“两步转化法”高效制备携带自杀基因的重组腺病毒载体

目的采用“两步转化法”高效制备含胞嘧啶脱氨酶(CD)自杀基因的腺病毒重组载体。方法将质粒pAdEasy-1线性化后转化于BJ5183菌,制备AdEasy-1细菌;自载体pBS-CD中切出CD基因,亚克隆至穿梭质粒pAdtrackCMV上,构建的pAdtrackCMV-CD线性化后转化AdEasy-1细菌,抽提同源重组腺病毒质粒,PacⅠ酶切后转染293细胞,在293细胞中包装与扩增,利用GFP报告基因进行滴度测定。同时按“一步转化法”进行同样的重组腺病毒制备,比较二者的优劣性。结果“两步转化法”终产物17个克隆中13个正确,正确率为76.5%(13/17);“一步转化法”重组产物17个克隆中有2个正确,正确率为11.8%(2/17),两者具有显著性差异(P=0.000 17)。结论“两步转化法”细菌内同源重组是一种更高效、更方便的重组腺病毒制备方法。

硫酸钠两步转化法制备硫酸钾工艺条件研究

以硫酸法制备白炭黑产生的硫酸钠废液和工业氯化钾为原料,采用两步转化法制备硫酸钾。通过单因素条件试验和正交试验,制备钾芒硝的较优化工艺条件为氯化钾添加量为理论值的1.10倍、水添加量为理论值的3.0倍、反应时间3.5 h,制备硫酸钾的较优化工艺条件为氯化钾添加量为理论值的0.95倍、水添加量为理论值的1.6倍、反应时间为3.5 h。在上述优化条件下,所制备的K_2SO_4样品中含K_2O,Cl^-和H_2O质量分数平均值分别为53.21%,1.07%和1.57%,达到了农用硫酸钾产品质量标准(GB 20406—2006)水盐体系优等品质量指标要求。

两步转化法制取硫酸钾

研究了以钛白副产硫酸亚铁和氯化钾为原料,采用两步转化法制取硫酸钾,通过正交实验得到了最佳工艺条件。该工艺流程简短、操作控制方便,产品质量符合国标ZBG21006—89一等品要求。

应用两步氯化钙转化法高效制备双自杀基因重组腺病毒

目的构建巨细胞病毒(CMV)启动子驱动下的双自杀基因重组腺病毒。方法应用PCR扩增出CD和TK基因,经适当改造后插入pAdtrack CMV中构建成转移质粒pAdtrack CMV-CDTK,经酶切线性化后,转化用氯化钙制备的感受态AdEasier-1细菌,获得重组腺病毒质粒。最后将线性化的重组腺病毒质粒转染293细胞包装获得重组腺病毒,滴度测定后,体外感染血管内皮细胞ECV304。结果PCR检测表明已成功构建了含CD、TK融合基因的重组腺病毒,为进一步开展肿瘤的双自杀基因治疗研究奠定了基础。结论应用改进后的AdEasy系统构建腺病毒相比于传统AdEasy系统,方法更简便、成功率更高、实验周期更短。

混合钴源对Co-Pd/TiO_2催化剂催化CH_4-CO_2两步梯阶转化法合成乙酸的性能影响

以混合钴源为前驱体,采用等体积浸渍法制备了Co-Pd/TiO2催化剂,考察了其对CH4和CO2梯阶转化直接合成乙酸的催化性能,采用XRD,XPS,NH3-TPD和BET对催化剂进行了表征.结果表明,催化剂具有适宜的表面酸性、高比表面积和孔结构,有利于提高催化剂的活性.在m(CoCl2)∶m[Co(NO3)2]=2∶5,m(Co)∶m(Pd)=2∶1,常压,150℃条件下,乙酸的生成速率达到6.13 mg·g-1Cat·h-1,选择性达到81.6%,分别比以单一Co源制备的催化剂提高了134%和16%.

石膏两步法制硫酸钾中CaCO_3及K_2SO_4结晶动力学研究

本文实验研究了石膏与氯化钾两步转化法生产硫酸钾中停留时间、进料质量分数及搅拌速率等重要操作参数对CaCO3、K2 SO4 结晶动力学的影响规律 ,得到相应的二次成核动力学方程式 。

石膏两步法生产硫酸钾新工艺的技术与经济分析

石膏两步转化法是一种生产硫酸钾的新工艺技术，本文对其基本原理与工艺流程、技术特点。

载体水热处理时间对Co-Pd/TNTs催化CH4-CO2两步梯阶转化合成乙醇和乙酸的影响

采用水热法制备了锐钛矿型TiO2纳米管,并将不同水热处理时间制备的TiO2纳米管作为载体,采用浸渍法制备了系列Co-Pd/TNTs催化剂;考察了所制备催化剂对CH4-CO2两步法梯阶转化直接合成乙醇和乙酸的催化性能,并通过XRD、NH3-TPD-MS、BET、和TEM等表征技术对催化剂的结构、组成、比表面积和孔径分布等进行了表征。结果表明,用水热处理时间为48 h的TiO2纳米管作为载体制备的Co-Pd/TNTs催化剂在CH4-CO2两步梯阶转化过程中对乙醇具有高的选择性,在常压、150℃的反应条件下,总时空收率最高为8.78 mg/(gca·t h),催化剂对乙醇的选择性高达98.9%。

细菌内同源重组法快速制备重组腺病毒

目的:探讨细菌内同源重组两步转化法快速构建重组腺病毒质粒和制备重组腺病毒的方法。方法:将腺病毒骨架质粒pAdEasy-1转化BJ5183高效感受态,制备pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183感受态,将线性化的腺病毒穿梭质粒pAdtrack-CMV转化至含pAdEasy-1的BJ5183感受态,筛选获得重组腺病毒载体pAdEazy-CMV。获得的重组腺病毒载体线性化后转染HEK293细胞,包装、扩增出重组腺病毒RAd-CMV,氯化铯梯度离心法进行纯化,采用电镜负染鉴定重组腺病毒,用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白GFP的表达并检测重组腺病毒的滴度。继而用纯化的重组腺病毒感染HeLa细胞,测定转染效率。结果:成功构建了重组腺病毒载体pAdEazy-CMV,透射电镜和绿色荧光鉴定证实病毒包装成功,并且具有感染力,病毒的滴度可达2.0×1010pfu/ml。结论:细菌内同源重组两步转化法可以快速构建重组腺病毒质粒,为后续构建携带不同目的基因的重组腺病毒奠定基础。