中药清肾颗粒对肾纤维化大鼠黏着斑激酶-Ras-丝裂素活化蛋白激酶信号转导通路的干预作用

目的：观察中药清肾颗粒对肾间质纤维化（RIF）大鼠肾组织黏着斑激酶-Ras-丝裂素活化蛋白激酶（FAK-Ras-MAPK）信号转导通路的影响。方法将40只SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组、模型组、百令胶囊组和清肾颗粒组，每组10只。采用单侧输尿管结扎（UUO）法制备RIF大鼠模型。术后百令胶囊组将百令胶囊溶于4 mL温水按0.3 g·kg-1·d-1灌胃；清肾颗粒组将清肾颗粒溶于4 mL温水按6 g·kg-1·d-1灌胃，正常对照组和模型组给予等量生理盐水灌胃。8周后检测各组大鼠血尿素氮（BUN）、肌酐（SCr）、纤维连接蛋白（FN）、α-肌动蛋白（α-SMA）水平；采用免疫组化法检测各组大鼠肾组织FAK、Ras、p38MAPK、FN、α-SMA的表达水平。结果模型组大鼠血清BUN、SCr、FN、α-SMA水平高于正常对照组；清肾颗粒组和百令胶囊组给药前血清BUN、SCr水平比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）；给药后两组BUN、SCr、FN、α-SMA均较模型组显著降低，且以清肾颗粒组降低更显著〔BUN（mmol/L）：13.18±4.91比18.56±5.59，SCr （μmol/L）：104.80±12.04比119.02±12.47，FN（mg/L）：29.72±16.75比46.38±8.63，α-SMA（kU/L）：5.49±2.68比7.13±2.37，均P＜0.05〕；免疫组化结果显示：模型组大鼠肾脏组织中FAK、Ras、p38MAPK及FN、α-SMA表达均高于正常对照组，清肾颗粒组和百令胶囊组上述各指标表达均较模型组显著降低，且以清肾颗粒组的下降程度更显著（FAK：3.00±1.41比5.28±2.21，FN：4.25±1.04比6.29±2.06，α-SMA：3.25±1.28比4.86±1.57， p38MAPK：2.50±1.31比4.71±2.50，Ras：3.50±1.41比4.29±1.38，均P＜0.05）。结论清肾颗粒可以降低RIF大鼠血清BUN、SCr水平，抑制肾脏内FAK-Ras-MAPK信号转导通路的活化，从而减少FN和α-SMA生成，发挥抗RIF作用。

HBV宫内传播与胎盘滋养细胞丝裂素活化蛋白激酶信号转导通路的研究进展

乙型肝炎病毒（HBV）母婴传播是严重的全球性公共卫生问题。我国为HBV感染的高发国家。每年约有160万新生儿出生于乙型肝炎表面抗原（HB—sAg）阳性的母亲,约20万儿童通过母婴垂直传播感染而成为乙肝携带者。

丝裂素活化蛋白激酶途径在缺氧复合烧伤血清致心肌细胞损伤中的作用

目的 观察缺氧复合烧伤血清对心肌细胞丝裂素活化蛋白激酶 (MAPKs)活化的影响 ,探讨MAPKs信号途径在缺氧复合烧伤血清致心肌细胞损伤中的作用。方法 乳鼠心肌细胞原代培养 ,缺氧复合烧伤血清作用心肌细胞后不同时间点用免疫印迹化学发光法检测 p38激酶、细胞外信号调节激酶 (ERK)和c Jun氨基末端蛋白激酶 (JNK)磷酸化程度 ;分别用 p38激酶特异抑制剂 SB2 0 35 80和 ERK特异抑制剂PD980 5 9抑制 p38激酶和 ERK途径 ,观察其对缺氧复合烧伤血清培养条件下心肌细胞活性和培养上清中乳酸脱氢酶 (L DH)含量的影响。结果 心肌细胞 p38激酶和 ERK在缺氧复合烧伤血清作用后迅速、持续活化 ,而 JNK活化不明显。用 SB2 0 35 80抑制 p38激酶可显著减少细胞 L DH漏出 (各时间点 P<0 .0 5或 P<0 .0 1)和改善细胞活性 (双因素作用 12 h后 ,两者间比较 ,P均 <0 .0 1) ;相反 ,抑制 ERK途径在一定程度上增加了细胞 L DH漏出和降低细胞活性 (双因素作用 6 h和 12 h,两者间比较 ,P均 <0 .0 1)。结论 心肌细胞 MAPKs的 3条信号转导途径中 ,p38激酶途径和 ERK途径介导了缺氧复合烧伤血清刺激信号的胞内转导。其中 p38激酶途径激活介导了心肌细胞的损伤效应 ,而 ERK途径激活则有一定的细胞保护作用。

丝裂素活化蛋白激酶磷酸酶

丝裂素活化蛋白激酶磷酸酶是一类丝 /苏氨酸和酪氨酸双重底物特异性的磷酸酶 ,对于丝裂素活化蛋白激酶活性的调节起着十分重要的作用。目前已发现的MKPs家庭成员有MKP 1 (CH1 3 4 ,CL1 0 0 ) ,MKP 2(hVH 2 ) ,MKP 3 (Pyst 1 ) ,MKP 4 ,hvH 3 (B2 3 ) ,hvH 5(m3 /6) ,PAG1 ,Pyst 2 ,其中除Pyst 1外 ,都是即早基因编码的产物。MKPs受MAPK信号通路中多种成分的诱导 ,决定了它与MAPK之间作用的特异性。它通过去磷酸化作用调节MAPK信号途径的活性 ,确保了细胞内信号的精确传递 ,参与了多种主要的细胞功能的调节。

补体C5a通过p38丝裂素活化蛋白激酶途径激活单核细胞

最近美国学者对多器官功能障碍综合征（MODS）发病时C5a如何激活单核细胞（PBWCs）引起炎症失控的机制进行了研究。他们从健康志愿者外周血中分离PBWCs，用C5a（100μg／L）预处理1h，然后用脂多糖（LPS）10μg／L刺激20h。由于C5a可能通过3种丝裂素活化蛋白激酶（MAPK）途径激活PBWCs，所以在加入C5a前1h加入3种促MAPK抑制剂，

丝裂素活化蛋白激酶介导^(60)Coγ射线抑制血管平滑肌细胞增生的机制

目的研究60 Coγ射线对平滑肌细胞增殖的影响及机制。方法采用同位素技术 ,测定3 H TdR掺入和丝裂素活化蛋白激酶 (MAPK)活性。结果 1 4、2 8Gy60 Coγ射线明显抑制平滑肌细胞增殖 ,同时MAPK活性明显下降。结论 60 Coγ射线抑制平滑肌细胞增殖可能是通过降低MAPK活性途径实现的。

丝裂素活化蛋白激酶与1型糖尿病

丝裂素活化蛋白激酶 (MAPK)参与了胰岛 β细胞凋亡 ,很多细胞因子及应激刺激可激活MAPK信号转导通路 ,诱导胰岛β细胞凋亡。MAPK也可通过降低胰岛素样生长因子 (IGF)水平而诱导胰岛β细胞凋亡 ,导致 1型糖尿病的发生。探索MAPK信号转导通路在 1型糖尿病发病中的作用 ,为预防

异丙肾上腺素对小鼠心肌MAPK、NFκB和JAK/STAT信号转导途径的激活效应

为研究异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)诱导心肌肥厚或心肌重塑的分子机制,本工作以成年雄性Balb/c小鼠为研究对象,通过腹腔注射ISO,采用蛋白免疫印迹杂交方法观察ISO对小鼠心肌丝裂素活化蛋白激酶(mitogen-activted protein kinase,MAPK)、核因子-κB(NFKB)和Janus激酶/信号转导因子和转录激活因子(JAK/STAT)途径的激活效应。结果发现,ISO腹腔注射后可早期(5 min)激活心肌MAPK(ERK1/2和p38);ISO对心肌NFκB的激活效应表现为双相性,激活高峰分别为5和120 min;ISO腹腔注射60 min后可显著促进STAT3的酪氨酸磷酸化,6h时基本恢复到基础水平。上述结果提示,ISO对多种细胞内信号转导途径均具有激活效应,但表现出明显的时相差异。探明这些信号转导途径的时空整合规律,将有助于深化对心肌重塑发生机制的认识。

哺乳动物细胞中MAPK信号转导途径的研究进展

丝裂素活化蛋白激酶 (MAPK)属于丝氨酸 /苏氨酸蛋白激酶 ,可被多种刺激所活化。MAPK在所有真核细胞中均有表达。近年来 ,人们越来越关注MAPK在细胞反应中所起的重要作用。目前 ,哺乳动物细胞中已明确了 5条MAPK途径。本文主要对哺乳动物细胞中MAPK信号转导途径———ERK1 / 2、JNK。

MAPK信号转导途径及其在支气管哮喘中的作用

MAPK信号转导途径是参与支气管哮喘(哮喘)发病机制的一条重要受体信号转导机制。在哮喘机体内,通过这一途径诱导肥大细胞促使气道平滑肌增殖,促使胞浆蛋白如磷脂酶A2的磷酸化,促使转录因子和核蛋白如c-fos、c-myc、c-jun和AP-1等磷酸化,进而促进细胞增殖和活化。绝大数生长因子和部分其它细胞因子通过这一途径起作用。这一机制的研究对于哮喘发病机制的深入了解,以及研制相应的拮抗剂治疗哮喘具有重要的意义。

神经生长因子调控哮喘神经源性炎症Ras-MAPK信号转导通路

目的:探讨神经生长因子调控哮喘气道神经源性炎症的信号转导通路。方法:36只SD大鼠随机分为正常对照组、哮喘组及抗NGF组。制作卵蛋白致敏大鼠哮喘模型,采用免疫组织化学方法观察正常大鼠和哮喘大鼠背根节和肺组织中pan-Ras,pERK,c-fos蛋白的表达,并以抗NGF抗体干预,了解其对哮喘大鼠pan-Ras,pERK,c-fos蛋白表达的影响。应用MAPK特异性抑制剂PD98059以及蛋白激酶C特异性激动剂PMA作用正常人支气管上皮细胞(NHBEC),免疫印迹法半定量检测Ras-MAPK信号转导途径中total-ERK,pERK及c-fos蛋白表达变化。结果:哮喘大鼠背根节及肺组织中pan-Ras,pERK,c-fos免疫反应较正常对照组大鼠明显上调(P<0.01),经抗NGF干预后背根节和肺组织中pan-Ras,pERK,c-fos免疫反应较哮喘组大鼠明显减弱(P<0.01)。免疫印迹结果显示NGF组磷酸化的ERK1/2蛋白及c-fos蛋白水平较正常对照组显著增高。PD98059可明显抑制ERK1/2的活化及c-fos蛋白的产生。PMA可刺激NGF诱导NHBEC表达磷酸化ERK1/2及c-fos蛋白。结论:NGF可能调控了哮喘神经源性炎症Ras-MAPK信号转导通路。

MAPK信号转导与运动性心肌肥大

丝裂素活化蛋白激酶家族是多条信号转导途径中的关键物质。为进一步促进运动员心脏形成机理的研究,加深在细胞和分子生物学水平对运动性心肌肥大的认识,通过文献检索方法,综述丝裂素活化蛋白激酶在运动性心肌肥大信号转导中所起的作用。研究显示:运动性心肌肥大是运动特殊环境刺激下,心脏发生的生理性反应;由刺激到心脏表型的变化,依赖于一系列复杂的细胞内信号转导过程;丝裂素活化蛋白激酶是许多信号通路的汇聚点,其在运动性心肌肥大中也起了重要的信号介导作用。

Ras依赖型的MAPK细胞内信号转导通路

不同的细胞外刺激通过不同的细胞内信息传递通路,引起相应的生物效应。本文重点介绍Ras依赖型的MAPK信号转导通路及与其他胞内信号转导通路的关系,并对此转导通路的最新研究进展简要概述。

细胞MAPK信号转导对滋养细胞功能的影响

胎盘滋养细胞是妊娠过程中最活跃的细胞之一,其功能失调导致一系列的妊娠相关疾病。因此,滋养细胞成为研究妊娠相关疾病的焦点。细胞内信号转导与疾病关系的研究是揭开疾病发病机制的重要途径,丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)是细胞内信号转导的重要途径,可能参与细胞生长、发育、分裂等多种生理过程,并在细胞恶性侵袭等病理生理过程中起重要的作用。妊娠期滋养细胞的MAPK通路可能对滋养细胞黏附、侵袭功能的影响起关键作用。

狼疮肾炎患者尿蛋白通过p38丝裂素活化蛋白激酶信号途径刺激近端肾小管上皮细胞上调表达骨调素

目的探讨p38丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)信号通路在狼疮肾炎(LN)尿蛋白介导近端肾小管上皮细胞(HK-2)表达骨调素(OPN)中的作用。方法收集狼疮肾炎患者24 h的尿液提纯总蛋白,体外刺激HK-2细胞,分别用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和Western印迹法观察应用p38 MAPK特异性阻断剂SB203580对HK-2细胞表达OPN mRNA及蛋白的影响;免疫荧光法检测OPN及其受体CD44在细胞中的表达。结果狼疮肾炎患者尿蛋白可刺激HK-2 细胞OPN mRNA及蛋白上调表达,并呈时间和浓度依赖性,而SB203580可明显抑制这一作用。结论狼疮肾炎尿蛋白可通过p38 MAPK途径刺激HK-2细胞OPN mRNA和蛋白上调表达。

p38丝裂素活化蛋白激酶/核转录因子-κB转导通路在脓毒症所致内皮细胞凝血功能障碍中的作用

目的 探讨p38丝裂素活化蛋白激酶/核转录因子-κB（p38MAPK/NF-κB）是否参与了脓毒症所致的内皮细胞凝血功能障碍.方法 选取22例脓毒症患者血浆刺激人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,以8名健康人血浆刺激HUVEC 60 min作为阴性对照,肿瘤坏死因子-α（TNF-α）作为阳性对照.用酶联免疫吸附法（ELISA）、蛋白质免疫印迹法（Western blotting）、免疫荧光法检测p38MAPK和NF-κB的磷酸化.结果 脓毒症患者血浆TNF-α水平（ng/L）明显高于健康对照者（155.68±89.74比5.00±0.47,P〈0.01）.与20%的健康人血浆比较,用20%的脓毒症患者血浆刺激HUVEC后,组织因子（TF,μg/L）于180 min时达高峰（5.87±0.14比1.25±0.11,P〈0.01）,血管性血友病因子（vWF,μg/L）于120 min达到高峰（9.59±0.07比3.59±0.06,P〈0.01）并随后下降.用20%的脓毒症患者血浆刺激HUVEC后p38MAPK和NF-κB发生活化,p38MAPK的活化早于NF-κB（2 min比5 min）;加入p38MAPK特异性抑制剂SB239063后,NF-κB的磷酸化和核移位受阻.结论 p38MAPK/NF-κB转导通路在脓毒症引起的凝血功能障碍中具有一定的作用.

15-羟基二十碳四烯酸收缩慢性缺氧动脉环信号转导通路的部位:内皮细胞还是平滑肌

目的:观察15-羟基二十碳四烯酸(15-HETE)致慢性缺氧性大鼠肺动脉收缩的信号转导途径,阐明15-羟基二十碳四烯酸引起慢性缺氧性肺动脉收缩作用的可能机制。方法:实验于2006-03/2006-09在哈尔滨医科大学药学院进行。①实验材料:健康成年雄性Wistar大鼠,体质量220～240g,清洁级,由哈尔滨医科大学附属第二医院实验动物中心提供。②实验方法:取18只成年雄性Wistar大鼠连续缺氧9d(O2体积分数为0.12)制作大鼠缺氧模型,通过氧气监测控制器控制箱内氧气体积分数为0.12,9d后即成为缺氧大鼠模型。16只正常大鼠吸入正常空气(O2体积分数为0.21)作为对照。将大鼠麻醉后分离直径1.5mm肺内动脉,剪成2mm长动脉环置于组织浴槽中,记录血管张力变化。③实验评估:观察15-羟基二十碳四烯酸对缺氧模型组、正常组大鼠血管收缩作用,在此基础上,除去血管内皮细胞和使用丝裂素活化蛋白激酶的激酶抑制剂PD98059,明确血管内皮细胞和丝裂素活化蛋白激酶的激酶系统在15-羟基二十碳四烯酸收缩肺动脉中的作用。结果:34只大鼠均进入结果分析。①15-羟基二十碳四烯酸对正常组、缺氧模型组大鼠血管环均有收缩作用,呈浓度-效应正相关,但缺氧组收缩明显,与正常组比较,差异显著(P<0.01)。②丝裂素活化蛋白激酶的激酶抑制剂PD98059可明显阻断15-羟基二十碳四烯酸对缺氧大鼠肺动脉的收缩作用(P<0.05)。③去掉内皮的缺氧大鼠肺动脉,PD98059仍明显阻断15-羟基二十碳四烯酸的收缩作用(P<0.05)。结论:15-羟基二十碳四烯酸通过激活肺动脉平滑肌丝裂素活化蛋白激酶的激酶信号转导途径收缩慢性缺氧性大鼠肺动脉,作用部位主要位于血管平滑肌。

烫伤大鼠心肌细胞丝裂素活化蛋白激酶的活化及胞内分布规律的研究

目的 观察大鼠严重烫伤后早期心肌细胞中丝裂素活化蛋白激酶 [MAPKs,包括 p38激酶、细胞外信号调节激酶 (ERKs)和应激活化蛋白激酶 (JNK) ]的活化及胞内分布规律 ,探讨其与心肌损伤的关系。 方法 制作严重烫伤大鼠模型 ,于伤后 1、3、6、12、2 4h取其全血及心肌组织标本 ,并取正常大鼠的相应标本为对照。常规检测各血清标本中肌酸激酶同工酶 MB(CK MB)的活力 ;采用Western印迹法 ,检测各心肌组织标本中MAPKs各成员的活化情况 ,并对其组织切片行免疫组化染色。 结果 伤后 p38激酶、ERK均发生活化并伴核转位 ,以 1、3、6h最明显 (P <0 .0 1) ;伤后 1～ 2 4hJNK均未见活化。血清CK MB含量于伤后 3h升高 ,12h达高峰 (P <0 .0 5～ 0 .0 1)。 结论 p38激酶和ERK信号通路可能在严重烧伤后早期心肌细胞发生的损伤性反应中起重要作用 ,而前者可能是烧伤引发心肌损伤的主要信号转导通路之一。

丝裂素激活蛋白激酶活化与肾小管上皮细胞生物学行为的关系

目的探讨丝裂素激活蛋白激酶(MAPK)信号通路对血小板源生长因子(PDGF)诱导肾小管上皮细胞表型转化的作用及其对细胞移行能力的影响。方法以PDGF(20ng/ml)刺激培养的人近端肾小管上皮HK-2细胞,分别观察细胞形态、增殖和移行能力的变化。采用蛋白免疫印记法检测MAPK各亚类活性及α-平滑肌肌动蛋白(SMA)的表达,同时观察分别采用细胞外信号调节激酶(ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)和p38信号通路特异阻断剂PD98059、SP600125和SB203580后上述指标的变化。结果PDGF刺激6～12h使α-SMA表达上调近2倍,但刺激24～48h反而使α-SMA表达低于基础水平。PDGF刺激24h后HK-2细胞从立方形转变为梭形,细胞虽尚无增殖反应但移行能力增强至3倍(P<0.01)。PDGF诱导的ERK、JNK和p38活性均在2min时迅速增高,分别在2～5min达高峰,分别为基础水平的5.7倍、2.6倍和1.6倍(P<0.05),ERK和JNK活性增高可持续至120min,而p38活性则于60min以后恢复至基础水平。在PDGF刺激24h的情况下,PD98059和SP600125不影响基础状态及PDGF对α-SMA表达的作用,但SP600125可抑制PDGF上调的细胞移行能力(P<0.01);而SB203580既可抑制α-SMA的基础表达(P<0.01)及PDGF下调的α-SMA表达(P<0.001),同时还可显著抑制PDGF诱导的细胞移行能力(P<0.05)。结论PDGF可刺?

ERK/MAPK信号通路激活与乳腺癌细胞浸润性生长的关系

目的 :探讨乳腺癌细胞中ERK/MAPK信号转导通路异常激活与乳腺癌细胞浸润性生长的关系及可能机制。 方法 :采用Western蛋白印迹技术检测乳腺癌细胞系MCF 7和MDA MB 4 35S中磷酸化ERK/MAPK(p ERK)蛋白表达 ,以及表皮生长因子 (EGF)、胰岛素样生长因子 1(IGF 1)和ERK/MAPK通路抑制剂PD980 5 9对两种细胞ERK/MAPK信号转导通路磷酸化的调节。 结果 :雌激素受体ER(- )的浸润性乳腺癌细胞系MDA MB 4 35S中 ,p ERK表达明显高于ER(+)的非浸润性乳腺癌细胞系MCF 7;EGF可刺激两种细胞p ERK的表达增加 ,但这种刺激作用在MDA MB 4 35S细胞中更加明显 ;IGF 1则仅能刺激MCF 7细胞中p ERK的表达。PD980 5 9能有效阻滞EGF、IGF 1对p ERK的激活。 结论 :ERK/MAPK信号转导通路的异常激活与乳腺癌的浸润性生长有关 ,而EGF可能是异常激活ERK/MAPK信号转导通路 ,是刺激ER(- )的乳腺癌细胞浸润性生长的重要因素之一。