两步酶法在小鼠睾丸支持细胞分离与培养过程中的研究

目的:探讨两步酶法分离小鼠睾丸支持细胞以及在体外培养、纯化、鉴定过程中的优越性。方法:选取7~8d雄性昆明小鼠,用胶原酶Ⅳ及胰蛋白酶两步酶法分离小鼠睾丸组织获得支持细胞,利用细胞差速贴壁特性纯化支持细胞,利用倒置显微镜、PI染色、特异性抗体标记的方法从多个维度鉴定小鼠睾丸支持细胞。结果:培养72 h后支持细胞呈片状平铺于培养皿底层,相互接触,连接成片。用波形蛋白特异性鉴定证实本实验分离所获得的小鼠睾丸支持细胞。经过PI染色提示这些支持细胞为具有活性的支持细胞。结论:本研究提示两部酶法是一种简便且高效的分离小鼠睾丸支持细胞的有效方法,值得推广。