茯苓多糖对2型糖尿病大鼠丝裂原激活的蛋白激酶通路及胰岛素抵抗的影响

目的探究茯苓多糖(PAC)对2型糖尿病(T2DM)大鼠丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)通路及胰岛素抵抗(IR)的影响。方法2019年3—10月,采用高脂高糖喂养联合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立T2DM大鼠模型,采用随机数字表法分为模型(T2DM)组、二甲双胍(MET)组(0.65 g·kg^(−1)·d^(−1))和PAC低(PAC-L,0.05 g·kg^(−1)·d^(−1))、中(PAC-M,0.10 g·kg^(−1)·d^(−1))、高剂量(PAC-H,0.20 g·kg^(−1)·d^(−1))组,每组12只。另取12只正常非T2DM大鼠为正常组(NC组),干预8周后测定空腹血糖、空腹血清胰岛素(FINS)、三酰甘油及肝组织均浆丙二醛、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活性,采用蛋白质印迹法检测肝脏组织磷酸化p38丝裂原激活的蛋白激酶(p-p38MAPK)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)蛋白表达水平。结果与NC组比较,T2DM组大鼠血清空腹血糖、FINS、三酰甘油含量、胰岛素抵抗指数(HOMA-IRI)(62.56±5.11比5.81±1.05)、肝脏组织丙二醛含量、p-p38MAPK(1.35±0.08比0.16±0.03)和p-JNK(1.29±0.08比0.17±0.02)蛋白水平均显著升高(P<0.05),胰岛素敏感指数(ISI)[(0.86±0.05)×10^(−3)比(7.69±0.14)×10^(−3)]、肝脏组织GSH-Px、SOD活性均显著降低(P<0.05);与T2DM组比较,PAC-L组、PAC-M组、PAC-H组大鼠血清空腹血糖、FINS、三酰甘油含量、HOMA-IRI(49.47±4.56、31.14±3.03、26.59±2.16比62.56±5.11)、肝脏组织丙二醛含量、p-p38MAPK(1.04±0.06、0.89±0.03、0.39±0.02比1.35±0.08)和p-JNK(0.85±0.02、0.72±0.05、0.31±0.01比1.29±0.08)蛋白水平均显著降低(P<0.05),ISI[(1.51±0.11)×10^(−3)、(2.14±0.12)×10^(−3)、(3.73±0.15)×10^(−3)比(0.86±0.05)×10^(−3)]、肝脏组织GSH-Px、SOD活性均显著升高(P<0.05),呈剂量依赖性(P<0.05)。PAC-H组均优于MET组(P<0.05)。结论PAC可改善T2DM大鼠胰岛素抵抗,该作用可能与其抑制MAPK通路减轻氧化应激有关。

多途径丝裂原激活的蛋白激酶介导一氧化氮引起的肝癌细胞凋亡

目的 研究非离子型的diazeniumdiolate类一氧化氮供体引起肝癌细胞凋亡的分子机制。方法 利用免疫印迹、免疫沉淀、凝胶阻滞实验研究一氧化氮供体处理Hep3B肝癌细胞后,丝裂原激活的蛋白激酶、AP-1的激活以及和Hep3B肝癌细胞凋亡的关系。结果 一氧化氮可引起细胞外信号调节蛋白激酶、c-jun N末端激酶和p38激酶的激活,特别是细胞外信号调节的蛋白激酶的持续激活,其中细胞外信号调节的蛋白激酶和c-jun N末端激酶的特异的阻断剂U0126和JNK抑制剂Ⅱ可阻断AP-1的激活和Hep3B细胞的凋亡,而p38激酶的阻断剂SB203580不能阻断AP-1的激活和Hep3B肝癌细胞的凋亡。结论 一氧化氮通过激活细胞外信号调节蛋白激酶、c-jun N末端激酶,进而激活AP-1而引起Hep3B肝癌细胞的凋亡。

丝裂原激活的蛋白激酶在脑缺血预适应中的作用:ERK、JNK和p38作用的比较

目的初步探讨丝裂原激活的蛋白激酶(MAPKs)3条主要信号通路在大鼠脑缺血预适应中(IPC)的作用。方法将大鼠随机分为正常对照(control)、假手术(SH)、缺血预适应/缺血耐受(IT)3组,每组6只。应用SDS-PAGE、Westernblot等实验方法,借助GelDoc和VersaDoc凝胶成像系统,半定量检测大鼠大脑躯体感觉皮层ERK、JNK、p38磷酸化水平和蛋白表达量的变化。结果IT组大鼠躯体感觉皮层内ERK1和JNK46KD的磷酸化水平增高(P<0.05)。结论大鼠躯体感觉皮层内MAPKs信号通路中ERK1和JNK46KD激活可能参与了脑缺血预适应的形成,但也不能排除p38在其中的作用。

EGF诱导人RPE细胞表达整合素α_5过程中丝裂原激活的蛋白激酶的作用

目的探讨表皮生长因子(EGF)诱导人视网膜色素上皮(RPE)细胞表达整合素α5过程中丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)的作用。方法将人RPE细胞分为对照组、EGF组和PD98059组,RT-PCR及流式细胞术观察各组整合素α5mRNA和蛋白的表达;Western blot法检测各组人RPE细胞中MAPK的磷酸化水平。结果对照组的整合素α5mRNA/β-actin mRNA像素值的比值为0.93±0.06,PD98059组为1.06±0.07,EGF组为1.97±0.09,EGF组与其他2组相比,差异有统计学意义(P<0.01);流式细胞术检测显示,24 h后整合素α5的荧光强度分别为1.94±0.22、4.56±0.25、2.39±0.14,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot检测显示,30 min后EGF组细胞外信号调节激酶(ERK)1/2的磷酸化激活水平最高,PD98059组抑制ERK1/2的磷酸化激活,对照组ERK1/2的磷酸化激活作用很弱。结论ERK1/2的磷酸化激活参与EGF诱导人RPE表达整合素α5的过程。EGF激活ERK1/2通路刺激人RPE细胞整合素α5mRNA的表达。

丝裂原激活的蛋白激酶信号转导通路与肝纤维化

多种信号分子通过丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信号转导通路(包括ERK、JNK、P38和BMK1),对肝星状细胞(HSC)的活化、增殖、凋亡、细胞周期产生影响,由此在多个环节干预肝纤维化的形成和逆转过程。

丹参酚酸B对大鼠肝星状细胞中丝裂原激活的蛋白激酶通路的抑制作用

目的 探讨丹参酚酸B(SA-B)对活化的大鼠肝星状细胞(HSC)中丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信号传导通路的抑制作用。 方法 分离大鼠HSC,于无包被塑料培养皿中原代培养7 d,继以10-6mol/L浓度的SA-B孵育,再加10 ng/ml的转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激。以蛋白印迹法观察SA-B对TGF-β1刺激的HSC内细胞外调节的蛋白激酶(ERK)表达及其磷酸化和对HSC表面TGF-β1Ⅰ型受体(TβRⅠ)、Ⅱ型受体(TβpRⅡ)表达的影响,观察由此改变致HSC合成Ⅰ型胶原蛋白的变化。ELISA法测定HSC培养液中Ⅰ型胶原的含量;酶谱法观察基质金属蛋白酶2、9、13(MMP-2、MMP-9、MMP-13)的活性。 结果10-6mol/L浓度的SA-B可抑制原代正常培养9 d的HSC及TGF-β1刺激的HSC中ERK1/2的磷酸化,对TβRⅠ和TβRⅡ的表达无影响。SA-B可抑制原代正常培养的HSC合成Ⅰ型胶原,抑制TGF-β1刺激的HSC Ⅰ型胶原的合成及分泌。SA-B对HSC培养液中MMP-2和MMP-13的活性无明显作用,对MMP-9活性则有明显的促进作用。 结论 SA-B抑制了正常原代培养已活化的HSC和经TGF-β1刺激的HSC内ERK信号传导通路,这一抑制作用与HSC的TGF-β1受体表达无关。SA-B通过抑制TGF-β1的信号传导,减少了HSC对Ⅰ型胶原的合成与分泌,此种细胞功能的改变可能与基质金属蛋白酶的降解作用无关。

右美托咪定对内毒素诱导的急性肺损伤大鼠p38丝裂原激活的蛋白激酶的活化及炎症反应的影响

目的探讨右美托咪定（dexmedetomidine，Dex）对内毒素（1ipopolysaccharides，LPS）诱导的急性肺损伤（acutelunginjury，Au）大鼠肺部P38丝裂原活化蛋白激酶（p38mitogen-activatedproteinkinase，p38MAPK）和炎症反应的影响。方法健康成年雄性SD大鼠采用完全随机分组法分为5组，每组10只：生理盐水组（C组），LPS组，0．2μg·kg^-1·h^-1Dex处理组（Dex0．2组），1μg·kg^-1·h^-1Dex处理组（Dexl组），5μg·kg^-1·h^-1Dex处理组（Dex5组）。各Dex处理组在给予LPS（腹腔注射LPS8ms／kg）诱导ALI之前输注Dex负荷剂量1μg·kg^-1·h^-1 10min，然后持续按各处理组相应剂量输注Dex至各时间点。C组与LPS组输注等体积的生理盐水（1ml·kg^-1·h^-1）至各时间点。收集肺泡灌洗液（bronchoalveolarlavagefluid，BALF），动脉血和肺组织标本，进行动脉血气分析，测量肺组织湿，干重比，观察肺病理学改变，检测支气管BALF中肿瘤坏死因子-a（turnoutnecrosisfactor-a，TNF啾）和白介素（interleukin，IL）．10的浓度，利用Westernblot检测各组大鼠肺组织中p38MAPK和磷酸化水平。结果在注射了LPS后，各组大鼠的动脉氧分压均明显降低（61．3±1．2）VS（131．7±4．7）（P〈0．05）；C组大鼠肺部未见明显的病理改变，LPS组、Dex0．2组和Dexl组大鼠肺部有明显的病理改变，而Dex5组大鼠肺部病理改变较LPS组明显减轻；肺组织湿／干重比LPS组明显的高于C组（5．4±0．3）VS（3．6±0.3）（P〈0．05），Dex5组明显低于LPS组（4．4±0．4）VS（5．4±0．3）（P〈0．05）；磷酸化的p38MAPK、支气管BALF中TNF-α和IL-10水平，LPS组、DexO．2组和Dexl组明显高于c组（P〈0．05），Dex5组明显低于LPS组（P〈0．05）。结论Dex能够减轻LPS造成的大鼠ALI，其机制可能部分与阻断P38MAPK的活化及肺部炎症有关。

地塞米松对内毒素性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞丝裂原激活的蛋白激酶磷酸酶-1表达的影响

目的探讨地塞米松（dexamethason，DEX）对急性肺损伤（acute lung injury，AH）大鼠肺泡巨噬细胞（alveolar macrophage，AM）中丝裂原激活的蛋白激酶磷酸酶-1（mitogen-activated protein kinase phosphatase-1，MKP-1）的影响，以及AM中MKP-1表达在内毒素性肺损伤中的可能作用。方法大鼠尾静脉注射内毒素建立急性肺损伤模型。Westernblot法检测肺巨噬细胞的p38MAPK，磷酸化p38MAPK，MKP-1含量变化；ELISA法检测细胞培养上滴液中TNF-α，IL-6的含量改变。结果脂多糖可使细胞培养上滴液中，TNF—α和IL-6的表达增加（P〈0．05），DEX可以部分逆转上述作用（P〈0．05）。且可诱导内毒素肺损伤模型AM中MKP-1表达增加（P〈0．05）。结论脂多糖促进TWF-α和IL-6的表达，可能是急性肺损伤肺内炎症损害的启动和促进因素；DEX可能通过抑制TNF-α和IL-6的表达并且增加AM中MKP-1的含量，进而抑制p38MAPK，发挥抗炎作用。

细胞外信号调节激酶/丝裂原激活的蛋白激酶细胞信号转导通路与类风湿关节炎研究现状

在细胞生命活动的过程中,不同的细胞相互问通信协调,将外界的信号传递至效也细胞胞内,启动特定的生理功能.传递信号的通路种类繁多,有其各自功能,也互相交义影响,而细胞外信号调节激酶（extracellular signal-regulated kinaaes,ERK）通路就是将细胞外信号传递至细胞内的信号通路之一.

p38丝裂原激活的蛋白激酶信号通路在肺缺血-再灌注损伤中的作用

肺缺血重新灌注后，由肺缺血引起的肺损伤不但没有减轻，反而有加重的现象称为肺缺血．再灌注损伤。肺缺血一再灌注损伤可在多种情况下发生：心肺转流、肺栓塞、肺切除、肺移植等，尤其在肺移植中，肺缺血．再灌注损伤可导致肺动脉高压、肺水肿及呼吸衰竭，严重影响患者的术后恢复甚至危及患者生命。近年从不同角度对肺缺血-再灌注损伤的机制做了大量研究，其中对丝裂原激活的蛋白激酶（mitogen activated protein kinase，MAPK）信号通路方面的研究成为热点之一。p38MAPK是近年发现的一类新的MAPK信号通路，它不仅在炎性反应、应激反应中具有重要的作用，还参与细胞的多种生理过程。现就p38 MAPK信号通路及其在肺缺血-再灌注损伤中的作用综述如下。

丝裂原活化蛋白激酶激活的蛋白激酶2在心血管系统中的作用

心血管疾病的发生发展与慢性炎症有关。p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)介导的信号通路在心血管细胞炎症、增殖、分化、迁移和代谢中起着重要作用。抑制p38MAPK可有效抑制炎症介质的表达,由于p38抑制剂在安全性方面不可接受,故研究其下游底物是很有必要的。丝裂原活化蛋白激酶激活的蛋白激酶2(MK2)是p38MAPK重要的下游底物且参与了心血管疾病的发生发展。因此抑制MK2的活性在心血管疾病的治疗及预防中具有重大的临床意义。文章主要对MK2的结构功能和在心血管疾病中的作用展开综述。

吡格列酮对脂多糖引起的大鼠海马有丝分裂原激活蛋白激酶p38信号传导通路的影响

吡格列酮（pioglitazone，Pio）能抑制脂多糖诱导的原代培养的星形胶质细胞炎症因子的释放，对抗谷氨酸诱导的神经细胞损伤，也有研究显示Pio通过抑制p38MAPK信号传导通路抑制LPS诱导的小胶质细胞炎症反应。但关于Pio对大鼠脑内炎症反应的抑制作用是否与p38MAPK信号传导通路有关目前尚未见报道，本研究通过大鼠脑室内注射LPS建立炎症反应动物模型，应用Western blot方法研究Pio对LPS引起的p38MAPK信号传导通路的影响。

磷脂酰肌醇-3-激酶在胰岛素与表皮生长因子激活MAPK信号通路中的不同作用

目的 研究磷脂酰肌醇 3 激酶 (phosphatidylinositol3 kinase, PI3K)在胰岛素和表皮生长因子 (epidermalgrowthfactor, EGF)刺激丝裂原激活的蛋白激酶 (mitogen activatedproteinkinase,MAPK)信号通路中的作用。方法 主要应用免疫印迹方法分析MAPK的磷酸化水平,利用PI3K特异性抑制剂wortmannin了解PI3K在其中所起的作用。结果 胰岛素和EGF均能有效、快速地刺激MAPK的磷酸化;wort mannin抑制胰岛素刺激的MAPK磷酸化,但对EGF刺激的MAPK磷酸化却没有明显影响。与此相反,胰岛素和EGF刺激的蛋白激酶B的磷酸化,均可被wortmannin同样有效地抑制。另外,wortmannin抑制胰岛素刺激的MAPK磷酸化具浓度依赖性;其不能抑制EGF刺激的MAPK磷酸化的性质并不随EGF刺激浓度的改变而改变。结论 PI3K在胰岛素和EGF刺激的MAPK磷酸化信号通路中起不同的作用。

下调DNA损伤激活的长链非编码RNA抗心房颤动大鼠心肌纤维化的机制研究

目的:探究下调DNA损伤激活的长链非编码RNA(lncRNA NORAD)抗心房颤动(房颤)大鼠心肌纤维化作用及可能的作用机制。方法:SD大鼠随机分为对照组、房颤组、重组腺相关病毒血清型9阴性对照(rAAV9-NC)组、重组腺相关病毒血清型9载体含用于沉默lncRNA NORAD的小干扰RNA(rAAV9-siNORAD)组、p38丝裂原激活的蛋白激酶(p38MAPK)抑制剂SB203580组、rAAV9-siNORAD+SB203580组,每组8只。建立各组模型大鼠并进行对应干预措施,实验结束后对大鼠进行心电图测试,记录房颤的发生率和持续时间;并检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)和炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平;Masson染色检测心房组织纤维化,计算心房胶原容积分数(CVF);实时荧光定量PCR检测心房组织lncRNA NORAD、Ⅰ型胶原(COL1-A1)和Ⅲ型胶原(COL3-A1)的mRNA表达情况;Western blot检测心房组织丝裂原活化蛋白激酶激酶6(MKK6)、p38MAPK和核因子κB p65(NF-κB p65)及其磷酸化蛋白的表达情况。结果:与对照组相比,房颤组大鼠可观察到P波消失,出现大小不等、不规则的f波,心房组织有明显的纤维化改变,CVF、血清c TnI、CK-MB、TNF-α、IL-6水平、心房组织COL1-A1和COL3-A1的mRNA水平以及lncRNA NORAD表达水平、MKK6蛋白水平、磷酸化p38 MAPK与p38 MAPK的比值和磷酸化NF-κB p65与NF-κB p65比值升高,差异具有统计学意义(P均<0.05);与房颤组相比,rAAV9-siNORAD组和SB203580组大鼠房颤的发生率降低,持续时间缩短(P<0.05),CVF,血清cTnI、CK-MB、TNF-α、IL-6水平,心房组织COL1-A1和COL3-A1的mRNA水平以及lncRNA NORAD表达水平、MKK6蛋白水平、磷酸化p38 MAPK与p38 MAPK的比值及磷酸化NF-κB p65与NF-κB p65的比值降低,差异均具有统计学意义(P均<0.05);分别与单用SB203580和r AAV9-siNORAD相比,两者联合应用后p38 MAPK/NF-κB p65信号通路的激活被进一步抑制,心肌纤维化程度进一步降低。结论:下调lncRNA NORAD可能通过抑制p38 MAPK/NF-κB p65信号通路激活对房颤大鼠发挥抗心肌纤维化作用。

心肌特异性丝裂原活化蛋白激酶激活的蛋白激酶2基因敲除对小鼠心肌缺血/再灌注损伤的影响及其机制

目的研究心肌特异性丝裂原活化蛋白激酶激活的蛋白激酶2(MK2)基因敲除对小鼠心肌缺血/再灌注(I/R)损伤的影响及其机制。方法将野生型C57BL/6J小鼠随机分为MK2^(+/+)组、MK2^(+/+)+I/R组,心肌特异性MK 2基因敲除的C57BL/6J小鼠随机分为MK2^(-/-)组、MK2^(-/-)+I/R组,每组12只。采用左冠状动脉前降支夹闭的方法建立小鼠心肌I/R损伤模型。比较各组小鼠心肌中MK2、磷酸化MK2(p-MK2)蛋白质相对表达量,心功能超声指标[左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短分数(LVFS)),血清心肌损伤标志物[心肌肌钙蛋白I(cTnI)、磷酸肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平],心肌组织结构、心肌梗死面积[梗死区域(IA)面积/左心室(LV)面积],心肌细胞凋亡情况[心肌细胞凋亡率、裂解型含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved caspase-3)相对表达量],心肌组织炎症反应指标[NF-κB相对表达量及TNF-α、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)含量]和氧化应激反应指标[活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量]。结果MK2^(+/+)组与MK2^(+/+)+I/R组间小鼠心肌中MK2蛋白质相对表达量的差异无统计学意义(P>0.05),MK2^(+/+)+I/R组小鼠心肌中p-MK2蛋白质相对表达量显著高于MK2^(+/+)组(P<0.05),MK2^(-/-)组、MK2^(-/-)+I/R组小鼠心肌中均不表达MK2、p-MK2。与MK2^(+/+)组比较,MK2^(+/+)+I/R组小鼠的LVEF、LVFS均显著降低(P值均<0.05),血清cTnI、CK-MB水平均显著增高(P值均<0.05);与MK2^(+/+)+I/R组比较,MK2^(-/-)+I/R组小鼠的LVEF、LVFS均显著增高(P值均<0.05),血清cTnI、CK-MB水平均显著降低(P值均<0.05)。MK2^(+/+)组和MK2^(-/-)组小鼠心肌纤维排列整齐,细胞形态正常;MK2^(+/+)+I/R组和MK2^(-/-)+I/R组小鼠均有明显的心肌纤维断裂、细胞肿胀且排列混乱,但MK2^(-/-)+I/R组小鼠的病理改变程度较MK2^(+/+)+I/R组轻。MK2^(+/+)组及MK2^(-/-)组小鼠均无心肌梗死灶,MK2^(-/-)+I/R组小鼠的IA/LV值显著低于MK2^(+/+)+I/R组(P<0.05)。与MK2^(+/+)组比较,MK2^(+/+)+I/R组小鼠的心肌细胞凋亡率,心肌中leaved caspase-3、NF-κB蛋白质相对表达量及TNF-α、ICAM-1含量,以及心肌中ROS、MDA含量均显著增高(P值均<0.05),SOD含量显著降低(P<0.05);与MK2^(+/+)+I/R组小鼠比较,MK2^(-/-)+I/R组小鼠的心肌细胞凋亡率,心肌中cleaved caspase-3、NF-κB相对表达量及TNF-α、ICAM-1含量,以及心肌中ROS、MDA含量均显著降低(P值均<0.05),SOD含量显著增高(P<0.05)。结论MK2参与心肌I/R损伤的发生,敲除MK 2基因可显著减轻心肌I/R损伤,并减少细胞凋亡,减轻炎症反应和氧化应激反应。

植物雌激素金雀异黄酮通过p38MAPK通路促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化

目的研究丝裂原激活的蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases,MAPKs）的亚型p38 MAPK在植物雌激素金雀异黄酮（Genistein）促进小鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow-derived mesenchymal stem cells ,BMSCs）向成骨细胞分化过程中的作用.方法 BMSCs用无酚红α-MEM（含经活性碳吸附的10% FBS、β-磷酸甘油、维生素C）培养,先用Genistein处理细胞,观察BMSCs向成骨细胞分化情况,然后用SB203580（p38 MAPK通路阻断剂）以及PD98059（p44/42 MAPK通路阻断剂）阻断相应的通路后,再用Genistein处理细胞,观察BMSCs向成骨细胞分化情况,并同时观察上述处理后MAPK通路的变化.测定碱性磷酸酶（ALP）活性和钙（Ca）沉积量反映BMSCs向成骨细胞分化状况,用Western blot来检测MAPK通路是否激活.结果 Genistein（0.01,0.1,1 μmol·L-1）剂量依赖性增加小鼠BMSCs细胞内ALP活性和细胞外Ca沉积量,并同时引起p38MAPK通路的激活和p44/42MAPK通路的抑制.SB203580预处理能减弱Genistein刺激引起的p38MAPK通路的激活并同时阻止Genistein诱导的BMSCs向成骨细胞分化.结论 Genistein在0.01～1 μmol·L^-1剂量范围内可通过p38MAPK通路促进小鼠BMSCs向成骨细胞分化.

p38MAPK对轻度热应激大鼠脾脏巨噬细胞免疫功能的影响

目的:探讨p38MAPK在Bip蛋白介导的体外轻度热应激大鼠巨噬细胞功能改变中的信号作用.方法:p38MAPK抑制剂预处理大鼠脾脏巨噬细胞,将细胞置于41℃恒温箱中,使细胞轻度热应激,1h后恢复到37℃(抑制组),以未应激(对照组)和41℃热应激1h后60min巨噬细胞(应激组)为对照,分别检测3组巨噬细胞吞噬、杀伤、趋化功能,同时检测p38MAPK蛋白和Bip蛋白的表达.结果:p38MAPK抑制剂预处理大鼠脾脏巨噬细胞,与应激组比较,轻度热应激后巨噬细胞吞噬、趋化和杀伤活性明显降低(0.17±0.01vs0.74±0.03,33.32±3.55vs82.07±5.17,24.20%±2.39%vs60.80%±4.02%,均P<0.01);应激组p38MAPK蛋白表达明显上调,p38MAPK抑制剂预处理后,抑制组p38MAPK蛋白表达受到抑制,与应激组比较差异有显著性(p38/β-actin:2.863±0.794vs4.752±1.386,P<0.01);Bip蛋白的表达(Bip/β-actin)也因p38MAPK抑制剂预处理而由应激组的1.270±0.535降至抑制组的1.028±1.061(P<0.05).结论:p38MAPK抑制剂可显著抑制轻度热应激大鼠巨噬细胞吞噬、趋化和杀伤功能以及p38MAPK和Bip蛋白的表达.

内皮素-1通过一种不依赖于p38 MAPK的信号转导机制刺激心肌细胞起搏通道I_f的表达

目的探讨血管活性肽内皮素-1（ET-1）对新生鼠心室肌细胞起搏通道If表达的影响及其细胞内信号机制。方法采用酶消化法急性分离1～3d龄新生大鼠心室肌细胞，用全细胞膜片钳技术记录If电流，定量RT-PCR技术检测介导If电流的、超极化激活的环核苷酸门控通道亚型HCN2和HCN4的表达。结果ET-1呈剂量和时间依赖性增强了HCN2和HCN4通道亚型的表达，ET-1的这-作用可被其ETA受体阻断剂BQ-123阻断，而非ETR受体阻断剂BQ-788，而且特异性p38MAPK抑制剂SB．203580也不影响ET-1的作用。结论ET-1通过-种ETA受体介导的、不依赖于p38MAPK的信号转导机制刺激了心肌细胞起搏通道，f的表达。这-作用与ET-1致心律失常机制有关。

丝裂原活化蛋白激酶激活的蛋白激酶2基因在白色念珠菌诱导急性肺损伤中的作用及其机制

目的:丝裂原活化蛋白激酶激活的蛋白激酶2(MK2)基因在白色念珠菌(CA)诱导急性肺损伤中的作用及机制。方法:野生型C57/b6小鼠分为MK2组和MK2+CA组;MK2基因敲除C57/b6小鼠分为MK2 KO组和MK2 KO+CA组;MK2+CA组和MK2 KO+CA组小鼠麻醉后经气管注射50μl白色念珠菌,MK2组和MK2 KO组小鼠麻醉后器官注射50μl生理盐水。分析4组小鼠存活情况;采用苏木精-伊红染色分析炎症情况;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和荧光定量聚合酶链反应(qPCR)分析血清炎性因子白细胞介素(IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α蛋白和mRNA水平;分离肺组织,采用蛋白质免疫印迹分析肺组织磷酸化p55和p65表达水平;采用流式细胞术分析巨噬细胞激活情况。组间比较采用t检验。结果:MK2+CA组肺病理损伤评分(8.74±1.54)明显高于MK2 KO+CA组小鼠(3.98±0.99),差异有统计学意义(t=5.412,P<0.05)。MK2组和MK2 KO组小鼠肺组织湿重/干重比值(3.39±0.15、3.42±0.20)比较,差异无统计学意义(t=0.267,P>0.05)。MK2 KO组小鼠肺组织湿重/干重比值(3.42±0.20)明显低于MK2 KO+CA组(4.32±0.20),差异有统计学意义(t=9.439,P<0.05)。MK2+CA组小鼠肺组织湿重/干重比值(5.79±0.21)明显高于MK2 KO+CA组(4.32±0.20),差异有统计学意义(t=14.300,P<0.05)。MK2+CA组小鼠血清炎性因子TNF-α、IL-6、IL-1β水平[(76.84±7.57)、(97.47±8.85)、(51.63±4.24)ng/ml]明显高于MK2 KO+CA组[(51.90±6.51)、(42.67±4.65)、(28.63±3.35)ng/ml],差异有统计学意义(t=7.058、15.500、12.030,P<0.05)。MK2+CA组小鼠血清F4/80+/CD11b+/CD80+巨噬细胞比例[(87.26±4.70)%]明显高于MK2 KO+CA组[(53.05±10.95)%],差异有统计学意义(t=8.120,P<0.05)。MK2+CA组小鼠肺组织肺组织磷酸化p65和p50蛋白表达水平(1.82±0.10、1.33±0.06)明显高于MK2 KO+CA组(1.23±0.10、1.00±0.07),差异有统计学意义(t=11.780、9.810,P<0.05)。结论:MK2参与白色念珠菌诱导急性肺损伤进程,敲除MK2可显著缓解巨噬细胞激活,降低急性肺损伤炎性反应。