利用试剂盒快速检测苹果锈果类病毒的研究

为简化苹果锈果类病毒(apple skin scar viroid,ASSVd)的常规RT-PCR检测步骤,找到更为快速准确的检测方法,以感染ASSVd的田间苹果枝条为试验材料,根据基因库中ASSVd的基因序列设计合成特异性引物,选用国产试剂盒,对RT-PCR体系进行优化。结果表明,总RNA和反转录产物的用量分别为37.4～74.8ng、1.0～3.0μL,退火温度为63.8℃,可以获得良好的两步RT-PCR扩增;而总RNA用量为3.74～7.48ng、退火温度在50.1～62.6℃范围内时,一步RT-PCR的扩增效果较好。采用优化的RT-PCR检测体系对山东采集的样品进行检测,2种检测体系的检测结果完全一致。研究建立的两步和一步RT-PCR优化体系为ASSVd的批量快速检测奠定了基础。