细胞外信号调节激酶/丝裂原激活的蛋白激酶细胞信号转导通路与类风湿关节炎研究现状

在细胞生命活动的过程中,不同的细胞相互问通信协调,将外界的信号传递至效也细胞胞内,启动特定的生理功能.传递信号的通路种类繁多,有其各自功能,也互相交义影响,而细胞外信号调节激酶（extracellular signal-regulated kinaaes,ERK）通路就是将细胞外信号传递至细胞内的信号通路之一.

人肺癌细胞的肿胀应激及其信号通路分析

目的通过比较肺癌与对应癌旁组织的含水量、细胞核大小以及丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)磷酸化激活情况以明确肺癌细胞是否存在肿胀应激。方法采用干湿质量比较法检测10例人肺腺癌、12例肺鳞癌以及对应的癌旁正常肺组织新鲜标本的含水量差别。用磷酸化和非磷酸化抗体结合免疫组织化学染色方法,检测30例肺腺癌、32例肺鳞癌、10例正常肺泡上皮细胞和10例正常肺支气管上皮细胞c-Jun氨基末端激酶(JNK)、胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和p38 MAPK的表达及磷酸化激活情况。最后采用HE染色结合图像分析软件估算肺腺癌和肺鳞癌的癌细胞和对应癌旁正常肺泡上皮细胞及支气管上皮细胞的细胞核大小差别。结果干湿质量比较法发现肺鳞癌和肺腺癌的平均含水量均显著高于其对应的癌旁正常组织。免疫组织化学染色发现p38 MAPK在肺腺癌和肺鳞癌及癌旁组织均高表达。ERK在肺腺癌和鳞癌组织均弱表达,但是在肺癌旁组织高表达。JNK在肺腺癌及癌旁组织均弱表达。在肺泡上皮组织和支气管上皮组织中JNK、p38 MAPK、ERK1/2均未被磷酸化激活。但是,肺腺癌、肺鳞癌组织中JNK被磷酸化激活,而p38 MAPK及ERK1/2未被磷酸化激活。肺癌细胞的细胞核明显大于对应的正常肺上皮细胞的细胞核。结论肺癌细胞存在肿胀应激,不同组织类型肺癌细胞肿胀的信号通路存在差异。

五味子甲素通过MAPK/ERK途径拮抗黑素细胞中黑素生成的机制研究

目的:探讨五味子甲素通过丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)/胞外信号调节激酶(ERK)途径拮抗黑素细胞中黑素生成的机制。方法:设人表皮黑素细胞组,五味子甲素低、中及高剂量组(125、250及500μmol/mL)。培养结束后,采用噻唑蓝法测定细胞活力,流式细胞仪评估细胞凋亡指数,黑素制备标准曲线测定黑色素合成能力,酶联免疫吸附试验测定酪氨酸酶水平,逆转录聚合酶链反应及蛋白质印迹法测定细胞MAPK、ERK mRNA和蛋白表达水平。结果:与人表皮黑素细胞组比较,五味子甲素低、中及高剂量组的吸光度(OD)值、存活率、黑素合成水平和酪氨酸酶水平均降低,差异均有统计学意义(P<0.05);且随着五味子甲素剂量的升高,人表皮黑素细胞OD值、存活率、黑素合成水平和酪氨酸酶水平逐渐降低,五味子甲素各剂量组呈剂量-效应趋势(P<0.05)。与人表皮黑素细胞组比较,五味子甲素低、中及高剂量组细胞凋亡率,MAPK、ERK mRNA和蛋白表达水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05);且随着五味子甲素剂量的升高,人表皮黑素细胞凋亡率,MAPK、ERK mRNA和蛋白表达水平逐渐升高,五味子甲素各剂量组呈剂量-效应趋势(P<0.05)。结论:五味子甲素能抑制黑素细胞增殖,促进黑素细胞凋亡,进而抑制黑素生成;其机制可能与五味子甲素促进人表皮黑素细胞MAPK、ERK mRNA和蛋白表达,进而激活MAPK/ERK途径有关。

澳洲茄碱通过MAPK/ERK信号通路调控肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的研究

目的:探讨澳洲茄碱对肝癌细胞增殖活性的影响及对丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)/胞外信号调节激酶(ERK)信号通路的调节作用。方法:取对数生长期的HepG2细胞随机分为对照组、澳洲茄碱组(以50μmol/L澳洲茄碱处理细胞)、激活剂组[以20μmol/L异丙肾上腺素(ISO)处理细胞]和激活剂+澳洲茄碱组(20μmol/L ISO处理细胞24 h后,以50μmol/L澳洲茄碱处理),24 h后采用四甲基偶氮唑盐法检测细胞存活率,采用划痕实验检测细胞迁移能力,采用Transwell试验检测细胞侵袭能力,采用蛋白质印迹法检测磷酸化ERK(p-ERK)、ERK、丝裂原激活的蛋白激酶激酶(MEK)和磷酸化MEK(p-MEK)蛋白相对表达量。结果:与0μmol/L澳洲茄碱比较,10、20、30、40及50μmol/L澳洲茄碱均可降低细胞存活率,差异均有统计学意义(P<0.05),且具浓度依赖性。与对照组比较,澳洲茄碱组细胞存活率、划痕愈合率,p-ERK、p-MEK蛋白相对表达量降低,侵袭细胞数减少;激活剂组细胞划痕愈合率,p-ERK、p-MEK蛋白相对表达量升高,侵袭细胞数增多,差异均有统计学意义(P<0.05)。与澳洲茄碱组比较,激活剂+澳洲茄碱组细胞存活率、划痕愈合率,p-ERK、p-MEK蛋白相对表达量升高,侵袭细胞数增多,差异均有统计学意义(P<0.05)。与激活剂组比较,激活剂+澳洲茄碱组细胞存活率、划痕愈合率,p-ERK、p-MEK蛋白相对表达量降低,侵袭细胞数减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:澳洲茄碱可降低肝癌细胞增殖、迁移和侵袭能力,其可能是通过抑制MAPK/ERK信号通路发挥调控作用。

miR-1260b经MAPK/ERK途径促进再生障碍性贫血小鼠骨髓造血功能恢复

目的分析微小RNA-1260b(Microrna-1260b,miR-1260b)是否经丝裂原激活的蛋白激酶/胞外信号调节的蛋白激酶(Mitogen activated protein kinase/extracellular signal regulated protein kinase,MAPK/ERK)途径促进再生障碍性贫血小鼠骨髓造血功能恢复。方法选取11周龄近交系雄性C57BL/6J小鼠6只,作为供体鼠,选取8~12周龄近交系雄性CB6F1小鼠60只,作为实验鼠。取所供体鼠制备泛T淋巴细胞,实验鼠移植泛T淋巴细胞并射线照射诱导建立再生障碍性贫血。将CB6F1小鼠分为4组,即为正常组、模型组、过表达组、沉默组,将10μl miR-1260b过表达、miR-1260b沉默载体的慢病毒悬液注射于过表达组、沉默组尾部,空白组、模型组不做任何处理,7 d后观察骨髓象、骨髓有核细胞、外周血象、造血相关因子、免疫功能及MAPK/ERK信号通路蛋白表达情况。结果在外周血象(WBC、PLT、Hb)、造血相关因子(EPO、TPO、VEGF)、骨髓有核细胞数、免疫功能(CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+))、MAPK/ERK信号通路蛋白表达(p-MEK、p-ERK、p-JNK、p-P38)上对比,模型组、过表达组、沉默组WBC、PLT、Hb、VEGF水平、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)、骨髓有核细胞数、p-MEK、p-ERK低于正常组(P<0.05)。过表达组WBC、PLT、Hb、VEGF水平、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)、骨髓有核细胞数、p-MEK、p-ERK低于模型组(P<0.05)。沉默组WBC、PLT、Hb、VEGF水平、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)、骨髓有核细胞数、p-MEK、p-ERK高于模型组(P<0.05)。沉默组WBC、PLT、Hb、VEGF水平、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)、骨髓有核细胞数、p-MEK、p-ERK高于过表达组(P<0.05)。模型组、过表达组、沉默组EPO、TPO、CD8^(+)、p-JNK、p-P38高于正常组(P<0.05)。过表达组EPO、TPO、CD8^(+)、p-JNK、p-P38高于模型组(P<0.05)。沉默组EPO、TPO、CD8^(+)、p-JNK、p-P38低于模型组(P<0.05)。沉默组EPO、TPO、CD8^(+)、p-JNK、p-P38低于过表达组(P<0.05)。结论沉默miR-1260b可促进再生障碍性贫血小鼠骨髓造血功能恢复,提高免疫功能,其可能经MAPK/ERK途径发挥作用。

丙泊酚通过MAPK/ERK信号通路对谷氨酸诱导的神经PC12细胞损伤的抑制作用

目的:研究丙泊酚通过丝裂原激活的蛋白激酶/胞外信号调节的蛋白激酶(MAPK/ERK)信号通路对谷氨酸诱导的神经PC12细胞损伤的抑制作用。方法:取PC12细胞分为正常对照组、模型(10 mmol/L谷氨酸)组和丙泊酚低、中、高浓度(12.5、25、50μmol/L+10 mmol/L谷氨酸)组,分别加入相应药物,培养48 h后,检测各组细胞的光密度、凋亡情况和细胞中ERK1/2磷酸化水平及c-fos、Bax、B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)的表达情况。结果:与正常对照组比较,模型组细胞的细胞光密度、磷酸化ERK1/2、Bcl-2表达均降低(P<0.01),凋亡率、c-fos和Bax表达均升高(P<0.01)。与模型组比较,丙泊酚低、中、高浓度组细胞的光密度、磷酸化ERK1/2、Bcl-2表达均升高(P<0.01),凋亡率、c-fos和Bax表达均降低(P<0.05或P<0.01),且各浓度间差异有统计学意义(P<0.01)。结论:丙泊酚可抑制谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡,其可能与上调ERK1/2磷酸化水平有关。