(均P<0.05)。siRNA DLEU2+pcDNA MAPK1组细胞凋亡率较siRNA DLEU2+pcDNA NC组降低,MAPK1 mRNA表达、细胞增殖率、IC 50以及GST-π、MAPK1、P-gp蛋白表达增加(均P<0.05)。结论:干扰lncRNA DLEU2可减弱EC109/PTX细胞对PTX的耐药性,可能与调控miR-30c-5p/MAPK1轴有关。

丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶5调节人前列腺癌细胞生长及侵袭的信号转导机制研究

目的 在高转移性的人前列腺癌细胞 1E8中 ,探讨丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶 5(MKP5 )在ATP激活丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK)信号通路及相关生物学行为中的作用。方法 构建野生型 pcDL SRα MKP5表达载体 ,稳定转染 1E8细胞并筛选阳性克隆。应用免疫印迹法检测细胞ERK1/ 2和 p38的活化情况。应用生长曲线、体外侵袭实验及软琼脂集落形成实验检测ATP刺激下 ,分别应用MEK抑制剂PD980 5 9及p38抑制剂SB2 0 35 80后各组转染细胞的生物学行为。结果野生型MKP5可明显抑制ATP对 p38通路的激活 ,明显逆转ATP长期刺激下对 1E8细胞的生长抑制作用 ,并明显抑制ATP短期刺激下对 1E8细胞体外侵袭能力的促进作用 ,其作用与SB2 0 35 80相似。PD980 5 9可以部分逆转ATP对转染细胞的体外生长及软琼脂集落形成能力的抑制作用 ,但对ATP短期刺激下对体外侵袭能力的促进作用不明显。结论 在ATP刺激的不同时相里 ,p38、ERK1/ 2通路以不同的方式参与调节肿瘤细胞的生长、侵袭等过程 ,MKP5可通过抑制p38通路的方式参与抑制ATP的这些作用。

电针干预自发性高血压大鼠主动脉丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1及磷酸化细胞外信号调节激酶1/2蛋白的表达

背景:近年来大量临床研究表明针刺风池、太冲、曲池等穴位能有效降低血压,可用于高血压,但对其治疗的分子机制尚未阐明。目的:观察针刺大鼠风池、太冲、曲池等穴位对丝裂原活化蛋白激酶信号转导调控系统的影响,从而探讨针刺治疗高血压的分子机制。方法:选取8月龄自发性高血压雄性Wistar大鼠14只,随机分为针刺组和模型组,每组7只;另选取同月龄正常血压雄性Wistar-Kyoto大鼠7只作为对照组。对针刺组大鼠采用电针针刺双侧风池、曲池和三阴交穴,毫针刺太溪和太冲穴。3周后采用RT-PCR方法检测各组大鼠主动脉组织丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1mRAN的表达,Western blot方法检测丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2蛋白表达。结果与结论:与对照组比较,模型组主动脉组织磷酸化细胞外信号调节激酶1/2蛋白表达水平升高,丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1mRNA及其蛋白表达水平降低(P<0.01);与模型组比较,针刺组主动脉组织磷酸化细胞外信号调节激酶1/2蛋白表达水平降低,丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1mRNA及其蛋白表达水平升高(P<0.05)。提示针刺治疗自发性高血压大鼠可能是通过调控丝裂原活化蛋白激酶信号转导途径,增强磷酸化细胞外信号调节激酶1/2蛋白表达,降低丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1蛋白表达,从而改善血管重塑,降低血压。

p38和丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1在内膜损伤后血管平滑肌细胞表型转化过程中的表达变化

目的观察动脉内膜损伤后血管平滑肌细胞表型转化和p38及丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1表达的动态变化。方法分别用免疫组织化学、免疫印迹和逆转录聚合酶链反应方法检测假损伤组和损伤后不同时间点血管壁中增殖细胞核抗原、平滑肌a肌动蛋白、p38蛋白和丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1蛋白及其mRNA的表达。结果假损伤组血管中膜平滑肌细胞及内皮细胞增殖细胞核抗原为阴性表达；损伤后5～14天，新生内膜阳性细胞率逐渐增加．28天后开始逐渐减少，且新生内膜阳性率均略高于中膜。假损伤组血管中膜平滑肌a肌动蛋白表达为阳性，内皮为阴性：中膜阳性面积于损伤后1天开始减少，3天最为明显，5天后开始逐渐增加，且新生内膜阳性表达略低于中膜。假损伤组血管中膜p38呈阴性或弱阳性着色；损伤后1～35天呈持续高表达，新生内膜阳性表达高于中膜。p38表达变化与增殖细胞核抗原表达变化呈正相关。假损伤组血管中膜丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1呈弱阳性或阳性表达；损伤后1天即开始下降，14-28天稍有回升，至35天仍未回到假损伤组水平，且新生内膜阳性面积稍低于中膜。其表达变化与增殖细胞核抗原表达变化呈负相关。结论内膜损伤后血管平滑肌细胞增殖能力与其表型转化密切相关，p38和丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1参与了损伤后血管平滑肌细胞表型转化的信号转导及调节。

丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1在糖尿病大鼠肾组织细胞外基质重构中的作用

目的探讨糖尿病大鼠肾组织丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1(MKP-1)的表达特征及在细胞外基质重构中的作用。方法雄性Wister大鼠60只,腹腔一次性注射链脲佐菌素(STZ,65 mg/kg)制备糖尿病大鼠模型,48 h后血糖≥16.7 mmol/L,尿糖3+~4+者入选糖尿病组(DM),DM组造模成功后1、2、4、8、12周各组宰取10只大鼠,另取10只作为对照组。免疫组化检测肾组织MKP-1和磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)层粘连蛋白(LN)的表达。Western印迹检测肾组织MKP-1和磷酸化p38 MAPK的水平,RT-PCR检测MKP-1和纤维粘连蛋白(FN)mRNA的表达。结果与对照组相比,糖尿病组大鼠肾组织1~8周MKP-1蛋白及mRNA的表达降低(P<0.01),磷酸化p38 MAPK水平在第1、2、4、8周表达升高(P<0.01),在第12周差异无统计学意义(P>0.05);LN 4~12周均高于对照组(P<0.01),FN mRNA 2~12周均高于对照组(P<0.01)。结论 MKP-1在糖尿病肾组织中表达下降,在细胞外基质重构中发挥一定作用,可能与p38 MAPK的去磷酸化有关。

丰富环境对抑郁大鼠行为学及海马组织中丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1表达的影响

目的探讨丰富环境(EE)对慢性不可预见性轻度应激(CUS)抑郁模型大鼠行为学及海马组织中丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1(MKP-1)表达的影响,为抑郁症的治疗提供线索。方法 40只Sprague-Dawley大鼠随机分为对照组、CUS组、氟西汀组及EE组,每组10只。CUS组、氟西汀组、EE组大鼠分别给予8周的CUS,从第5周起EE组及氟西汀组大鼠分别给予EE干预及氟西汀灌胃4周;对照组大鼠正常环境饲养8周。采用体质量增加量、旷场试验、蔗糖偏好等评估各组大鼠行为学的变化,采用免疫印迹法检测大鼠海马组织中MKP-1蛋白的表达。结果各组大鼠造模前体质量、水平运动距离、直立次数、穿格次数、蔗糖偏好指数比较差异均无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,造模后CUS组、氟西汀组及EE组大鼠体质量增加减少,水平运动距离、直立次数、穿格次数减少,蔗糖偏好指数降低(P<0.05);CUS组、氟西汀组及EE组大鼠体质量增加、水平运动距离、直立次数、穿格次数及蔗糖偏好指数两两比较差异无统计学意义(P>0.05)。氟西汀及EE干预后,CUS组大鼠体质量增加、水平运动距离、直立次数、穿格次数、糖水偏好指数与对照组大鼠比较均减少(P<0.05);氟西汀组及EE组大鼠体质量增加、水平运动距离、直立次数、穿格次数及蔗糖偏好指数与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05);氟西汀组和EE组大鼠体质量增加、水平运动距离、直立次数、穿格次数及蔗糖偏好指数较CUS组均升高(P<0.05);EE组大鼠体质量增加、水平运动距离、直立次数、穿格次数及蔗糖偏好指数与氟西汀组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,CUS组和EE组大鼠海马组织中MKP-1蛋白表达显著升高(P<0.05);氟西汀组大鼠海马组织中MKP-1蛋白表达与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与CUS组比较,氟西汀组大鼠海马组织中MKP-1蛋白表达明显下调(P<0.05);EE组大鼠海马组织中MKP-1蛋白表达与CUS组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与氟西汀组比较,EE组大鼠海马组织中MKP-1蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论 EE对大鼠抑郁样症状有显著的改善作用,但对海马组织中MKP-1蛋白表达无显著影响,EE可能不是通过影响MKP-1表达作用于抑郁症。

氟伐他汀对糖尿病大鼠肾组织丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1表达的影响及意义

目的探讨氟伐他汀对丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1(MKP-1)蛋白及其mRNA在糖尿病大鼠肾组织的影响及意义。方法采用链脲佐菌素(STZ)(65 mg/kg),腹腔注射,建立糖尿病大鼠模型,建模成功的糖尿病大鼠随机分为糖尿病组和氟伐他汀组,另选正常大鼠对照组。氟伐他汀组给予氟伐他汀20 mg/kg,灌胃,1/d,对照组和糖尿病组给予等量蒸馏水灌胃。治疗4周后收集3组大鼠血、尿标本测定血糖(Glu)、甘油三酯(TG)、胆固醇(CHO)、尿素(BUN)、肌酐(Ccr)和24 h尿蛋白(Upro),留取肾组织进行免疫组化和Western印迹检测肾组织MKP-1和p38MAPK蛋白的表达,RT-PCR检测MKP-1 mRNA的表达。结果糖尿病组和氟伐他汀组4周时Glu、BUN、CHO、TG、Ccr、Upro均高于对照组(P <0. 01)。氟伐他汀组BUN、Ccr、Upro均低于糖尿病组(P <0. 01),但Glu、TG、CHO在氟伐他汀组和糖尿病组比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。糖尿病组和氟伐他汀组MKP-1蛋白和mRNA的表达均低于对照组,且糖尿病组低于氟伐他汀组(P <0. 01)。糖尿病组p-38MAPK的活性高于对照组及氟伐他汀组,且氟伐他汀组高于对照组(P <0. 01)。结论 MKP-1可能参与了糖尿病早期肾脏的发病过程,氟伐他汀的肾脏保护作用可能部分是通过激活MKP-1的表达,从而抑制p38 MAPK通路而实现。

丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1在人胰腺癌组织中的表达

目的观察丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1(MKP-1)在人胰腺癌组织中的表达。方法收集手术切除人胰腺癌组织、慢性胰腺炎(CP)组织和正常胰腺组织标本各20例,分别采用Northern blot法及Western blot法检测MKP-1在3种组织中的表达情况,并采用Western blot法进一步验证MKP-1在6株胰腺癌细胞株中的表达情况。结果 Northern blot检测结果显示,20例正常胰腺组织标本中,有7例(35%)存在MKP-1 mRNA弱表达,13例(65%)表达极弱甚至不表达;20例CP组织标本中,7例(35%)存在MKP-1 mRNA中至高水平表达;20例胰腺癌组织标本中,12例(60%)存在MKP-1 mRNA高表达,8例(40%)为低到中等水平表达。半定量分析结果显示,与正常胰腺组织相比,胰腺癌组织中MKP-1 mRNA平均表达水平升高了8.1倍(P=0.016),CP中MKP-1 mRNA的表达水平升高了6.2倍(P=0.035);胰腺癌与CP组织的MKP-1 mRNA表达水平差异没有统计学意义(P=0.442)。Western blot检测结果显示,胰腺癌组织中MKP-1蛋白表达水平也明显高于正常胰腺组织;在6株胰腺癌细胞株中均检测到MKP-1的表达,除胰腺癌CAPAN-1细胞株表达略低外,其余5株胰腺癌细胞均呈高表达。结论在CP组织、胰腺癌组织及胰腺癌细胞株中均存在MKP-1高表达,MKP-1可能参与了胰腺癌细胞的早期发生过程。

丝裂原活化蛋白激酶信号对高氧性肺损伤水通道蛋白5的调控机制

目的:探讨丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinases,MAPKs)信号通路三亚族ERK、p38、JNK对高氧性肺损伤异常表达水通道蛋白5(aquaporin 5,AQP5)的分子调控机制。方法:制备高氧肺损伤动物模型,通过不同信号途径抑制剂干预。随机将Wistar实验大鼠分为8组(n=6):空气对照组(A)、高氧组(H)、高氧+ERK抑制剂PD98059组(H+PD)、高氧+p38抑制剂SB203580组(H+SB)、高氧+JNK抑制剂SP600125组(H+SP)及空气+抑制剂对照组(A+PD、A+SB、A+SP),采用蛋白质免疫印迹法检测AQP5蛋白表达,real-time PCR检测AQP5 mRNA。结果:Western blot结果显示:A组AQP5蛋白呈较高表达,H组AQP5表达减弱(P=0.000),而H+SB、H+SP组较H组AQP5蛋白表达明显升高(P=0.000),二者中尤以H+SB组其蛋白上调更明显,H+PD组与H组比较无统计学性差异(P=0.737);real-time PCR结果显示:H组AQP5 mRNA表达较空气对照组降低(P=0.000),H+SB、H+SP与H组比较AQP5 mRNA表达升高(P=0.000),二者中尤以H+SB组其mRNA上调更明显,但二者与A组比较,差异仍有统计学意义(P=0.000),而H+PD干预组与H组比较,未见肺组织AQP5 mRNA表达的明显变化(P=0.796)。A组与A+抑制剂对照组(A+PD、A+SB、A+SP)在AQP5蛋白及mRNA表达上均无明显差异。结论:抑制剂SB203580及SP600125在高氧暴露后能增加AQP5蛋白和mRNA表达,因而推测MAPKs通路中p38、JNK可能参与了调控高氧肺损伤AQP5基因表达的下调过程。

小檗碱对转化生长因子β1诱导人胚肺成纤维细胞转分化及丝裂原活化蛋白激酶信号通路蛋白磷酸化水平的影响

目的探讨小檗碱对转化生长因子β1诱导的人胚肺成纤维细胞MRC-5转分化过程中细胞外羟脯氨酸和细胞内平滑肌肌动蛋白、纤连蛋白及丝裂原活化蛋白激酶信号通路相关蛋白磷酸化水平的影响。方法体外培养MRC-5细胞,采用MTT法检测不同浓度小檗碱对细胞增殖的抑制作用,确定适合的作用范围;Western blot法检测不同浓度转化生长因子β1刺激MRC-5细胞转分化过程中平滑肌肌动蛋白、纤连蛋白表达水平,确定适宜的转化生长因子β1诱导浓度。不同浓度小檗碱预处理的MRC-5细胞经转化生长因子β1刺激后,采用比色法测定细胞外羟脯氨酸水平,对于细胞内平滑肌肌动蛋白、纤连蛋白表达水平以及丝裂原活化蛋白激酶信号通路相关蛋白p38 MAPK、SAPK/JNK、ERK1/2的磷酸化水平采用Western blot法进行检测。结果参考MTT法检测结果 ,选定小檗碱适宜浓度(20、40、80μmol/L)进行研究。Western blot结果显示2 ng/ml浓度转化生长因子β1可明显诱导MRC-5细胞转分化。小檗碱预处理的MRC-5细胞,较单纯转化生长因子β1诱导细胞,培养液中羟脯氨酸水平明显降低。Western blot法检测结果显示,小檗碱预处理细胞较单纯转化生长因子β1诱导细胞,平滑肌肌动蛋白、纤连蛋白表达水平明显受到抑制,丝裂原活化蛋白激酶信号通路相关蛋白p38 MAPK、SAPK/JNK、ERK1/2磷酸化水平亦受到不同程度抑制。结论小檗碱预处理对转化生长因子β1诱导的MRC-5细胞转分化过程有抑制作用,其机制可能与小檗碱下调丝裂原活化蛋白激酶信号通路相关蛋白的磷酸化水平有关。

蛋白磷酸酶对丝裂原激活的蛋白激酶信号通路的调节

丝裂原活化蛋白激酶是非常重要的生长信号调节蛋白,是细胞内一类丝氨酸 /苏氨酸蛋白激酶。蛋白磷酸酶通过底物的特异性分为酪氨酸特异性磷酸酶、丝氨酸 /苏氨酸特异性磷酸酶、双位点特异性 (苏氨酸 /酪氨酸 )磷酸酶。其中酪氨酸特异性磷酸酶和双位点特异性磷酸酶的非催化性氨基末端介导的特异性蛋白 蛋白相互作用在底物特异性中起关键作用,它们通过与不同底物形成复合物而使蛋白激酶去磷酸化失活,从而对各种蛋白激酶活性进行调节。

miR-203a-5p通过抑制丝裂原活化蛋白激酶1的表达调控人牙周膜干细胞的炎性反应

目的检测炎性人牙周膜干细胞(hPDLSCs)中miR-203a-5p及丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)的表达水平,探讨二者间的靶向关系对牙周炎炎性反应的调控作用。方法分离培养及流式细胞计量术鉴定hPDLSCs;将hPDLSCs分为:对照组、LPS刺激组、miR-203a-5p模拟物转染组及miR-203a-5p抑制剂转染组,用RT-qPCR检测miR-203a-5p及MAPK1mRNA表达,Westernblot检测MAPK1蛋白表达,双荧光报告系统验证miR-203a-5p与MAPK1的靶向关系。结果干细胞表面标志物CD73及CD90阳性;LPS刺激组miR-203a-5p的表达明显上调(P<0.05);miR-203a-5p模拟物及LPS使miR-203a-5p的表达明显上调(P<0.05),同时MAPK1mRNA及蛋白的表达下调(P<0.05);miR-203a-5p抑制物使miR-203a-5p的表达量下降(P<0.05),同时MAPK1mRNA及蛋白的表达增加(P<0.05);miR-203a-5p与MAPK1具有靶向作用。结论miR-203a-5p通过靶向下调MAPK1基因的表达来调控牙周炎的炎性反应过程。

隐源性难治性颞叶癫癇患者脑内丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶5基因表达的研究

目的检测丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶5(MAPKKK5) mRNA及其编码蛋白产物在隐源性难治性颞叶癫癇(TLE)患者脑内的表达,从分子水平探讨难治性TLE可能的发病机制。方法取10例隐源性难治性TLE患者手术切除的颞叶组织,10例脑外伤患者(病例对照组)相应部位颞叶组织,利用RT-PCR与Westernblot方法检测两组患者MAPKKK5 mRNA(MAPKKK5 mRNA/β-actin)与MAPKKK5蛋白(MAPKKK5/β-actin)的表达。结果难治性TLE患者颞叶组织MAPKKK5 mRNA(1.001±0.321)和MAPKKK5蛋白(0.359±0.299)的表达水平均上调,与病例对照组的(0.648±0.157)和(0.137±0.084)比较差异有统计学意义(均P<0.05)。结论MAPKKK5基因表达上调可能参与难治性TLE的发病机制。

氟西汀对抑郁症大鼠行为学表现及丝裂原活化蛋白激酶-p38信号通路的影响

目的探讨氟西汀对抑郁症大鼠行为学表现及海马内丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1(MKP-1)、磷酸化p38(p-p38)和p38表达的影响,为抑郁症的分子病理学机制提供线索。方法 40只雄性Sprague Dawley大鼠随机分为正常组、抑郁症组、生理盐水组和氟西汀组,每组10只。抑郁症组、生理盐水组和氟西汀组大鼠给予8周慢性不可预见性刺激(CUMS)制备抑郁症模型,第5~8周生理盐水组和氟西汀组大鼠分别给予生理盐水和氟西汀灌胃。正常组大鼠不给予任何干预措施。分别于造模前、造模后及干预后评估4组大鼠的行为学变化;最后1次行为学评估后,取大鼠海马组织,采用Western blot法检测海马组织中MKP-1、p-p38和p38蛋白表达,并计算p-p38与p38蛋白表达的比值(p-p38/p38)。结果造模前4组大鼠行为学指标比较差异均无统计学意义(P>0.05)。与造模前比较,造模后抑郁症组、生理盐水组和氟西汀组大鼠蔗糖偏好指数降低(P<0.05),旷场实验水平运动距离和直立次数减少(P<0.05),强迫游泳不动时间增加(P<0.05)。造模后抑郁症组、生理盐水组和氟西汀组大鼠行为学指标比较差异均无统计学意义(P>0.05)。与正常组比较,造模后抑郁症组、生理盐水组和氟西汀组大鼠蔗糖偏好指数降低(P<0.05),旷场实验水平运动距离和直立次数减少(P<0.05),强迫游泳不动时间增加(P<0.05)。与抑郁症组和生理盐水组比较,干预后氟西汀组大鼠蔗糖偏好指数升高(P<0.05),旷场实验水平运动距离和直立次数增加(P<0.05),强迫游泳不动时间缩短(P<0.05)。抑郁症组和生理盐水组大鼠海马组织中MKP-1表达显著高于正常组(P<0.05),氟西汀组大鼠海马组织中MKP-1表达显著低于抑郁症组和生理盐水组(P<0.05),抑郁症组与生理盐水组大鼠海马组织中MKP-1表达比较差异无统计学意义(P>0.05),氟西汀组与正常组大鼠海马组织中MKP-1表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。4组大鼠海马组织中p-p38、p38蛋白表达及p-p38/p38比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论MKP-1可能与抑郁症的发病机制有关,MKP-1在抑郁症的发病机制中可能不是通过p38信号通路起作用。氟西汀可能通过下调MKP-1表达而发挥治疗抑郁症的作用。

丝裂原活化蛋白激酶与骨重建平衡的研究进展

骨作为一个动态器官,通过持续不断的重塑维持平衡——成骨细胞不断合成骨基质并促进其矿化成熟,破骨细胞则不断吸收骨基质而形成骨陷窝。由成骨细胞介导的骨形成与由破骨细胞介导的骨吸收间的动态平衡对于骨健康至关重要。

氟西汀对抑郁大鼠行为及海马组织内应激活化蛋白激酶信号通路的影响

目的探讨氟西汀对抑郁大鼠行为学表现及海马组织内丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1(MKP-1)及Jun氨基末端激酶(JNK)通路蛋白表达的影响。方法40只雄性Sprague Dawley大鼠随机分为正常组、抑郁症组、生理盐水组和氟西汀组,每组10只。正常组大鼠不给予任何刺激;抑郁症组、生理盐水组和氟西汀组大鼠给予8周慢性不可预见性应激(CUMS),于CUMS第5~8周,氟西汀组大鼠给予氟西汀(10 mg·kg^-1·d^-1)灌胃,生理盐水组大鼠给予生理盐水(10 mg·kg^-1·d^-1)灌胃;正常组和抑郁症组大鼠不给予任何干预措施。分别于CUMS前(造模前),CUMS 4周后(造模后)、8周后(干预后)评估4组大鼠行为学变化,最后一次行为学评估后处死大鼠,并取海马组织,采用Western blot法检测海马组织内MKP-1、JNK、磷酸化JNK(p-JNK)蛋白表达水平,并计算p-JNK/JNK比值。结果造模前各组大鼠体质量、蔗糖偏好指数、强迫游泳不动时间及旷场实验结果比较差异均无统计学意义(P>0.05)。正常组大鼠造模前后各行为学指标比较差异均无统计学意义(P>0.05);与造模前比较,造模后抑郁症组、生理盐水组、氟西汀组大鼠体质量降低,蔗糖偏好指数下降,强迫游泳不动时间增加,水平运动距离和直立次数减少(P<0.05)。与正常组比较,造模后抑郁症组、生理盐水组、氟西汀组大鼠体质量降低,蔗糖偏好指数下降,强迫游泳不动时间增加,水平运动距离和直立次数减少(P<0.05)。造模后,抑郁症组、生理盐水组、氟西汀组大鼠各种行为学指标比较差异均无统计学意义(P>0.05)。与正常组比较,干预后生理盐水组及抑郁症组大鼠体质量降低,蔗糖偏好指数下降,强迫游泳不动时间增加,水平运动距离和直立次数减少(P<0.05)。干预后,氟西汀组与正常组大鼠各项行为学指标比较差异均无统计学意义(P>0.05),生理盐水组与抑郁症组大鼠各项行为学指标比较差异均无统计学意义(P>0.05)。与生理盐水组和抑郁症组比较,氟西汀组大鼠体质量增加,蔗糖偏好指数上升,强迫游泳不动时间减少,水平运动距离和直立次数增加(P<0.05)。抑郁症组和生理盐水组大鼠海马组织内MKP-1蛋白表达量高于正常组(P<0.05),氟西汀组大鼠海马组织内MKP-1蛋白表达量低于抑郁症组和生理盐水组(P<0.05),氟西汀组与正常组大鼠海马组织内MKP-1蛋白表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。4组大鼠海马组织内p-JNK、JNK蛋白表达量及p-JNK/JNK比值比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论MKP-1改变可能是抑郁症发病的一个重要基因,其影响抑郁症发病的机制可能不是通过JNK信号通路。氟西汀可能通过下调MKP-1表达水平而改善大鼠抑郁状态。

癫痫幼鼠海马丝裂酶原蛋白活化激酶表达的特点及其对巨噬细胞炎性蛋白-α/趋化因子受体5表达的影响

目的探讨癫痫幼鼠海马丝裂酶原蛋白活化激酶(MAPKs)表达的特点及其对巨噬细胞炎性蛋白-α(MIP-1α)/趋化因子受体5(CCR5)表达的影响。方法应用立体定向技术对侧脑室内注射海人酸(KA),建立幼鼠惊厥模型。将出生21 d的Wistar幼鼠分为空白对照组、磷酸盐缓冲液(PBS)对照组及KA 4h、8 h、16 h、24 h、3 d组,比较各组MAPKs表达的差异。另将出生21 d的幼鼠分为PBS+二甲亚砜(DMSO)组、KA+DMSO组、KA+PD98059(ERK1/2抑制剂)组和KA+SB203508(p38MAPK抑制剂)组,比较各组MIP-1α、CCR5表达的差异。采用Western Blot方法检测MAPKs蛋白水平及CCR5的表达。采用ELISA方法检测MIP-1α的表达。采用免疫组化染色方法检测各组大鼠海马P-ERK1/2、P-p38MAPKs等蛋白的表达。采用免疫荧光双标染色探讨P-ERK1/2和P-p38MAPK的胶质细胞来源。结果与空白对照组比较,KA 4 h、8h、16 h、24 h、3 d组P-ERK1/2水平明显增高;KA 8 h、16 h、24 h、3 d组P-P38MAPK水平明显增高(均P<0.05)。侧脑室注射KA后大鼠P-ERK1/2与P-P38MAPK表达主要分布在齿状回门区和锥体细胞层等神经元损伤明显的海马组织中。在侧脑室注射KA后,部分P-ERK1/2来源于活化的小胶质细胞及星形胶质细胞,而P-p38MAPK仅在小胶质细胞中出现免疫活性表达。与PBS+DMSO组比较,KA+DMSO组、KA+PD98059组和KA+SB203508组大鼠海马组织中MIP-1α、CCR5蛋白水平均明显增高,OX-42阳性细胞数明显增加(均P<0.05)。与KA+DMSO组比较,KA+PD98059组、KA+SB203508组大鼠海马组织中MIP-1α、CCR5蛋白水平均明显降低,OX-42阳性细胞数明显减少(均P<0.05)。结论在幼鼠癫痫发生的早期阶段,MAPKs(ERK1/2、p38MAPK)可部分地调控MIP-1α/CCR5的表达。

PP2C蛋白磷酸酶调控的细胞信号通路研究进展

2C类蛋白磷酸酶是蛋白磷酸酶家族的重要成员,可以对丝/苏氨酸残基特异性脱磷酸。近来研究表明,2C类蛋白磷酸酶控制着大量关键的细胞功能,如增殖、细胞周期阻滞、衰老和细胞程序性死亡、凋亡和自噬等,因而在介导机体免疫反应、衰老、神经发育及肿瘤发生发展中发挥重要的生物学作用。总结PP2C基因各亚型参与介导的重要细胞信号通路,如丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、磷脂酰肌醇3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(PI3K/AKT)、转化生长因子-β(TGF-β)/Smads、核转录因子-κB(NF-κB)及DNA损伤应答通路,以期为阐明上述生理病理过程的分子基础和调控机制提供新的思路。

缺氧状态下丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1在胃癌细胞系SGC7901中的过表达及其意义

目的 探讨丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶 1 (MKP 1)在缺氧胃癌细胞系SGC790 1中的表达及对缺氧诱导因子 1(HIF 1)的影响。方法 采用半定量逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)和Western印迹检测MKP 1在常氧及缺氧状态下胃癌细胞系SGC790 1中的表达 ;借助DNA重组技术构建MKP 1基因的正义真核表达载体 ;利用脂质体将正义真核表达载体和空载体转入SGC790 1细胞 ;双荧光素酶报告基因 (DualLuciferaseReporter,DLR)检测系统检测荧光素酶活性并采用ELISA法检测SGC790 1细胞培养上清血管内皮生长因子 (VEGF)的变化。结果 (1)半定量RT PCR和Western印迹结果提示 ,MKP 1在胃癌细胞系SGC790 1中表达 ,缺氧时其表达上调 ;(2 )分别将MKP 1正义真核表达载体和pcDNA3.1空载体瞬时转入SGC790 1细胞 ;转染 4 8h后 ,缺氧 12h磷酸化HIF 1α在正义真核表达载体转染细胞 (SGC790 1 MKP 1)中的表达低于空载体转染细胞 (SGC790 1 空载体 )和未转染细胞(SGC790 1)。 (3)报告基因试验显示常氧情况下 3、6和 12h荧光素酶活性在SGC790 1细胞、SGC790 1 空载体细胞和SGC790 1 MKP 1细胞中差异无显著意义 (P >0 .0 5 ) ;缺氧情况下 ,SGC790 1 MKP 1细胞中荧光素酶活性在 3、6和 12h均明显低于SGC790 1细胞和SGC790 1 空载体 (P <0 .0 1)

蛋白磷酸酶2A抑制剂对胰腺癌细胞丝裂原活化蛋白激酶信号通路的激活作用及对细胞生长的影响

中药斑蝥中的有效成分斑蝥素（CAN）及其衍生物对多种肿瘤细胞具有抑制作用[1-2]，我们发现斑蝥素可抑制胰腺癌细胞的生长和转移[1]。斑蝥素是蛋白磷酸酶2A（PP2A）的选择性抑制剂，PP2A可使细胞信号通路中的多种激酶去磷酸化而失活，这些激酶包括与细胞生长密切相关的丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）：细胞外信号调节激酶（ERK）、c-jun氨基端激酶（JNK）和p38等。