动脉粥样硬化早期家兔血管丝裂素活化蛋白激酶表达及氯沙坦的干预作用

为探讨血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂对加速性动脉粥样硬化早期家兔血管增生及丝裂素活化蛋白激酶蛋白表达的影响 ,以家兔加速性动脉粥样硬化早期模型为研究对象 ,采用组织学、免疫细胞化学和生物化学方法评价加速性动脉粥样硬化早期家兔血管组织学、增殖细胞核抗原及丝裂素活化蛋白激酶蛋白表达和组织胆固醇含量的改变以及口服氯沙坦的干预效应。结果发现 ,动脉粥样硬化组血管内膜与中膜厚度比值、内膜增殖细胞核抗原阳性细胞数及丝裂素活化蛋白激酶蛋白表达均显著增加 ,氯沙坦干预组内膜与中膜厚度比值较动脉粥样硬化组显著下降 ,增殖细胞核抗原阳性细胞数明显减少 ,血管壁丝裂素活化蛋白激酶蛋白表达水平明显下降 (P均 <0 .0 0 1) ,主动脉组织胆固醇含量明显降低 (P <0 .0 5 )。结果提示 ,服用氯沙坦可明显减轻加速性动脉粥样硬化病变血管内膜增生 ,抑制血管损伤时血管壁丝裂素活化蛋白激酶蛋白表达 ,减少胆固醇在血管壁沉积 ,从而可能在预防动脉粥样硬化发生中起重要作用。

p38丝裂素活化激酶与脑缺血性损伤关系的研究进展

丝裂素活化激酶(MAPK)级联信号转导途径是许多信号转导通路的整合点。许多酪氨酸激酶都可以通过刺激信号级联反应激活丝裂原活化蛋白激酶通路。p38 MAPK通路是MAPK家族主要成员之一。p38 MAPK在脑缺血后早期被激活,参与炎性反应、自由基损伤、细胞凋亡等病理、生理过程,在脑缺血神经元死亡过程中发挥重要的调控作用。p38 MAPK抑制剂可望成为脑缺血性损伤临床治疗的有效途径。

p38丝裂素活化蛋白激酶介导低氧预处理诱导的内质网应激相关的心肌细胞保护

钙网蛋白(calreticulin,CRT)和caspase-12是重要的内质网(endoplasmicreticulum,ER)应激分子,本实验在心肌细胞低氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)模型上观察低氧预处理(hypoxicpreconditioning,HPC)对CRT和caspase-12表达及活化的影响,探讨内质网应激(endoplasmicreticulumstress,ERS)在HPC保护机制中的意义及其细胞信号转导机制。原代培养的Sprague-Dawley乳鼠心肌细胞随机分为6组:H/R组、HPC+H/R组、SB203580+HPC+H/R组、SP600125+HPC+H/R组、HPC组和对照组。以细胞存活率、乳酸脱氢酶(lactatedehydrogenase,LDH)活性及流式细胞术检测细胞损伤情况;West-ernblot方法检测CRT和caspase-12表达、活化及p38丝裂素活化蛋白激酶(mitogen-activatedproteinkinases,MAPK)、c-JunN-terminalkinase(JNK)磷酸化水平。结果表明:(1)HPC具有细胞保护作用,与H/R组比较,HPC+H/R组细胞凋亡率和LDH漏出分别降低6.6%和70.0%,存活率增高6.4%;HPC前以特异性p38MAPK抑制剂SB203580预孵育消除HPC的保护作用,与HPC+H/R组相比,细胞凋亡率和LDH漏出分别增高5.4%和2.1倍,存活率降低5.4%,JNK特异性抑制剂SP600125预孵育对HPC的保护作用无明显影响。(2)H/R明显上调CRT表达(较对照组高8.1倍)和caspase-12活性(较对照组高33.2倍);单独HPC可诱导CRT表达增多(较对照组高2.6倍),但上调程度较H/R组低60%。H/R前进行HPC降低CRT过表达程度(降低72.4%)及caspase-12活化水平(降低59.6%)。(3)HPC前应用p38MAPK抑制剂,抑制CRT表达上调(分别较HPC+H/R组和HPC组低63.9%和71.9%),并消除HPC减轻H/R上调caspase-12活性的作用(较HPC+H/R组高7.1倍);HPC前抑制JNK活性对CRT、caspase-12表达和活化均无明显影响。上述结果提示:HPC可激发适当的ERS,抑制H/R诱导的过度ERS,减少ER凋亡信号介导的细胞凋亡。p38MAPK信号途径在HPC诱导的ER应激分子表达、抑制ER凋亡信号分子活化等机制中发挥重要作用。

丝裂素活化蛋白激酶参与内皮素刺激的兔主动脉平滑肌细胞增生

内皮素（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ，ＥＴ）是已知的体内活性最强的缩血管物质，其缩血管作用由Ｇ蛋白偶联受体所介导。但ＥＴ强大的促血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增生效应的机理尚未完全阐明。本研究选用培养的兔胸主动脉ＶＳＭＣ，探讨丝裂素活化蛋白激酶（ＭＡＰＫ）在ＥＴ促细胞增生中的作用。结果表明：ＥＴ－１呈时间和浓度依赖性地促进细胞摄取￣３Ｈ－ＴｄＲ和激活ＭＡＰＫ，此作用可被蛋白激酶Ｃ（ｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅＣ，ＰＫＣ）抑制剂Ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ（ＳＴＰ），Ｈ－７和ＥＴ＿Ａ受体拮抗剂ＢＱ１２３所抑制，但不被酪氨酸激酶抑制剂ＨｅｒｂｉｍｙｃｉｎＡ（Ｈｅｒｂ）所抑制，用ＰＫＣ激动剂ＰＭＡ（Ｐｈｏｒｂｏｌｍｙｒｉｓｔａｔｅａｃｅｔａｔｅ）预处理ＶＳＭＣ，使其ＰＫＣ活性下调，可显著减弱ＥＴ－１对ＭＡＰＫ的激活能力。本结果提示：（１）ＭＡＰＫ参与ＥＴ－１所致的ＶＳＭＣ增生；（２）ＥＴ－１促细胞增生与激活ＭＡＰＫ的作用是由ＥＴ＿Ａ受体和ＰＫＣ介导的。

人参皂苷Rg1可能通过丝裂素活化蛋白激酶途径抑制细胞凋亡

目的 探讨人参皂苷Rg1对MPP+ 诱导细胞凋亡保护作用的可能信号传导途径。方法 用吖啶橙 溴化乙锭染色观察SHSY5Y细胞凋亡率 ,流式细胞仪检测细胞内活性氧ROS水平 ,WesternBlotting法检测JNK(c junNH2 terminalkinase)激酶活性 ,免疫细胞化学染色法检测裂解的Caspase 3阳性细胞的表达率。结果 经 10 μmol·L- 1 Rg1或 2 5mmol·L- 1 N 乙酰半胱氨酸预处理后 ,MPP+ 诱导的SHSY5Y细胞凋亡受到明显抑制 ,同时细胞内ROS下降 ,JNK激酶的活性减弱 ,裂解的Caspase 3阳性细胞表达率下降。结论 Rg1可抑制MPP+ 诱导的SHSY5Y细胞凋亡 ,其作用机制可能是通过清除ROS、减弱JNK激酶的活性 ,从而减少Caspase 3的激活。

血管紧张素Ⅱ对血管内皮细胞凋亡及p38丝裂素活化蛋白激酶表达的影响

目的探讨血管紧张素Ⅱ对人脐静脉内皮细胞凋亡的影响以及p38丝裂素活化蛋白激酶表达的变化。方法制备血管紧张素ⅡRPM I1640培养液培养人脐静脉内皮细胞,通过吖啶橙荧光染色观察细胞形态学的变化、流式细胞仪检测细胞凋亡率,利用逆转录聚合酶链反应和免疫印迹法分析凋亡调控基因Bc l-2 mRNA及蛋白表达水平,通过特异性磷酸化p38丝裂素活化蛋白激酶抗体采用免疫印迹法检测p38丝裂素活化蛋白激酶活性。结果血管紧张素Ⅱ能诱导内皮细胞凋亡,荧光显微镜可见明显的细胞凋亡(32.76%±2.98%比2.14%±0.36%,P<0.01);流式细胞仪检测AnnexinV-FITC/PI双染色的血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞中,早中期凋亡细胞明显增加,其细胞凋亡率为37.4%±1.6%(对照组为10.2%±1.8%)。与对照组相比,6 h、12 h、18 h及24 h Bc l-2 mR-NA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05),p38丝裂素活化蛋白激酶磷酸化水平于18 h达到最高峰(P<0.01)。结论血管紧张素Ⅱ诱导内皮细胞的凋亡可能与p38丝裂素活化蛋白激酶对Bc l-2 mRNA及蛋白表达影响有关。

中药清肾颗粒对肾纤维化大鼠黏着斑激酶-Ras-丝裂素活化蛋白激酶信号转导通路的干预作用

目的：观察中药清肾颗粒对肾间质纤维化（RIF）大鼠肾组织黏着斑激酶-Ras-丝裂素活化蛋白激酶（FAK-Ras-MAPK）信号转导通路的影响。方法将40只SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组、模型组、百令胶囊组和清肾颗粒组，每组10只。采用单侧输尿管结扎（UUO）法制备RIF大鼠模型。术后百令胶囊组将百令胶囊溶于4 mL温水按0.3 g·kg-1·d-1灌胃；清肾颗粒组将清肾颗粒溶于4 mL温水按6 g·kg-1·d-1灌胃，正常对照组和模型组给予等量生理盐水灌胃。8周后检测各组大鼠血尿素氮（BUN）、肌酐（SCr）、纤维连接蛋白（FN）、α-肌动蛋白（α-SMA）水平；采用免疫组化法检测各组大鼠肾组织FAK、Ras、p38MAPK、FN、α-SMA的表达水平。结果模型组大鼠血清BUN、SCr、FN、α-SMA水平高于正常对照组；清肾颗粒组和百令胶囊组给药前血清BUN、SCr水平比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）；给药后两组BUN、SCr、FN、α-SMA均较模型组显著降低，且以清肾颗粒组降低更显著〔BUN（mmol/L）：13.18±4.91比18.56±5.59，SCr （μmol/L）：104.80±12.04比119.02±12.47，FN（mg/L）：29.72±16.75比46.38±8.63，α-SMA（kU/L）：5.49±2.68比7.13±2.37，均P＜0.05〕；免疫组化结果显示：模型组大鼠肾脏组织中FAK、Ras、p38MAPK及FN、α-SMA表达均高于正常对照组，清肾颗粒组和百令胶囊组上述各指标表达均较模型组显著降低，且以清肾颗粒组的下降程度更显著（FAK：3.00±1.41比5.28±2.21，FN：4.25±1.04比6.29±2.06，α-SMA：3.25±1.28比4.86±1.57， p38MAPK：2.50±1.31比4.71±2.50，Ras：3.50±1.41比4.29±1.38，均P＜0.05）。结论清肾颗粒可以降低RIF大鼠血清BUN、SCr水平，抑制肾脏内FAK-Ras-MAPK信号转导通路的活化，从而减少FN和α-SMA生成，发挥抗RIF作用。

血必净注射液对复苏后大鼠细胞因子和p38丝裂素活化蛋白激酶通路的影响

目的探讨窒息致心搏骤停（CA）心肺复苏（CPR）后大鼠心、脑组织中肿瘤坏死因子-α（TNF—α）、白细胞介素-1β（IL-1β）和p38丝裂素活化蛋白激酶（p38MAPK）的变化及血必净注射液的影响。方法采用呼气末夹闭气管窒息法建立大鼠CA模型后进行CPR。将50只健康Wistar大鼠随机分为对照组、模型组及小、中、大剂量血必净治疗组（血必净注射液浓度分别为5．0、7．5、15．0ml／kg）5组。复苏24h后处死大鼠，取心、脑组织标本，电镜下观察心、脑组织的病理改变；采用酶联免疫吸附法（ELIsA）检测心、脑组织中TNF—α、IL-1β和p38MAPK含量。结果组织病理观察显示，心、脑细胞超微结构出现损伤性改变，以模型组最重，大剂量血必净组最轻。模型组心、脑组织中TNF-α、IL-1β和P38MAPK含量较对照组明显升高（均P〈0．01）；血必净治疗组心、脑TNF—α、IL-1β、p38MAPK含量较模型组明显下降，其中大剂量组较小剂量组下降更明显（均P〈0．05）。结论CA复苏后大鼠心、脑组织内TNF-α、IL-1β和p38MAPK含量增多；血必净注射液可明显调节心、脑组织中的TNF—α、IL-1β和pagMAPK含量，而且存在明显量-效关系，从而缓解CA大鼠复苏中缺氧及再灌注后炎症因子所带来的损伤。

p38丝裂素活化蛋白激酶介导自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖

目的研究p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)信号传导通路在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)与血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)诱导的自发性高血压大鼠(SHR)血管平滑肌细胞(VSMC)增殖中的作用。方法本实验采用体外培养SHR胸主动脉平滑肌细胞,用3H-胸腺嘧啶核苷([3H]-TdR)掺入法测定细胞增殖状况。用特异性的Phospho-p38MAPK抗体的蛋白免疫印迹法(Westernblot)检测p38MAPK的活性。结果1)AngⅡ、PDGF成剂量依赖性促进SHR血管平滑肌细胞[3H]-TdR掺入率,当AngⅡ为10-7mol/L、PDGF为10ng/L时,[3H]-TdR掺入率显著增加[AngⅡ组:(11588±1322)比对照组(2546±207)计数/min;PDGF:(5279±391)比对照组(2587±230)计数/min,P<0.05]。p38MAPK选择性阻断剂SB202190(10-9～10-7mol/L)呈浓度依赖性地降低AngⅡ、PDGF诱导的VSMC增殖活度。2)AngⅡ、PDGF对p38MAPK的磷酸化均有显著增强作用,此作用同样被SB202190抑制。3者作用都呈剂量依赖性。结论AngⅡ、PDGF能激活SHR血管平滑肌细胞的p38MAPK发生磷酸化,进而导致血管平滑肌细胞增殖。

酸性成纤维细胞生长因子对大鼠缺血/再灌注损伤肠上皮细胞丝裂素活化蛋白激酶的影响

目的观察外源性酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)对大鼠缺血/再灌注(I/R)损伤后肠上皮细胞丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)活性的影响,并探讨其与肠上皮细胞增殖能力变化的关系。方法采用大鼠肠系膜上动脉夹闭法制备缺血45min后再灌注动物模型。132只Wistar大鼠随机分为假手术组、I/R组、aFGF处理组(再灌注即刻颈静脉注射aFGF4μg)及细胞外信号调节蛋白激酶(ERK1/2)阻断剂PD98059预处理组(缺血前尾静脉注射PD980597.5μg,再灌注即刻静脉注射aFGF4μg)。检测缺血前,I/R15、30min及1、2、6、12和24h时肠上皮细胞增殖能力和MAPK活性。结果aFGF处理后肠上皮细胞增殖明显增加,同时MAPK活性显著增高。用p44/p42MAPK(ERK1/2)阻断剂PD98059可抑制ERK1/2的活性,使肠上皮细胞增殖减少。结论aFGF可促进I/R损伤后肠上皮细胞增殖,并可能与其激活肠上皮MAPK有关。

p38丝裂素活化蛋白激酶在高糖损伤人脐静脉内皮细胞中的作用

目的探讨p38丝裂素活化蛋白激酶在高糖导致人脐静脉内皮细胞损伤过程中的作用及p38丝裂素活化蛋白激酶激活是否为蛋白激酶C依赖途径。方法体外分离培养人脐静脉内皮细胞,加入22 mmol/L葡萄糖及PMA、GF109203X(蛋白激酶C特异抑制剂)、SB203580(p38丝裂素活化蛋白激酶特异抑制剂)培养72 h。采用Western-blot检测磷酸化p38丝裂素活化蛋白激酶蛋白的表达,用逆转录聚合酶链反应检测p38丝裂素活化蛋白激酶mRNA的表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果高糖及PMA使磷酸化p38丝裂素活化蛋白激酶蛋白表达量与mRNA水平明显升高,人脐静脉内皮细胞凋亡率明显升高。高糖培养人脐静脉内皮细胞72 h后磷酸化p38丝裂素活化蛋白激酶蛋白表达量、mRNA水平、人脐静脉内皮细胞凋亡率分别由0.189±0.0103、0.313±0.0153和5.15%上升至0.605±0.0407、0.447±0.0252和16.8%(P<0.05)。SB203580和GF109203X预处理后使p38丝裂素活化蛋白激酶蛋白磷酸化的表达量与mRNA水平明显下降,人脐静脉内皮细胞凋亡率下降(P<0.05)。结论p38丝裂素活化蛋白激酶激活在高糖导致人脐静脉内皮细胞损伤过程中起促进作用,p38丝裂素活化蛋白激酶激活可能为蛋白激酶C依赖途径。p38丝裂素活化蛋白激酶特异阻断剂对高糖损伤内皮细胞有保护作用。

中药金叶败毒颗粒抑制人巨细胞病毒感染丝裂素活化蛋白激酶p38信号通路的研究

目的 :研究金叶败毒颗粒 (简称中药 )对人巨细胞病毒 (HCMV)感染丝裂素活化蛋白激酶(MAPK) p38信号通路的抑制作用 ,并探讨其治疗HCMV感染的分子机制。 方法 :应用原位杂交和免疫组化方法分别检测中药和更昔洛韦 (GCV)干预HCMV感染的细胞 p38mRNA及 pRb蛋白表达水平 ,观察两种药物对HCMV感染人胚胎成纤维细胞 (HEL)的影响。结果 :两种药物均可抑制HCMV在HEL中的增殖 ,但中药能明显抑制 p38mRNA的水平 ,并使其磷酸化底物 pRb蛋白表达降低 ,而GCV无此作用。 结论

丝裂素活化蛋白激酶亚类在急性缺血/再灌注肾损伤修复过程中的变化

目的 :研究急性缺血 /再灌注肾损伤修复时丝裂素活化蛋白激酶 (MAPKs)亚类细胞外信号调节激酶 (ERK)、c -Jun氨基末端激酶 (JNK)的变化 ,探讨其在肾损伤修复中的意义。方法 :夹闭大鼠双侧肾蒂造成急性缺血 /再灌注肾损伤模型 ,应用电镜观察肾组织形态学改变 ,免疫组化法检测肾组织增殖细胞核抗原 (PCNA)表达 ,采用特异性底物磷酸化结合免疫沉淀法测定肾组织的ERK、JNK活性。结果 :急性缺血后再灌注 2h肾小管上皮细胞腔面微绒毛重新出现 ,肾小管PCNA阳性细胞开始增加 ;缺血 45min使ERK活性降低 ,再灌注 5minERK活性完全恢复 ;缺血 45min对JNK活性无影响 ,再灌注 5minJNK活性增加并持续到再灌注 2h。结论 :MAPKs活性变化 ,特别是JNK活性增加参与了急性缺血 /再灌注肾损伤早期细胞修复过程。

高糖刺激人脐静脉内皮细胞丝裂素活化蛋白激酶P38的表达

目的 探讨丝裂素活化蛋白激酶P38(P38MAPK)在糖尿病血管并发症中的作用。方法 采用体外培养和Western-blot等方法,以不同浓度D-葡萄糖及不同时间刺激人脐静脉内皮细胞系,分别检测人脐静脉内皮细胞系P38MAPK的蛋白表达。结果 随D-葡萄糖浓度增加,P38MAPK磷酸化蛋白表达量增加;延长刺激时间,P38MAPK磷酸化蛋白表达量亦随之增加。结论高糖引发的P38MAPK表达异常,可能在糖尿病血管并发症的发生、发展中起关键作用。

高血压大鼠心脏和血管丝裂素活化蛋白激酶与其磷酸酶-1的表达

目的 :探讨MAPK与MKP 1在高血压心血管重塑中的可能作用。方法 :应用Western blot的方法观察了自发性高血压大鼠(SHR)及WKY大鼠心脏和血管丝裂素活化蛋白激酶及丝裂素活化蛋白激酶磷酸酶表达的改变。结果 :(1)WKY大鼠心脏中未见有丝裂素活化蛋白激酶的表达 ,而SHR心脏中检测到了丝裂素活化蛋白激酶的表达 ;并且SHR血管中丝裂素活化蛋白激酶的表达较WKY大鼠增强90 % (P <0 0 1) ;(2 )SHR心脏及血管中丝裂素活化蛋白激酶磷酸酶 - 1的表达较WKY大鼠分别降低 5 3%及 45 % (P均<0 0 1)。结论 :SHR心脏和血管重塑的发生除与丝裂素活化蛋白激酶表达增强有关外 ,可能还与丝裂素活化蛋白激酶磷酸酶 - 1的表达下降有关。

p38丝裂素活化蛋白激酶对冠心病患者冬眠心肌细胞凋亡的影响

目的探讨冬眠心肌细胞内活化的p38丝裂素活化蛋白激酶对冬眠心肌细胞凋亡的影响。方法行冠状动脉搭桥术的冠心病患者10例,术前一周内用多巴酚丁胺超声负荷试验结合多普勒组织成像确定冬眠心肌及正常心肌的存在部位,冠状动脉搭桥术中根据检测结果进行取材(分别取正常心肌和冬眠心肌),并经电镜证实。取材心肌用Tunel法检测心肌细胞凋亡情况,免疫印迹法检测磷酸化p38的表达情况。分析冬眠心肌与正常心肌磷酸化p38及心肌细胞凋亡数是否存在差异;分析p38与心肌细胞凋亡之间的相关性。结果冬眠心肌细胞内磷酸化p38、心肌细胞凋亡数较正常心肌高;p38与心肌细胞凋亡数相关(r=0.816,P<0.05)。结论心肌慢性缺血缺氧时,心肌细胞内p38丝裂素活化蛋白激酶信号活化,活化的p38丝裂素活化蛋白激酶介导冬眠心肌细胞凋亡。

肾性高血压大鼠肥大心肌血管紧张素Ⅱ水平、碱性成纤维细胞生长因子和丝裂素活化蛋白激酶的表达

目的观察肾性高血压大鼠肥大心肌血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)水平、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)的表达。方法20只健康雄性SD大鼠随机分为2组,每组10只,实验组制备二肾一夹高血压大鼠模型,假手术组大鼠未进行二肾一夹,观察2组大鼠术后8周血压、心肌肥大指数、心肌AngⅡ含量、心肌组织bFGF与MAPK的表达。结果与假手术组比较,实验组大鼠术后8周血压、心肌肥大指数、心肌AngⅡ水平明显增高(P<0.01,P<0.05),心肌bFGF与MAPK表达显著增强(P<0.05)。结论bFGF、MAPK参与肾性高血压大鼠心肌肥大的发生机制。

丝裂素活化蛋白激酶途径在缺氧复合烧伤血清致心肌细胞损伤中的作用

目的 观察缺氧复合烧伤血清对心肌细胞丝裂素活化蛋白激酶 (MAPKs)活化的影响 ,探讨MAPKs信号途径在缺氧复合烧伤血清致心肌细胞损伤中的作用。方法 乳鼠心肌细胞原代培养 ,缺氧复合烧伤血清作用心肌细胞后不同时间点用免疫印迹化学发光法检测 p38激酶、细胞外信号调节激酶 (ERK)和c Jun氨基末端蛋白激酶 (JNK)磷酸化程度 ;分别用 p38激酶特异抑制剂 SB2 0 35 80和 ERK特异抑制剂PD980 5 9抑制 p38激酶和 ERK途径 ,观察其对缺氧复合烧伤血清培养条件下心肌细胞活性和培养上清中乳酸脱氢酶 (L DH)含量的影响。结果 心肌细胞 p38激酶和 ERK在缺氧复合烧伤血清作用后迅速、持续活化 ,而 JNK活化不明显。用 SB2 0 35 80抑制 p38激酶可显著减少细胞 L DH漏出 (各时间点 P<0 .0 5或 P<0 .0 1)和改善细胞活性 (双因素作用 12 h后 ,两者间比较 ,P均 <0 .0 1) ;相反 ,抑制 ERK途径在一定程度上增加了细胞 L DH漏出和降低细胞活性 (双因素作用 6 h和 12 h,两者间比较 ,P均 <0 .0 1)。结论 心肌细胞 MAPKs的 3条信号转导途径中 ,p38激酶途径和 ERK途径介导了缺氧复合烧伤血清刺激信号的胞内转导。其中 p38激酶途径激活介导了心肌细胞的损伤效应 ,而 ERK途径激活则有一定的细胞保护作用。

紫草素对肺炎链球菌引起的肺炎小鼠细胞外信号调节激酶/p38丝裂素活化蛋白激酶/核苷酸结合寡聚化结构域样蛋白3信号通路及肺血管通透性的影响

目的探究紫草素对肺炎链球菌引起的肺炎小鼠细胞外信号调节激酶/p38丝裂素活化蛋白激酶/核苷酸结合寡聚化结构域样蛋白3(ERK/p38/NLRP3)信号通路及肺血管通透性的影响。方法采用肺炎链球菌悬液50 L滴加BALB/c小鼠破损鼻黏膜建立肺炎链球菌性肺炎模型,成模小鼠采用随机数字表法分为模型组、紫草素低、中、高浓度组及头孢呋辛酯组,另取鼻腔滴加50 L生理盐水BALB/c小鼠为对照组,每组10只,紫草素低、中、高浓度组分别给予紫草素12.5 mg/kg、25.0 mg/kg、50.0 mg/kg,头孢呋辛酯组给予头孢呋辛酯50.0 mg/kg,对照组、模型组给予等量生理盐水,每天1次,连续灌胃7 d。末次给药12 h后处死小鼠,检测各组小鼠左肺湿/干重比值(W/D),每组采用随机数字表法选取4只小鼠进行1%伊文氏蓝5 mL/kg尾静脉注射检测肺血管通透性,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肺组织白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达量,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)及蛋白质印迹法(WB)分别检测肺组织ERK、p38、NLRP3 mRNA及蛋白表达。结果与对照组比较,模型组小鼠肺组织W/D比值[(4.49±0.27)%比(3.02±0.15)%]、肺血管通透性[(0.091±0.009)g/mg比(0.034±0.004)g/mg]、IL-1β[(567.29±14.65)pg/mL比(102.46±6.73)pg/mL]、TNF-α[(417.16±12.89)pg/mL比(83.59±6.28)pg/mL]、ERK、p38、NLRP3 mRNA及蛋白表达水平均显著增加(P<0.05);与模型组比较,紫草素低、中、高浓度组小鼠肺组织W/D比值、肺血管通透性、IL-1β、TNF-α表达量、ERK、p38、NLRP3 mRNA及蛋白表达水平均依次降低(P<0.05),紫草素高剂量组均低于头孢呋辛酯组(P<0.05)。结论紫草素可减轻肺炎链球菌性肺炎小鼠肺组织损伤、炎症反应及肺血管通透性,可能与抑制ERK/p38/NL‐RP3信号通路有关。

丝裂素活化蛋白激酶参与钙激动剂介导的心肌肥大

目的 :探讨不同来源的细胞内钙 ([Ca2 +] i)对心肌细胞丝裂素活化蛋白激酶 (MAPK)介导的心肌细胞肥大反应的作用。方法 :以培养的大鼠心肌细胞为模型 ,用血管紧张素 (Ang )刺激心肌细胞外 Ca2 +跨膜内流、三磷酸肌醇 (IP3 )刺激胞内 Ca2 +释放 ,γ-3 2 P-ATP掺入法和免疫印迹 (western blot)测 MAPK活性及蛋白含量 ,氚 -亮氨酸(3 H-L eu)、氚 -胸腺嘧啶 (3 H-Td R)掺入量作为心肌细胞肥大的指标。结果 :Ang ,IP3 刺激 15 min均能显著增加心肌细胞 MAPK活性及蛋白含量 ,并提高 3 H-L eu,3 H-Td R掺入量 ,与对照组心肌细胞相比差异显著 (P<0 .0 1)。结论 :钙激动剂诱导的 MAPK活性及含量的增加参与了心肌细胞肥大 ,心肌细胞的肥大与 [Ca2 +] i