两相分配法制备玉米根质膜及其纯度鉴定

用ＤｅｘｔｒａｎＴ５００，ＰＥＧ３３５０两相体系制备玉米根质膜．首先在高盐浓度（２２ｍｍｏｌ／ＬＮａＣｌ）下选用五种不同的聚合物浓度（５．８％、６．０％、６．２％、６．３％、６．４％，Ｗ／Ｗ），研究了玉米根质膜在两相体系中的分配情况，在此基础上进一步研究了Ｎａ－Ｃｌ浓度（２、４、５、１１、２２ｍｍｏｌ／Ｌ）对玉米根质膜的纯度及得率的影响．结果表明，制备玉米根质膜选用６．２％（Ｗ／Ｗ）聚合物浓度，７．５ｍｍｏｌ／ＬＮａＣｌ的两相体系比较合适．标志酶鉴定及低ｐＨ值磷钨酸染色电镜检测均表明获得了高纯度密实的正向型的质膜囊泡，质膜标志酶ＶＯ３－４－ＡＴＰａｓｅ的活性潜势达８８．９％．

两相分配法制备甘草根质膜及其纯度鉴定

以甘草(Glycyrrhiza uralensis F.)根为材料,利用差速离心法获取细胞微粒体,通过水溶性聚合物Dextran T-500和PEG 4000所构成的两相分配体系制备质膜.标志酶鉴定结果表明,上相中富含质膜,内膜污染较少,质膜纯度较高;下相中富含其它内膜.Western blot分析结果表明,在对应于水通道蛋白分子量大小的位置存在特异条带.实验证明,PEG-Dextran两相分配体系可获得较高纯度的甘草根密实正向型质膜囊泡.

两相分配法纯化受旱小麦绿色组织质膜的研究

通过研究氯化钠和多聚物浓度对质膜和各种内膜在PEG/Dextran两相系统中分配行为的影响,根据其影响膜在两相系统中分配系数的试验结果,应用两相分配纯化法,纯化生长正常和受旱条件下小麦绿色组织质膜,对匀浆介质稍加修改,加入5mmol/L ZnCl_2,结果在较短的时间得到了两种小麦绿色组织细胞质膜的富集组分。

两相法分离地被菊叶片质膜的研究

以地被菊(Dendranthema×grandiflorum Kitamura)叶片为材料,通过水溶性聚合物Dextran T-500和PEG 3350所构成的两相分配体系制备质膜。在一定盐浓度(5 mmol.L-1 NaCl)下选用5种不同的聚合物浓度(5.8%、6.0%、6.2%、6.4%、6.6%,W/W),研究了地被菊叶片质膜在两相体系中的分配情况,在此基础上进一步研究了不同盐浓度(2、4、5、10、20 mmol.L-1 NaCl)对地被菊叶片质膜的纯度及蛋白产率的影响。标志酶鉴定及磷钨酸染色电镜检测的结果表明,地被菊叶片选用6.2%(W/W)聚合物浓度和7 mmol.L-1 NaCl组成的两相分配体系可获得较高纯度的密实正向型质膜囊泡。

两相法分离纯化橡胶树树皮质膜

橡胶树树皮质膜H^+-ATPase在橡胶树产排胶过程中扮演着重要角色,制备高纯度及高活性的质膜是研究质膜H^+-ATPase特性和功能的必要条件。该研究以一年生巴西橡胶树(Hevea brasiliensis)树皮为材料,利用差速离心法获得粗膜微粒体,通过两相分配法分离纯化质膜,并研究两相体系中不同浓度聚合物(5.9%、6.1%、6.3%、6.5%、6.7%,W/W)和KCl(2、5、8、11、14 mmol·L^(-1))对质膜蛋白得率和纯化效率的影响。通过Bradford法对质膜蛋白得率进行检测,同时采用酶活性检测法对质膜纯度进行检测,分析结果表明选用6.4%(W/W)聚合物浓度和5mmol·L^(-1)KCl组成的两相体系可获得较高纯度和得率的橡胶树树皮质膜。通过电镜观察法在形态学上对质膜纯度进一步评价,利用铅铀能侵染全部膜组分使其染色,而磷钨酸只能专一性地侵染质膜并使其染色这一特性,分别使用铅铀和磷钨酸对切片进行染色,并通过透射电镜对切片染色程度进行直接观察,结果表明提取的粗膜微粒体中质膜组分较少,存在大量的细胞器膜污染,而纯化后的质膜膜组分较单一,其他膜组分污染较少,而且质膜大小较均一,可以用于进行后续橡胶树树皮质膜H^+-ATPase特性和功能的研究。

胡杨质膜的纯化及其H^+-ATPase活性的研究

用DextranT 5 0 0 ,PEG 335 0两相分配法分离并纯化了悬浮培养的胡杨细胞质膜 .不同聚合物浓度(5 5 %、 5 7%、 5 9%、 6 1%、 6 3%、 6 5 % )和KCl浓度 (0、 5、 10、 15mmol/L)对分离效果影响的研究结果表明 ,采用聚合物浓度为 5 9%和无盐存在的两相分配体系可获得纯度较高的胡杨细胞质膜 .纯化的质膜H+ ATPase的活力提高 8倍 ,且酶定向程度较高 ,这为进一步研究胡杨细胞质膜特性及获得高纯度H+

苹果根细胞质膜的提取和纯化

试验利用差速离心法获取苹果根细胞微粒体,两相分配法分离质膜和其它细胞内膜,从而获得纯化的正向型质膜囊泡。结果表明,研磨缓冲液成分是影响微粒体分离及其在两相体系中分配的关键。两相分配后的标志酶活性检测表明,上相中富含质膜,内膜污染较少,质膜纯度较高;下相中富含其它内膜。证明PEG—Dextron两相分配法也适用于苹果根细胞质膜的提取和纯化。