两色金鸡菊黄酮提取物对高糖高脂诱导的大鼠肾小球系膜细胞纤维化的影响及相关机制研究

目的:探讨两色金鸡菊黄酮取物对高糖高脂诱导大鼠肾小球系膜纤维化的影响及其作用机制。方法:通过高糖高脂诱导大鼠肾小球系膜细胞建立体外糖尿病肾病细胞模型,使用不同浓度的两色金鸡菊黄酮提取物进行干预,采用CCK-8细胞增殖实验结合细胞形态学观察确定黄酮提取物的使用浓度后将细胞共分为5组,分别为正常对照组、模型组及两色金鸡菊黄酮提取物25、50、100μg/mL组,采用Western blot法检测纤维化因子纤维连接蛋白(FN)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,并通过检测转化生长因子-β_1(TGF-β_1)、信号分子Smad2、磷酸化Smad2(p-Smad2)、Smad4、NADPH氧化酶4(Nox4)蛋白研究两色金鸡菊黄酮提取物的抗纤维化机制。结果:两色金鸡菊黄酮提取物能显著抑制高糖高脂诱导大鼠肾小球系膜细胞中纤维化因子的表达。结论:两色金鸡菊黄酮提取物能抑制高糖高脂诱导的大鼠肾小球系膜的纤维化,其作用机制可能与调节TGF-β_1/Smads/Nox4信号通路有关。

两色金鸡菊乙酸乙酯提取物对STZ诱导的糖尿病SD大鼠的影响

目的观察两色金鸡菊乙酸乙酯提取物对糖尿病大鼠糖脂代谢及肝脏、肾脏功能的影响。方法高糖高脂喂养联合腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)建立2型糖尿病SD大鼠模型,成模大鼠随机分6组(正常组、模型组、两色金鸡菊乙酸乙酯提取物高、中、低3个剂量组0.15、0.3、0.6 g·kg-1、阳性药二甲双胍0.16 g·kg-1组)。正常组和模型组灌胃生理盐水,其余组每天灌胃给药两色金鸡菊提取物,每周测体重及随机血糖,给药4周后处死,收集大鼠血清,检测血脂四项、肝功肾功指标、血清胰岛素及糖化血红蛋白水平。结果两色金鸡菊乙酸乙酯提取物可有效降低糖尿病大鼠的随机血糖和糖化血红蛋白及血清甘油三酯、低密度脂蛋白、血清总蛋白、血肌酐及血尿酸水平,同时能升高糖尿病大鼠血清白蛋白的含量。结论两色金鸡菊乙酸乙酯提取物能降低糖尿病SD大鼠的血糖血脂,保护其肝肾功能。

新疆两色金鸡菊提取物抗脂质过氧化及对糖尿病小鼠的保护作用

目的比较新疆两色金鸡菊乙酸乙酯和正丁醇提取物体外抗脂质过氧化的能力,并考察正丁醇提取物对链脲佐菌素(STZ)诱导的2型糖尿病小鼠体重、体内生化指标和主要脏器的影响。方法响应面优化提取两色金鸡菊总黄酮部位,提取液经石油醚萃取后,剩余水相分别用乙酸乙酯和正丁醇萃取,获得乙酸乙酯(EAE)和正丁醇提取物(BE)。采用硫代巴比妥酸法测定提取物抗脂质过氧化能力;STZ诱导的糖尿病小鼠灌胃给予正丁醇提取物(0.2、0.4、0.8 g·kg^(-1))连续4周,监测小鼠体重变化、血浆生化指标以及肝脏、胰腺、肾脏的脏器系数和组织病理切片考察对机体的作用。结果在亚油酸反应体系下,测得EAE和BE抗脂质过氧化能力(SC50)分别为:(443.96±11.24)mg·L^(-1)和(840.29±16.38)mg·L^(-1);采用大鼠肝匀浆体系测得结果为:(23.59±3.67)mg·L^(-1)和(60.37±4.27)mg·L^(-1)。正丁醇提取物能明显改善糖尿病小鼠体重下降的趋势,增加脏器系数;同时能明显改善体内多项生化指标;经HE染色病理切片检查,正丁醇提取物各剂量组均对受损的肝脏、胰腺和肾脏具有一定的修复和改善作用。结论新疆两色金鸡菊乙酸乙酯和正丁醇提取物具有一定的抗脂质过氧化的能力,正丁醇提取物对糖尿病小鼠受损器官有一定的保护作用。

电针联合两色金鸡菊提取物对糖尿病肾病大鼠肾脏Vimentin、α-SMA、TGF-β1及p-smad2表达的影响

目的观察电针联合两色金鸡菊提取物对糖尿病大鼠肾脏波形蛋白(Vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子-β1(TGF-β1)及p-smad2表达的影响,探讨其作用机制。方法将36只SD大鼠随机分为正常组、模型组、电针组、两色金鸡菊组、电针+两色金鸡菊组和二甲双胍组,每组6只。采用高糖高脂喂养联合腹腔注射链脲佐菌素建立2型糖尿病模型。正常组、模型组不进行干预;电针组针刺大鼠双侧"肾俞""脾俞",连接电针,留针30 min;两色金鸡菊组予两色金鸡菊乙酸乙酯提取物(300 mg/kg)灌胃;电针+两色金鸡菊组予电针联合两色金鸡菊乙酸乙酯提取物灌胃;二甲双胍组予二甲双胍(200mg/kg)药液灌胃。每日1次,治疗4周。HE染色观察肾组织形态学及纤维化程度,Western blot检测肾组织Vimentin、α-SMA、TGF-β1及p-smad2蛋白表达。结果 HE染色结果显示,电针组、两色金鸡菊组、电针+两色金鸡菊组和二甲双胍组均可缓解模型大鼠肾小管扩张,减轻肾小球皱缩现象,改善炎性细胞浸润,减少基底膜增生和融合,且以电针+两色金鸡菊组改善更明显;Westernblot检测结果显示,电针和两色金鸡菊提取物均可降低模型大鼠肾组织Vimentin、α-SMA、TGF-β1及p-smad2蛋白表达,且以两者联合效果最佳。结论电针联合两色金鸡菊提取物可明显改善糖尿病大鼠肾脏纤维化,其作用机制可能与抑制TGF-β1/Smad2信号通路有关。

新疆两色金鸡菊提取物体外清除自由基活性研究

以乙醇为溶剂,采用超声波辅助提取新疆两色金鸡菊.提取物经不同极性溶剂进行萃取,获得不同极性溶剂提取物.同时考察这些提取物在体外清除DPPH、ABTS+、羟自由基(*OH)和超氧自由基(*O2-)的能力.结果显示,新疆两色金鸡菊氯仿提取物、乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物清除DPPH的能力(SC50)依次是(7.6×10~3±4.02)μg/mL、(1.75×10~2±3.64)μg/mL、(1.34×10~2±2.75)μg/mL和(2.28×10~2±4.64)μg/mL;清除ABTS+自由基的能力(SC50)依次是(4.53×10~3±6.37)μg/mL、(1.26×10~2±2.97)μg/mL、(90.72±3.16)μg/mL和(1.28×10~2±5.78)μg/mL;清除*OH自由基的能力(SC50)依次是(3.86×10~3±5.79)μg/mL、(14.49±0.576)μg/mL、(13.80±0.672)μg/mL和(22.41±1.13)μg/mL.在不同自由基清除体系中,与阳性对照维生素C和叔丁基对羟基茴香醚相比,新疆两色金鸡菊不同极性溶剂提取物表现出强弱不同的自由基清除能力.

两色金鸡菊提取物对运动小鼠抗疲劳和耐缺氧作用的研究

为研究两色金鸡菊提取物对小鼠的抗疲劳和耐缺氧作用,选择48只小鼠随机分为4组,即对照组,低、中、高剂量两色金鸡菊提取物组(每日5、10、20g/kg体重)。各组小鼠分别灌胃(每日0.20mL/10g)给予不同剂量的两色金鸡菊提取物,连续灌胃21d后,观察不同浓度的两色金鸡菊提取物对小鼠负重游泳时间及运动后小鼠血清尿素氮、血乳酸、肝糖原含量和小鼠常压耐缺氧存活时间、断头后呼吸维持时间的影响。结果表明,两色金鸡菊提取物能延长小鼠负重游泳时间,降低运动小鼠血清尿素氮、血乳酸含量,增加运动小鼠肝糖原含量,明显延长小鼠常压耐缺氧存活时间及断头后呼吸维持时间。结果提示,一定剂量的两色金鸡菊提取物具有抗疲劳作用和提高耐缺氧能力作用。

两色金鸡菊对糖尿病大鼠肾脏纤维化RhoA/ROCK/Nox4信号通路的影响

目的观察两色金鸡菊对糖尿病大鼠肾功能损伤及肾脏纤维化的影响,探讨其作用机制。方法 SD大鼠以高脂高糖饲料联合小剂量链脲佐菌素诱导建立糖尿病大鼠模型。将60只大鼠随机分为正常组、模型组、阳性药组和两色金鸡菊高、中、低剂量组,每组10只。各给药组给予相应剂量药物灌胃4周。Masson染色观察大鼠肾脏纤维物质沉积的变化;放射免疫法检测大鼠早期肾损伤各指标的水平;免疫组化检测大鼠肾组织RhoA、p-MYPT、Nox4、平滑肌肌动蛋白-α(α-SMA)的蛋白表达。结果与正常组比较,模型组大鼠肾脏纤维物质沉积、尿微量白蛋白、α1-微球蛋白(α1-MG)、β2-巨球蛋白(β2-MG)水平显著升高,RhoA、p-MYPT、Nox4、α-SMA蛋白表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,两色金鸡菊高、中、低剂量组均不同程度地改善大鼠肾脏纤维物质的沉积,抑制尿液微量白蛋白、α1-MG、β2-MG表达水平,肾组织RhoA、p-MYPT、Nox4、α-SMA蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论两色金鸡菊乙酸乙酯提取物可能通过RhoA/ROCK/Nox4信号通路抑制模型大鼠肾组织α-SMA的表达、肾脏纤维物质沉积,进而减轻模型大鼠早期肾脏损伤。

两色金鸡菊HPLC特征图谱的建立及多指标成分含量测定

目的:采用中药特征图谱技术对新疆地区11个不同产地两色金鸡菊进行分析并建立同时测定绿原酸、黄诺马苷、栎草亭-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、马里苷、黄酮奥卡宁5种化学成分含量的方法。方法:采用反相高效液相色谱法,Inertsil WondaSil C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈(A)-0.5%甲酸溶液(B),梯度洗脱;柱温:30℃;检测波长:280 nm;流速:1.0 mL/min;进样量:20μL。结果:建立了两色金鸡菊乙醇提取物HPLC特征图谱,方法学考察结果符合相关要求,标定了13个共有峰;11批样品中有2批样品相似度<0.90,分别来自喀什乌恰县和昌吉州玛纳斯县,其余9批样品均>0.92;经对比确定5个化学成分(绿原酸、黄诺马苷、栎草亭-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、马里苷、黄酮奥卡宁),并确定其含量。结论:建立的两色金鸡菊特征图谱及其中5种化学成分含量测定方法稳定、可靠,精密度高,重复性好,可为其质量控制研究提供依据。

两色金鸡菊提取物对大鼠肾小球系膜细胞增殖及纤维化因子表达的影响

目的:本研究通过高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞建立糖尿病肾病的体外模型,观察两色金鸡菊乙酸乙酯提取物(ethyl acetate extract of Coreopsis tinctoria,AC)对模型中细胞增殖及纤维化因子表达的影响。方法:采用AC对高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞进行干预,将细胞分为正常组,模组组,AC不同质量浓度(25,50,100,150 mg·L^(-1))组。采用噻唑蓝(MTT)比色法,细胞增殖与活性检测(CCK8)法检测AC不同质量浓度对高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖的抑制作用;采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot)进一步观察AC不同质量浓度对肾脏纤维化蛋白转化生长因子-β_1(TGF-β_1),胶原蛋白Ⅳ(CollagenⅣ),纤维连接蛋白(FN)表达的影响。结果:AC 50,100,150 mg·L^(-1)组均能抑制高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞的增殖(P<0.01);AC 25,100,150 mg·L^(-1)质量浓度组显著降低细胞中TGF-β_1的mRNA与蛋白表达水平(P<0.01);AC 100,150 mg·L^(-1)质量浓度组显著抑制细胞中CollagenⅣmRNA与蛋白的表达水平(P<0.01);AC 50,100,150 mg·L^(-1)质量浓度组显著抑制细胞中FN mRNA与蛋白的表达水平(P<0.01)。结论:两色金鸡菊乙酸乙酯提取物可能通过抑制大鼠肾小球系膜细胞增殖及纤维化因子表达发挥其对糖尿病肾病肾脏保护作用。

新疆两色金鸡菊抗脂质过氧化及清除亚硝酸盐和阻断亚硝胺形成的能力

目的考察新疆两色金鸡菊的乙酸乙酯和正丁醇提取物抗脂质过氧化及清除亚硝酸盐和阻断亚硝胺形成的能力。方法采用响应面优化工艺条件提取新疆两色金鸡菊。提取物经石油醚萃取后,剩余水相分别用乙酸乙酯和正丁醇萃取,获得乙酸乙酯提取物(EAE)和正丁醇提取物(BE)。采用硫代巴比妥酸法测定提取物的抗脂质过氧化能力;采用盐酸萘乙二胺法测定提取物清除亚硝酸盐和抑制亚硝胺形成的能力。结果在亚油酸反应体系下,测得EAE和BE的抗脂质过氧化能力(SC_(50))分别为443.96±11.24、840.29±16.38μg·m L^(-1)。EAE的抗脂质过氧化能力与阳性对照维生素C之间无显著性差异;但显著弱于阳性对照叔丁基对羟基茴香醚。采用大鼠肝细胞匀浆反应体系测得的结果分别为23.59±3.67、60.37±4.27μg·m L^(-1)。EAE的抗脂质过氧化能力强于维生素C;但显著弱于叔丁基对羟基茴香醚。在清除亚硝酸盐和阻断亚硝胺形成的能力中,EAE和BE清除亚硝酸盐的能力(SC_(50))分别为122.10±1.03、118.23±1.30μg·m L^(-1);阻断亚硝胺形成的能力分别为2.3629±0.0113、2.1828±0.0107 mg·m L^(-1)。两种提取物清除亚硝酸盐和阻断亚胺形成的能力与叔丁基对羟基茴香醚之间无显著性差异,但均弱于维生素C。结论新疆两色金鸡菊的EAE具有很强的抗脂质过氧化能力,同时具有一定清除亚硝酸盐和阻断亚硝胺形成的能力。