核纤层蛋白A基因通过MAPK通路调控胃癌细胞HGC27的增殖、迁移及凋亡

目的探究敲低核纤层蛋白A基因(LMNA)对人胃癌细胞HGC27的增殖、迁移及凋亡的影响和可能的作用机制。方法通过生信分析LMNA基因在胃正常组织与胃癌组织中的表达情况;取对数生长期的人胃癌细胞HGC27,根据是否敲低LMNA基因分为敲低LMNA组(si-1、si-2、si-3组)和对照组(si-NC组)共4组,取瞬时转染率最高的si-2组为si-LMNA组;采用CCK-8实验检测细胞活力,Transwell和划痕实验检测细胞的侵袭迁移能力,流式检测细胞凋亡和细胞周期,Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Caspase3、Bcl-2和丝裂源活化蛋白激酶(MAPK)通路中的p38、p-p38、ERK1/2及pERK1/2的表达;在si-LMNA组加入MAPK通路的特异性激活剂Chicoric acid,进一步验证LMNA的表达情况。结果生信分析结果提示LMNA基因在胃癌组织中高表达,LMNA低表达患者生存率更高;与si-NC组相比,si-LMNA组细胞活力下降(P<0.05),凋亡蛋白Bax、Caspase3表达升高、抗凋亡蛋白Bcl-2降低及细胞凋亡率增加(P<0.05),细胞周期阻滞在G0/G1期、S期细胞减少(P<0.05),侵袭与迁移能力降低(P<0.05),p38、ERK1/2磷酸化水平降低(P<0.05);加入激活剂后,LaminA/C表达量增高,p38、ERK1/2磷酸化水平升高,凋亡相关蛋白的表达被逆转,侵袭迁移能力被促进(P<0.05)。结论敲低LMNA基因后能促进胃癌细胞的凋亡,细胞周期被阻滞在G0/G1期,增殖、侵袭及迁移能力被抑制,其作用机制可能与MAPK信号通路密切相关。

高迁移率族蛋白B1参与心肺复苏术后大鼠海马组织P38MAPK信号通路的激活

目的探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在心肺复苏(CPR)术后大鼠海马组织激活P38 MAPK信号通路的作用。方法将SD大鼠随机分为假手术组和复苏组(按复苏后自主循环恢复后2、6、12、24和48 h各时间点分5个亚组)。在相应的时间点断头处死,取海马组织,HE染色观察海马病理变化,干湿称重法测定脑组织含水量,RTPCR法检测HMGB1 mRNA表达,Western blot检测HMGB1和P38激酶活性。结果假手术组海马组织结构未见明显变化,复苏组存在缺血病理改变,24 h最为显著。与假手术组比较:复苏组脑组织含水量、海马HMGB1 mRNA表达均呈先上升后下降的趋势,于24 h达到峰值(P<0.01);复苏组HMGB1表达在ROSC后2 h显著降低,6和12 h逐渐增高,24 h达到峰值(P<0.01);复苏组海马组织P38激酶活性于2 h表达显著升高(P<0.01),6 h达到高峰(P<0.01),后缓慢下降。结论 HMGB1可能通过参与P38 MAPK信号通路的激活介导CPR术后早期脑组织炎性反应损伤。

LncRNA-177922靶向MAPK15调节B16-F10黑色素瘤细胞黑色素生成、增殖、迁移和自噬(英文)

黑色素瘤是一种预后较差的侵袭性癌症。了解黑色素瘤的分子机制和诊断标志物对黑色素瘤的防治极为重要。LncRNAs在肿瘤的发生发展中发挥重要作用。与正常黑色素细胞相比,LncRNA-177922在B16-F10黑色素瘤中高表达。丝裂源活化蛋白激酶15 (mitogen-activated protein kinase 15, MAPK15)的缺失影响肿瘤的发生和进展。本研究中,LncRNA-177922在B16-F10细胞中过表达,结果显示,黑色素生成、增殖、迁移相关基因的mRNA和蛋白质水平显著上调(P<0.05),自噬相关基因的mRNA水平和蛋白质丰度下调(P<0.05),PI3K/AKT/mTOR通路被激活。同时,进一步验证了细胞迁移、增殖和自噬的表型。结果提示,LncRNA-177922靶向MAPK15通过交叉点细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases, ERK)参与调控黑色素生成、增殖、迁移、自噬等B16-F10细胞的生物学特性,可能是一个新的治疗靶点和诊断标志物。

双歧杆菌的脂磷壁酸对巨噬细胞MAPK的影响

目的探讨双歧杆菌的脂磷壁酸（LTA）对巨噬细胞丝裂源活化蛋白激酶（MAPK）活性的影响。方法选取6-8周龄巴比赛（BALB/c）小鼠90只,按随机数字表达法分为九组,每组10只,A组腹腔注射磷酸缓冲盐溶液（PBS）;B组腹腔注射LTA;C组腹腔注射LTA＋细胞外调节蛋白激酶（ERK）抑制剂;D组腹腔注射LTA＋c-Jun氨基末端激酶（JNK）抑制剂;E组腹腔注射LTA＋p38抑制剂;F组腹腔注射LTA＋ERK及JNK抑制剂组;G组腹腔注射LTA＋ERK及P38抑制剂组;H组腹腔注射LTA＋JNK及P38抑制剂;I组腹腔注射LTA＋3种抑制剂。九组小鼠注射5d,每天注射1次,饲养7d后,处死全部小鼠,采用免疫印迹法检测九组小鼠腹腔巨噬细胞MAPK家族中ERK1/2、p38MAPK和JNK蛋白的磷酸化水平。结果 （1）B组小鼠腹腔巨噬细胞ERK1/2蛋白磷酸化水平较A组明显升高,差异有统计学意义（P〈0.05）;两组小鼠腹腔巨噬细胞p38MAPK和JNK平均荧光强度差异无统计学意义（P〉0.05）;（2）向小鼠腹腔注射抑制剂的其他七个组别,其相应的蛋白表达水平几乎为零,且对其他蛋白表达无影响。结论 LTA可能是通过活化巨噬细胞MAPK家族中ERK1/2来激活巨噬细胞表达、合成和分泌细胞因子,抑制剂能够有效阻断蛋白表达通路,对其他蛋白表达无影响。

p38MAPK对内毒素致大鼠急性肺损伤的保护

目的研究p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)在内毒素引起急性肺损伤中的作用。方法60只SD大鼠随机分生理盐水(NS)组、内毒素(LPS)组、SB203580+LPS(SB+LPS)组和SB203580+NS(SB+NS)组。ELISA法检测不同时间点大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-6浓度,HE染色检测肺组织病理学变化,Western blot法检测肺组织中磷酸化p38 MAPK、核因子-κB(NF-κB)、p65和NF-κB抑制蛋白(IκBα)的表达。结果LPS组大鼠BALF中TNF-α、IL-6的浓度明显升高(P<0.05),肺组织破坏明显,磷酸化p38 MAPK及胞核中NF-κB p65表达显著增多,胞浆中IκBα表达显著减少。SB+LPS组肺组织损伤程度轻,BALF中TNF-α、IL-6的释放显著受抑(P<0.01),肺组织NF-κB活化及胞浆中IκBα的降解均明显受抑(P<0.01)。结论p38 MAPK在LPS诱导的急性肺损伤中发挥重要作用,p38 MAPK可能参与NF-κB的活化过程。

ras-MAPK信号通路在骨肉瘤中的表达及其意义

目的探讨骨肉瘤中ras-MAPK信号传导通路的相互关系,观察它们在骨肉瘤发生、发展中的作用。方法选取我科自2000年至2006年40例骨肉瘤手术标本,标本在切下后转入深低温保存。分别应用免疫组织化学和Western blot检测在骨肉瘤和正常骨组织中的ras基因产物p21和MAPK信号通路标志蛋白p38的表达,并分析在ras p21不同表达的骨肉瘤组织中的p38的表达,探讨两者之间的相关性。结果免疫组织化学和蛋白检测结果显示,所有40例标本中ras p21、p38在骨肉瘤组织中的蛋白表达量与正常骨组织之间差异有统计学意义,骨肉瘤中的表达均明显高于正常骨(P<0.05);ras p21与p38的表达呈现明显的正相关:在ras p21含量较高的骨肉瘤组织中p38的含量较高,在ras p21含量较低的骨肉瘤组织中p38的含量较低(P<0.05)。结论骨肉瘤中存在着ras-MAPK信号传导通路的表达,该传导通路的激活在骨肉瘤的发生、发展中起到一定作用。