丝裂素原激活蛋白激酶途径在内毒素激活枯否细胞中的作用

目的 :探讨丝裂素原激活蛋白激酶 (MAPKs)途径在脂多糖 (L PS)激活枯否细胞 (KC)中的作用。方法 :用 3种 MAPK通路阻滞剂 ,测定其后培养 KC中肿瘤坏死因子 α m RNA(TNFα m RNA)、白介素 6m RNA (IL 6 m RNA )以及诱生型一氧化氮合酶 (i NOS)表达和 TNFα、IL 6以及 NO的释放。结果 :1ERK1/ 2途径抑制剂 (PD0 980 5 9)对 KC中 TNFα m RNA表达和 TNFα的释放影响极小 ,而对 IL 6m RNA和 i NOS的表达以及 IL 6和 NO的释放有明显的抑制作用 ;2 p38MAPK途径抑制剂 (SB2 0 35 80 )对KC中 TNFα m RNA和 IL 6 m RNA表达以及 IL 6和 TNFα的释放影响极小 ,而对 i NOS的表达和 NO的释放有明显的抑制作用 ;3当用 SB2 0 2 4 74抑制整个 MAPK途径时 ,KC中 TNFα、IL 6 m RNA和 i NOS的表达和 TNFα、IL 6以及 NO的释放均明显降低。结论 :TNFα m RNA表达和 TNFα的释放主要受MAPK途径中的 JNK/ SAPK途径的调节 ,IL 6 m RNA表达和 IL 6的释放主要受 MAPK途径中的 ERK1/ 2和 JNK/ SAPK通路的调节 ,而 i NOS的表达和 NO的释放可能与以上 3种途径均有关系。

体内外不同环境下成纤维细胞丝裂素原激活蛋白激酶的变化

目的:观察脱离体内环境因素时成纤维细胞中信号蛋白表达及细胞生物学特性的变化。方法:瘢痕疙瘩和正常皮肤(作为阴性对照)均来自北京大学第三医院成形科手术患者各6例。取小块瘢痕疙瘩和正常皮肤组织,用组织块接种法进行成纤维细胞原代培养后,进行细胞传代。试验所用为第5～8代细胞。①评价信号蛋白的含量,用体外培养的瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞中p44/42丝裂原活化蛋白激酶和磷酸化的p44/42丝裂原活化蛋白激酶的积分吸光度值。②评价信号蛋白的活化强度,用体外培养的瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞中p44/42丝裂原活化蛋白激酶和磷酸化的p44/42丝裂原活化蛋白激酶的平均积分吸光度值。③评价信号蛋白的活化程度用活化率值(磷酸化的p44/42丝裂原活化蛋白激酶积分吸光度值÷p44/42丝裂原活化蛋白激酶积分吸光度值)。结果:①p44/42丝裂原活化蛋白激酶和磷酸化的p44/42丝裂原活化蛋白激酶平均积分吸光度值比较:瘢痕疙瘩成纤维细胞均低于正常皮肤成纤维细胞(0.023±0.005和0.025±0.005,0.030±0.000和0.042±0.004,P<0.05)。②p44/42丝裂原活化蛋白激酶和磷酸化的p44/42丝裂原活化蛋白激酶积分吸光度值比较:瘢痕疙瘩成纤维细胞p44/42丝裂原活化蛋白激酶高于正常皮肤成纤维细胞(6048.7±1576.2,3006.3±174.4,P<0.05),瘢痕疙瘩成纤维细胞磷酸化的p44/42丝裂原活化蛋白激酶与正常皮肤成纤维细胞无差异(4876.0±895.8,3966.5±533.1,P>0.05)。③p44/42丝裂原活化蛋白激酶和磷酸化的p44/42丝裂原活化蛋白激酶活化率比较:瘢痕疙瘩成纤维细胞低于正常皮肤成纤维细胞(0.830±0.134,1.319±0.156,P<0.05)。结论:成纤维细胞在脱离生物体内环境后,其生物学特性发生改变。体外细胞培养中,磷酸化的p44/42丝裂原活化蛋白激酶的表达水平在瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞间无明显差别,而p44/42丝裂原活化蛋白激酶的活化程度和活化强度在正常皮肤成纤维细胞明显高于瘢痕疙瘩成纤维细胞。

阿尔茨海默病大鼠海马N-甲基天冬氨酸受体和丝裂酶原激活蛋白激酶的表达

目的探讨N甲基天冬氨酸受体(NMDAR)及丝裂酶原激活蛋白激酶(MAPK)在阿尔茨海默病(AD)发病中的变化及其可能机制。方法将β淀粉样肽(Aβ1～40)1μl(10g L)在立体定位仪下注入大鼠海马建立大鼠AD模型。2周后测水迷宫潜伏期、长时程增强(LTP)、原位杂交方法检测大鼠海马NMDAR mRNA的表达及免疫组织化学SABC法检测MAPK的蛋白表达,并应用显微图像分析系统对两者的表达进行分析。结果AD模型组Aβ注射2周后,水迷宫潜伏期与模型组术前及对照组相比显著延长(P<0.05);模型组刺激前后fEPSP斜率变化及高频刺激增加的幅值与对照组相比显著下降(P<0.01);模型组海马CA1区、CA3区NMDAR mRNA及MAPK蛋白的表达显著降低(P<0.05或P<0.01)。相关性分析表明,AD模型2周后LTP检测的结果与NMDAR mRNA的表达及MAPK的蛋白表达呈正相关。结论Aβ通过抑制MAPK信号通路和降低NMDA受体磷酸化状态,导致大鼠海马LTP降低和学习记忆功能减低,参与AD学习记忆障碍和痴呆形成。

有丝分裂原激活蛋白激酶p38在佐剂关节炎大鼠滑膜及肺组织的表达

目的研究有丝分裂原激活蛋白激酶（MAPK）-p38在佐剂关节炎（AA）大鼠滑膜及肺组织中表达，探讨类风湿关节炎（RA）的发病机制。方法给大鼠右后足跖部皮下注射完全弗氏佐剂（CFA）复制RA的动物模型-AA。用原位杂交法检测p38mRNA在AA大鼠滑膜及肺组织中的表达。结果AA大鼠滑膜和肺组织p38mRNA阳性细胞的平均灰度值（0～255，深～浅）明显低干正常大鼠（P〈0．01）。AA大鼠滑膜的巨噬细胞，成纤维细胞和淋巴细胞的胞浆内均有p38mRNA的表达。肺组织中p38mRNA主要表达于巨噬细胞，单核细胞及浸润的淋巴细胞中。结论AA大鼠p38mRNA过表达与AA的滑膜及肺部病变有关，可能在RA的发病中有重要作用。

川芎嗪干预转化生长因子β1诱导肝星状细胞结缔组织生长因子表达中p38丝裂酶原激活蛋白激酶的途径

背景:前期研究发现川芎嗪可通过抑制肝星状细胞的增殖和阻断Ⅰ,Ⅲ胶原的合成,下调结缔组织生长因子的表达等,发挥抗肝纤维化的作用,但具体机制尚不清楚。目的:观察川芎嗪对体外培养肝星状细胞表达结缔组织生长因子的影响,以及p38丝裂酶原激活蛋白激酶(p38MAPK)信号通路在其中的作用。方法:用5μg/L转化生长因子β1诱导活化体外培养的肝星状细胞,用川芎嗪和p38MAPK特异阻断剂SB203580进行干预,以RT-PCR法检测结缔组织生长因子mRNA和Ⅰ型胶原mRNA的表达,Westernblot法检测磷酸化p38MAPK蛋白的表达。结果与结论:经转化生长因子β1诱导后,肝星状细胞中结缔组织生长因子和Ⅰ型胶原mRNA表达显著增强(P<0.01),用川芎嗪和SB203580干预后,结缔组织生长因子和Ⅰ型胶原mRNA的表达均出现不同程度的下降。但川芎嗪和川芎嗪+SB203580混合干预对这两者的基因表达抑制作用比单独的SB203580干预更强。川芎嗪和SB203580对磷酸化p38MAPK蛋白表达也都有明显的抑制作用(P<0.01),但SB203580和川芎嗪+SB203580对其磷酸化蛋白表达抑制作用更明显,而SB203580与川芎嗪+SB203580无明显差异(P>0.05)。因此,推测川芎嗪可能通过抑制转化生长因子β1诱导的结缔组织生长因子基因表达,阻断Ⅰ型胶原合成,其作用途径可能与抑制p38mapk信号通路有关,同时认为川芎嗪抗纤维化可能是多重作用靶点。

丝裂素蛋白激活激酶信号途径介导水杨酸钠诱导的人晶状体上皮细胞中HSP27表达

背景热休克蛋白（HSPs）是生物体在各种应激情况下产生的高度保守蛋白，HSP27与人晶状体中α-晶状体蛋白在氨基酸和基因水平上高度同源，其结构和表达的异常与白内障的形成密切相关。此研究先前的研究证实水杨酸钠对H2O2造成的人品状体上皮细胞（LECs）损伤具有保护作用。目的探讨水杨酸钠诱导的人LECs中HSP27的表达及与丝裂素蛋白激活激酶（MAPK）信号途径的关系。方法人LECs—B3系在含质量分数15％胎牛血清的DMEM中进行培养，将不同浓度的水杨酸钠（0～55mmol／L）加入培养基中刺激人LECs不同时间，然后去除刺激再分别培养。在阻断实验中，分别给予P38MAPK、ERK1／2及JNK／SAPK信号通路特异性阻断剂SB20350（10μmol／L）、PD98059（20μmol／L）及SP600125（10μmol／L）预孵育细胞1h，在给予水杨酸钠刺激后检测相关指标，采用Westernblot法检测各种处理情况下人LECs中HSP27的表达，用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法检测HSP27mRNA的表达；免疫组织化学法检测HSP27蛋白在人LECs中的表达。结果正常人LECs仅有微弱的HSP27表达，35～55mmol／L水杨酸钠刺激人LECs1h去除刺激再培养6h后可使HSP27表达显著增加，与正常对照组比较差异有统计学意义（F=509．953，P〈0．01）；55mmol／L水杨酸钠刺激人LECsI～5h不能诱导HSP27的表达（F=2．119，P〉0．05），而去除刺激再分别培养6h后可诱导HSP27表达，差异有统计学意义（F：452．534，P〈0．01）；55mmol／L水杨酸钠刺激人LECs1h后去除刺激再培养3h后HSP27表达明显增加，6h达到高峰，直至24h恢复到基础水平，差异有统计学意义（F=419．234，P〈0．01）。水杨酸钠刺激30min时磷酸化p38MAPK表达增加，1h表达显著，各组总体差异有统计学意义（F=865．680，P〈0．01）；磷酸化ERK1／2在水杨酸钠刺激时间内未见升高；去除水杨酸钠刺激再培养1h后开始增加，6h达到高峰，各时间点总体差异有统计学意义（F=388．840，P〈0．01）；水杨酸钠刺激1h及去除刺激再培养过程中未见到磷酸化JNK的表达；加入P38MAPK、ERK1／2特异性阻断剂预处理人LECs1h后可使水杨酸钠诱导的HSP27表达受到显著抑制，加入JNK特异性阻断剂未见对水杨酸钠诱导的HSP27表达产生影响。结论水杨酸钠可诱导人LECs中HSP27的表达，P38MAPK和ERK1／2信号途径促进水杨酸钠诱导的HSP27在人LECs中的表达。

p38丝裂素活化蛋白激酶介导低氧预处理诱导的内质网应激相关的心肌细胞保护

钙网蛋白(calreticulin,CRT)和caspase-12是重要的内质网(endoplasmicreticulum,ER)应激分子,本实验在心肌细胞低氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)模型上观察低氧预处理(hypoxicpreconditioning,HPC)对CRT和caspase-12表达及活化的影响,探讨内质网应激(endoplasmicreticulumstress,ERS)在HPC保护机制中的意义及其细胞信号转导机制。原代培养的Sprague-Dawley乳鼠心肌细胞随机分为6组:H/R组、HPC+H/R组、SB203580+HPC+H/R组、SP600125+HPC+H/R组、HPC组和对照组。以细胞存活率、乳酸脱氢酶(lactatedehydrogenase,LDH)活性及流式细胞术检测细胞损伤情况;West-ernblot方法检测CRT和caspase-12表达、活化及p38丝裂素活化蛋白激酶(mitogen-activatedproteinkinases,MAPK)、c-JunN-terminalkinase(JNK)磷酸化水平。结果表明:(1)HPC具有细胞保护作用,与H/R组比较,HPC+H/R组细胞凋亡率和LDH漏出分别降低6.6%和70.0%,存活率增高6.4%;HPC前以特异性p38MAPK抑制剂SB203580预孵育消除HPC的保护作用,与HPC+H/R组相比,细胞凋亡率和LDH漏出分别增高5.4%和2.1倍,存活率降低5.4%,JNK特异性抑制剂SP600125预孵育对HPC的保护作用无明显影响。(2)H/R明显上调CRT表达(较对照组高8.1倍)和caspase-12活性(较对照组高33.2倍);单独HPC可诱导CRT表达增多(较对照组高2.6倍),但上调程度较H/R组低60%。H/R前进行HPC降低CRT过表达程度(降低72.4%)及caspase-12活化水平(降低59.6%)。(3)HPC前应用p38MAPK抑制剂,抑制CRT表达上调(分别较HPC+H/R组和HPC组低63.9%和71.9%),并消除HPC减轻H/R上调caspase-12活性的作用(较HPC+H/R组高7.1倍);HPC前抑制JNK活性对CRT、caspase-12表达和活化均无明显影响。上述结果提示:HPC可激发适当的ERS,抑制H/R诱导的过度ERS,减少ER凋亡信号介导的细胞凋亡。p38MAPK信号途径在HPC诱导的ER应激分子表达、抑制ER凋亡信号分子活化等机制中发挥重要作用。

丝裂素活化蛋白激酶参与内皮素刺激的兔主动脉平滑肌细胞增生

内皮素（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ，ＥＴ）是已知的体内活性最强的缩血管物质，其缩血管作用由Ｇ蛋白偶联受体所介导。但ＥＴ强大的促血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增生效应的机理尚未完全阐明。本研究选用培养的兔胸主动脉ＶＳＭＣ，探讨丝裂素活化蛋白激酶（ＭＡＰＫ）在ＥＴ促细胞增生中的作用。结果表明：ＥＴ－１呈时间和浓度依赖性地促进细胞摄取￣３Ｈ－ＴｄＲ和激活ＭＡＰＫ，此作用可被蛋白激酶Ｃ（ｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅＣ，ＰＫＣ）抑制剂Ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ（ＳＴＰ），Ｈ－７和ＥＴ＿Ａ受体拮抗剂ＢＱ１２３所抑制，但不被酪氨酸激酶抑制剂ＨｅｒｂｉｍｙｃｉｎＡ（Ｈｅｒｂ）所抑制，用ＰＫＣ激动剂ＰＭＡ（Ｐｈｏｒｂｏｌｍｙｒｉｓｔａｔｅａｃｅｔａｔｅ）预处理ＶＳＭＣ，使其ＰＫＣ活性下调，可显著减弱ＥＴ－１对ＭＡＰＫ的激活能力。本结果提示：（１）ＭＡＰＫ参与ＥＴ－１所致的ＶＳＭＣ增生；（２）ＥＴ－１促细胞增生与激活ＭＡＰＫ的作用是由ＥＴ＿Ａ受体和ＰＫＣ介导的。

人参皂苷Rg1可能通过丝裂素活化蛋白激酶途径抑制细胞凋亡

目的 探讨人参皂苷Rg1对MPP+ 诱导细胞凋亡保护作用的可能信号传导途径。方法 用吖啶橙 溴化乙锭染色观察SHSY5Y细胞凋亡率 ,流式细胞仪检测细胞内活性氧ROS水平 ,WesternBlotting法检测JNK(c junNH2 terminalkinase)激酶活性 ,免疫细胞化学染色法检测裂解的Caspase 3阳性细胞的表达率。结果 经 10 μmol·L- 1 Rg1或 2 5mmol·L- 1 N 乙酰半胱氨酸预处理后 ,MPP+ 诱导的SHSY5Y细胞凋亡受到明显抑制 ,同时细胞内ROS下降 ,JNK激酶的活性减弱 ,裂解的Caspase 3阳性细胞表达率下降。结论 Rg1可抑制MPP+ 诱导的SHSY5Y细胞凋亡 ,其作用机制可能是通过清除ROS、减弱JNK激酶的活性 ,从而减少Caspase 3的激活。

丝裂素活化蛋白激酶活性测定

丝裂素活化蛋白激酶活性测定李田昌，庞永政，苏静怡，唐朝枢（北京医科大学心血管研究所，北京１０００８３）丝裂素活化蛋白激酶（Ｍｉｔｏｇｅｎ－ａｃｔｉｖａｔｅｄＰｒｏｔｅｉｎＫｉｎａｓｅ，ＭＡＰＫ）是一族胞浆内广泛分布的含有丝氨酸／苏氨酸残基的蛋白质激酶...

血管紧张素Ⅱ对血管内皮细胞凋亡及p38丝裂素活化蛋白激酶表达的影响

目的探讨血管紧张素Ⅱ对人脐静脉内皮细胞凋亡的影响以及p38丝裂素活化蛋白激酶表达的变化。方法制备血管紧张素ⅡRPM I1640培养液培养人脐静脉内皮细胞,通过吖啶橙荧光染色观察细胞形态学的变化、流式细胞仪检测细胞凋亡率,利用逆转录聚合酶链反应和免疫印迹法分析凋亡调控基因Bc l-2 mRNA及蛋白表达水平,通过特异性磷酸化p38丝裂素活化蛋白激酶抗体采用免疫印迹法检测p38丝裂素活化蛋白激酶活性。结果血管紧张素Ⅱ能诱导内皮细胞凋亡,荧光显微镜可见明显的细胞凋亡(32.76%±2.98%比2.14%±0.36%,P<0.01);流式细胞仪检测AnnexinV-FITC/PI双染色的血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞中,早中期凋亡细胞明显增加,其细胞凋亡率为37.4%±1.6%(对照组为10.2%±1.8%)。与对照组相比,6 h、12 h、18 h及24 h Bc l-2 mR-NA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05),p38丝裂素活化蛋白激酶磷酸化水平于18 h达到最高峰(P<0.01)。结论血管紧张素Ⅱ诱导内皮细胞的凋亡可能与p38丝裂素活化蛋白激酶对Bc l-2 mRNA及蛋白表达影响有关。

丝裂素活化蛋白激酶与细胞内信息传递

不同的细胞外刺激（如生长因子、细胞因子、多肽类物质及牵张刺激等）通过不同的细胞内信息传递通路，引起相应的生物效应。丝裂素活化蛋白激酶（ｍｉｔｏｇｅｎ－ａｃ－ｔｉｖｉｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅ，ＭＡＰＫ）是新近发现的一族４０～４６ｋＤ的蛋白质丝氨酸／苏氨酸激酶，属细胞外信息调节激酶（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｓｉｇｎａｌ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄｋｉｎａｓｅｓ，ＥＲＫｓ）的基因产物，为细胞外不同刺激所致的细胞增殖、分化和肥大等信息传递途径的交汇点或共同通路。

血必净注射液对复苏后大鼠细胞因子和p38丝裂素活化蛋白激酶通路的影响

目的探讨窒息致心搏骤停（CA）心肺复苏（CPR）后大鼠心、脑组织中肿瘤坏死因子-α（TNF—α）、白细胞介素-1β（IL-1β）和p38丝裂素活化蛋白激酶（p38MAPK）的变化及血必净注射液的影响。方法采用呼气末夹闭气管窒息法建立大鼠CA模型后进行CPR。将50只健康Wistar大鼠随机分为对照组、模型组及小、中、大剂量血必净治疗组（血必净注射液浓度分别为5．0、7．5、15．0ml／kg）5组。复苏24h后处死大鼠，取心、脑组织标本，电镜下观察心、脑组织的病理改变；采用酶联免疫吸附法（ELIsA）检测心、脑组织中TNF—α、IL-1β和p38MAPK含量。结果组织病理观察显示，心、脑细胞超微结构出现损伤性改变，以模型组最重，大剂量血必净组最轻。模型组心、脑组织中TNF-α、IL-1β和P38MAPK含量较对照组明显升高（均P〈0．01）；血必净治疗组心、脑TNF—α、IL-1β、p38MAPK含量较模型组明显下降，其中大剂量组较小剂量组下降更明显（均P〈0．05）。结论CA复苏后大鼠心、脑组织内TNF-α、IL-1β和p38MAPK含量增多；血必净注射液可明显调节心、脑组织中的TNF—α、IL-1β和pagMAPK含量，而且存在明显量-效关系，从而缓解CA大鼠复苏中缺氧及再灌注后炎症因子所带来的损伤。

中药清肾颗粒对肾纤维化大鼠黏着斑激酶-Ras-丝裂素活化蛋白激酶信号转导通路的干预作用

目的：观察中药清肾颗粒对肾间质纤维化（RIF）大鼠肾组织黏着斑激酶-Ras-丝裂素活化蛋白激酶（FAK-Ras-MAPK）信号转导通路的影响。方法将40只SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组、模型组、百令胶囊组和清肾颗粒组，每组10只。采用单侧输尿管结扎（UUO）法制备RIF大鼠模型。术后百令胶囊组将百令胶囊溶于4 mL温水按0.3 g·kg-1·d-1灌胃；清肾颗粒组将清肾颗粒溶于4 mL温水按6 g·kg-1·d-1灌胃，正常对照组和模型组给予等量生理盐水灌胃。8周后检测各组大鼠血尿素氮（BUN）、肌酐（SCr）、纤维连接蛋白（FN）、α-肌动蛋白（α-SMA）水平；采用免疫组化法检测各组大鼠肾组织FAK、Ras、p38MAPK、FN、α-SMA的表达水平。结果模型组大鼠血清BUN、SCr、FN、α-SMA水平高于正常对照组；清肾颗粒组和百令胶囊组给药前血清BUN、SCr水平比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）；给药后两组BUN、SCr、FN、α-SMA均较模型组显著降低，且以清肾颗粒组降低更显著〔BUN（mmol/L）：13.18±4.91比18.56±5.59，SCr （μmol/L）：104.80±12.04比119.02±12.47，FN（mg/L）：29.72±16.75比46.38±8.63，α-SMA（kU/L）：5.49±2.68比7.13±2.37，均P＜0.05〕；免疫组化结果显示：模型组大鼠肾脏组织中FAK、Ras、p38MAPK及FN、α-SMA表达均高于正常对照组，清肾颗粒组和百令胶囊组上述各指标表达均较模型组显著降低，且以清肾颗粒组的下降程度更显著（FAK：3.00±1.41比5.28±2.21，FN：4.25±1.04比6.29±2.06，α-SMA：3.25±1.28比4.86±1.57， p38MAPK：2.50±1.31比4.71±2.50，Ras：3.50±1.41比4.29±1.38，均P＜0.05）。结论清肾颗粒可以降低RIF大鼠血清BUN、SCr水平，抑制肾脏内FAK-Ras-MAPK信号转导通路的活化，从而减少FN和α-SMA生成，发挥抗RIF作用。

p38丝裂素活化蛋白激酶介导自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖

目的研究p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)信号传导通路在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)与血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)诱导的自发性高血压大鼠(SHR)血管平滑肌细胞(VSMC)增殖中的作用。方法本实验采用体外培养SHR胸主动脉平滑肌细胞,用3H-胸腺嘧啶核苷([3H]-TdR)掺入法测定细胞增殖状况。用特异性的Phospho-p38MAPK抗体的蛋白免疫印迹法(Westernblot)检测p38MAPK的活性。结果1)AngⅡ、PDGF成剂量依赖性促进SHR血管平滑肌细胞[3H]-TdR掺入率,当AngⅡ为10-7mol/L、PDGF为10ng/L时,[3H]-TdR掺入率显著增加[AngⅡ组:(11588±1322)比对照组(2546±207)计数/min;PDGF:(5279±391)比对照组(2587±230)计数/min,P<0.05]。p38MAPK选择性阻断剂SB202190(10-9～10-7mol/L)呈浓度依赖性地降低AngⅡ、PDGF诱导的VSMC增殖活度。2)AngⅡ、PDGF对p38MAPK的磷酸化均有显著增强作用,此作用同样被SB202190抑制。3者作用都呈剂量依赖性。结论AngⅡ、PDGF能激活SHR血管平滑肌细胞的p38MAPK发生磷酸化,进而导致血管平滑肌细胞增殖。

高血压心肌肥大大鼠心肌丝裂素活化蛋白激酶的活性

目的：探讨高血压心肌肥大的细胞内信息传递途径。方法：选用１２０～１４０ｇ雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠，随机分成两组（ｎ＝６）：（１）高血压组：制作腹主动脉狭窄和高盐摄入性高血压模型；（２）对照组：除不结扎腹主动脉和常规喂养外，其余操作同高血压组。饲养３０ｄ后，采用胶内髓磷脂硷性蛋白原位磷酸化法测定心肌丝裂素活化蛋白激酶（Ｍｉｔｏｇｅｎ－ａｃｔｉｖａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅ，ＭＡＰＫ）活性，以３２Ｐ放射活性表示，采用ｔ检验和直线相关回归作统计学处理。结果：高血压大鼠心肌ＭＡＰＫ活性较对照组升高约１倍（Ｐ＜０．０１），与血压呈正相关（ｒ＝０．６６，Ｐ＜０．０５），与左心室肥大程度呈正相关（ｒ＝０．９２，Ｐ＜０．０１）。结论：高血压心肌肥大的细胞内信息传递途径可能涉及ＭＡＰＫ系统。

动脉粥样硬化早期家兔血管丝裂素活化蛋白激酶表达及氯沙坦的干预作用

为探讨血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂对加速性动脉粥样硬化早期家兔血管增生及丝裂素活化蛋白激酶蛋白表达的影响 ,以家兔加速性动脉粥样硬化早期模型为研究对象 ,采用组织学、免疫细胞化学和生物化学方法评价加速性动脉粥样硬化早期家兔血管组织学、增殖细胞核抗原及丝裂素活化蛋白激酶蛋白表达和组织胆固醇含量的改变以及口服氯沙坦的干预效应。结果发现 ,动脉粥样硬化组血管内膜与中膜厚度比值、内膜增殖细胞核抗原阳性细胞数及丝裂素活化蛋白激酶蛋白表达均显著增加 ,氯沙坦干预组内膜与中膜厚度比值较动脉粥样硬化组显著下降 ,增殖细胞核抗原阳性细胞数明显减少 ,血管壁丝裂素活化蛋白激酶蛋白表达水平明显下降 (P均 <0 .0 0 1) ,主动脉组织胆固醇含量明显降低 (P <0 .0 5 )。结果提示 ,服用氯沙坦可明显减轻加速性动脉粥样硬化病变血管内膜增生 ,抑制血管损伤时血管壁丝裂素活化蛋白激酶蛋白表达 ,减少胆固醇在血管壁沉积 ,从而可能在预防动脉粥样硬化发生中起重要作用。

丝裂素活化蛋白激酶亚类在急性缺血/再灌注肾损伤修复过程中的变化

目的 :研究急性缺血 /再灌注肾损伤修复时丝裂素活化蛋白激酶 (MAPKs)亚类细胞外信号调节激酶 (ERK)、c -Jun氨基末端激酶 (JNK)的变化 ,探讨其在肾损伤修复中的意义。方法 :夹闭大鼠双侧肾蒂造成急性缺血 /再灌注肾损伤模型 ,应用电镜观察肾组织形态学改变 ,免疫组化法检测肾组织增殖细胞核抗原 (PCNA)表达 ,采用特异性底物磷酸化结合免疫沉淀法测定肾组织的ERK、JNK活性。结果 :急性缺血后再灌注 2h肾小管上皮细胞腔面微绒毛重新出现 ,肾小管PCNA阳性细胞开始增加 ;缺血 45min使ERK活性降低 ,再灌注 5minERK活性完全恢复 ;缺血 45min对JNK活性无影响 ,再灌注 5minJNK活性增加并持续到再灌注 2h。结论 :MAPKs活性变化 ,特别是JNK活性增加参与了急性缺血 /再灌注肾损伤早期细胞修复过程。

p38丝裂素活化蛋白激酶在高糖损伤人脐静脉内皮细胞中的作用

目的探讨p38丝裂素活化蛋白激酶在高糖导致人脐静脉内皮细胞损伤过程中的作用及p38丝裂素活化蛋白激酶激活是否为蛋白激酶C依赖途径。方法体外分离培养人脐静脉内皮细胞,加入22 mmol/L葡萄糖及PMA、GF109203X(蛋白激酶C特异抑制剂)、SB203580(p38丝裂素活化蛋白激酶特异抑制剂)培养72 h。采用Western-blot检测磷酸化p38丝裂素活化蛋白激酶蛋白的表达,用逆转录聚合酶链反应检测p38丝裂素活化蛋白激酶mRNA的表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果高糖及PMA使磷酸化p38丝裂素活化蛋白激酶蛋白表达量与mRNA水平明显升高,人脐静脉内皮细胞凋亡率明显升高。高糖培养人脐静脉内皮细胞72 h后磷酸化p38丝裂素活化蛋白激酶蛋白表达量、mRNA水平、人脐静脉内皮细胞凋亡率分别由0.189±0.0103、0.313±0.0153和5.15%上升至0.605±0.0407、0.447±0.0252和16.8%(P<0.05)。SB203580和GF109203X预处理后使p38丝裂素活化蛋白激酶蛋白磷酸化的表达量与mRNA水平明显下降,人脐静脉内皮细胞凋亡率下降(P<0.05)。结论p38丝裂素活化蛋白激酶激活在高糖导致人脐静脉内皮细胞损伤过程中起促进作用,p38丝裂素活化蛋白激酶激活可能为蛋白激酶C依赖途径。p38丝裂素活化蛋白激酶特异阻断剂对高糖损伤内皮细胞有保护作用。

胡黄连苷Ⅱ干预脑缺血/再灌注损伤后p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路的作用机制

目的探讨胡黄连苷Ⅱ对脑缺血/再灌注损伤后p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)通路的影响及其神经保护作用机制。方法成年健康雄性Wistar大鼠150只,应用线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞/再灌注(MCAO/R)模型,按照随机对照原则,动物分为假手术组、模型组、胡黄连苷组、茴香霉素(p38 MAPK激活剂)组、茴香霉素+胡黄连苷组和SB203580(p38 MAPK抑制剂)组和SB203580+胡黄连苷组。改良神经功能评分(m NSS)法评价大鼠神经行为功能,HE染色观察神经细胞的形态结构,TUNEL法检测细胞凋亡,免疫组织化学法检测脑组织磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)表达水平,Western blotting检测大鼠皮质区p-p38 MAPK、磷酸化MAPK激活的蛋白激酶2(p-MK2)、磷酸化胞质磷脂酶A2(p-cPLA2)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)。结果假手术组大鼠无神经功能缺损。模型组大鼠神经功能缺损评分升高,皮质区神经细胞损伤加重,脑梗死体积增大,凋亡细胞增多,p-p38 MAPK、p-MK2、p-cPLA2、IL-6及TNF-α蛋白表达增强。胡黄连苷组、SB203580组和SB203580+胡黄连苷组大鼠皮质区神经元损伤较轻,凋亡细胞数量明显减少,p-p38 MAPK、p-MK2、p-cPLA2以及IL-6蛋白表达较模型组明显降低。茴香霉素组、茴香霉素+胡黄连苷组各项指标与模型组相近,脑梗死体积较大,神经功能缺损较重,p-p38 MAPK、p-MK2、p-cPLA2以及IL-6蛋白表达升高。结论脑缺血损伤后激活p38 MAPK信号通路介导神经元凋亡和炎症反应,胡黄连苷Ⅱ可能通过降低p38 MAPK通路的活化,抑制神经元凋亡和炎症反应从而保护神经系统。