SARS冠状病毒S蛋白部分序列2的克隆与表达

目的 构建SARS冠状病毒棘突蛋白部分序列 2 (S2 )的原核表达质粒 ,分析其在大肠杆菌中的表达状况。方法 采用逆转录聚合酶链式反应技术从SARS冠状病毒基因组中扩增出编码S蛋白的第 2 170到 2 814位碱基的基因片段 ,克隆至 pMD18-T载体 ,PCR筛选阳性克隆并测序。用限制性内切酶消化后 ,目的片段亚克隆至表达载体pGEX - 4T - 2 ,转化大肠杆菌JM10 9,PCR和双酶切鉴定转化菌落。将阳性菌落经IPTG诱导 ,SDS -PAGE和免疫印迹分析靶蛋白的表达。结果 RT -PCR扩增出S2特异片段 ,经测序与GenBank比对存在 1处碱基突变。S2基因片段亚克隆至表达载体 pGEX - 4T - 2构建成重组表达质粒 ,并在JM 10 9中表达了S2融合蛋白。结论 成功构建了SARS冠状病毒S2的重组表达质粒 ,并在大肠杆菌中表达了S2融合蛋白。

SARS相关冠状病毒S2基因的克隆及其DNA疫苗的免疫效果

目的 :构建抗原基因为 SARS相关冠状病毒 (severe acute respiratory syndrome coronavirus,SARS- Co V) S2基因的DNA疫苗 ,将其接种小鼠后观察病毒特异性抗体产生情况。方法 :将合成的 S2基因片段克隆至真核表达载体 ,随之将质粒进行小鼠肌内接种免疫 ,定期检测血清中抗 SARS- Co V的病毒特异性抗体水平。结果 :疫苗接种后第 2周就能检测出病毒特异性抗体 ,随着时间的延续 ,抗体水平逐步升高 ,而空质粒对照组未检测出明显的特异性抗体。 结论 :以 S2为抗原基因的 DNA疫苗能诱导

SARS病毒功能受体ACE2和抗体80R的研究

严重急性呼吸综合征(SARS)是一种急性呼吸道传染病,一种新的冠状病毒被鉴定为该病的病原体。血管紧张素转换酶(ACE2)是一种最近才被克隆出的金属蛋白酶分子,是SARS-CoV进入细胞的功能受体之一。ACE2是一种与ACE相似的酶,主要在人类的肺、心、肾和胃肠道等组织器官的上皮细胞和血管内皮细胞表达。可能是一个在SARS发病中起关键作用的靶点。该发现可能有助于建立SARS感染动物模型和寻找动物宿主,阐明SARS的发病机制、研制开发防治措施和治疗性药物。

新型冠状病毒肺炎出院病例121例分析

目的了解长沙地区新型冠状病毒肺炎(COVID⁃19)治愈出院患者的临床特点及诊治情况。方法收集长沙市第一医院北院从2020年1月30日至2月20日治愈出院的121例COVID⁃19患者的临床数据进行分析。结果COVID⁃19患者存在高血压,心脏、肾脏基础病更容易发展为重型/危重型,在重型/危重型患者中性粒细胞计数/淋巴细胞计数(NLR)、超敏C反应蛋白(CRP)明显高于轻型/普通型,而嗜酸性粒细胞计数在前者中明显低于后者,且差异均具有统计学意义(P<0.05),COVID⁃19重型/危重型患者在治疗后,CRP及NLR明显低于治疗前,嗜酸性粒细胞计数明显高于治疗前,且差异均有统计学意义(P<0.05),COVID⁃19轻型/普通型患者使用两药联合抗病毒治疗效果优于单药治疗,且差异具有统计学意义(P<0.05)。结论COVID⁃19患者NLR及CRP上升,嗜酸性粒细胞下降时需要警惕转重型/危重型。

114例疑似COVID-19患者呼吸道病毒感染分析

目的分析114例COVID-19疑似患者呼吸道病毒感染情况,探讨多种病毒同时检测在疫情防控中的价值。方法利用Real Time RT-PCR技术检测发热门诊COVID-19疑似患者SARS-CoV-2核酸,利用基因芯片恒温扩增技术检测SARS-CoV-2核酸阴性患者其他常见的18种呼吸道病毒。结果114例COVID-19疑似患者SARS-CoV-2核酸均为阴性,有21例感染了非其它呼吸道病毒,感染率达18.42%,21例患者中共检测出10种呼吸道病毒,包括冠状病毒NL63/229型、呼吸道合胞病毒、柯萨奇病毒A16型、乙型流感病毒、人副流感病毒1型、人副流感病毒3型、人偏肺病毒、甲型流感病毒、甲型流感病毒季节性H3亚型、肠道病毒/鼻病毒。其中乙型流感病毒感染患者最多,有6例,呼吸道合胞病毒有5例。有3例患者同时感染2种病毒:呼吸道合胞病毒与柯萨奇病毒A16型混合感染、冠状病毒NL63/229型与人副流感病毒1型混合感染、甲型流感病毒与甲型流感病毒季节性H3亚型混合感染。结论在应对本次SARS-CoV-2疫情中,针对COVID-19疑似患者中,要注意鉴别SARS-CoV-2与其它呼吸道病毒,及时有效地排除疑似病例。

耳鼻喉科门诊应对2019新型冠状病毒应急管理

2019新型冠状病毒(SARS-CoV-2)感染的肺炎非常严峻,疫情防控和救治工作至关重要。本文介绍了耳鼻喉科门诊对SARS-CoV-2的应急管理工作,重点是医务人员对SARS-CoV-2的防控培训,工作流程安排以及环境消毒制度,以便保证耳鼻喉科门诊医务人员及就诊患者的安全。

严重急性呼吸道综合征冠状病毒2全长cDNA的构建新途径

目的构建严重急性呼吸道综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus-2,SARS-CoV-2)全长cDNA,为SARS-CoV-2基因功能、药物筛选和安全减毒灭活疫苗株的研究提供重要工具,也为大基因组RNA病毒cDNA的构建提供新的方法。方法结合In-Fusion、Gibson Assembly以及Recombineering技术对SARS-CoV-2基因组进行全长cDNA克隆的从头合成。首先将SARS-CoV-2全长基因组分17个片段进行扩增,利用In-Fusion试剂盒将这些小片段连接、克隆,以获得插入序列约5000 bp的6个pUC19重组质粒;然后利用Gibson Assembly试剂盒将30000 bp SARS-CoV-2全长基因组分3次逐步连接至pBR322载体,每次连接10000 bp,得到含30000 bp SARSCoV-2全长cDNA的重组质粒;最后利用Recombineering技术修复逐步连接过程中通过NotⅠ位点引入的两处多余GC碱基。结果构建了SARS-CoV-2 WIV04株的全长cDNA,插入基因组的重组质粒经酶切和测序鉴定正确。为区别于野生型毒株SARS-CoV-2 WIV04,分别在全长cDNA的8791 nt和12655 nt进行了同义突变,引入了两处BglⅠ酶切位点,以此作为遗传标记。结论成功构建了SARS-CoV-2全长cDNA,为SARS-CoV-2基础研究和应用研究提供了技术平台。

新型冠状病毒奥密克戎变异株感染致急性黄斑神经视网膜病变的临床特征

目的:观察奥密克戎感染致急性黄斑神经视网膜病变(AMN)的临床特征。方法:回顾性研究。纳入2022-12/2023-01在成都中医药大学附属医院确诊为AMN的患者9例18眼,均行频域光相干断层扫描(SD-OCT)检查、荧光素眼底血管造影(FFA)检查、眼底彩照、自发荧光(AF)、红外成像(IR)、光学相干断层扫描血管成像(OCTA)、炫彩检查等。随访1~3mo,观察预后情况。结果:奥密克戎感染致AMN的首发症状为眼部突发黄斑中心、旁中心暗点,伴或不伴视力下降、视物变形,且暗点症状可持续存在至少3mo。其影像特征性表现为SD-OCT检查可见视网膜外层结构中断、散在高反射病灶、视网膜外层萎缩,严重者内核层(INL)可见高反射病灶,或伴视网膜色素上皮层(RPE)下微囊腔;OCTA检查可见黄斑区深层毛细血管丛(DCP)血流密度降低;IR检查可见病灶区域表现为弱反射;眼底彩照显示局限性棕褐色楔形病灶。结论:奥密克戎感染致AMN多见于青年女性,眼底病变主要为视网膜外层结构损伤,眼底病变程度可能与感染后全身炎症反应、眼部微循环障碍有关,多模式眼底影像学检查及奥密克戎感染病史有助于该病的诊断。

重组人干扰素α-2b喷雾剂预防SARS等呼吸道病毒感染的人群试验研究

目的评估重组人干扰素α2b喷雾剂(远策素喷雾剂)预防SARS等常见呼吸道病毒感染的效果。方法研究对象共14391人,用药剂量为90万IU/次,每日2次,连用5d,未次用药后15d取血,或用药前和用药3周后采取双份血清。采用随机、对照方法检测血清抗SARSCoVIgG抗体;采用双盲、随机、安慰剂对照方法测定血清抗常见呼吸道病毒(B型流感病毒、副流感病毒1～3型,呼吸道合胞病毒及腺病毒3、7型)的血清IgM抗体。结果两次实验中,干扰素组血清SARS病毒IgG抗体阳性率均较试验组高,但差异无统计学意义(P>0.05)。但用药组应用干扰素后副流感病毒1～3型,B型流感病毒,腺病毒3、7型和呼吸道合胞病毒IgM抗体阳性率(依次为6.45%、4.52%、4.30%和17.20%)均低于对照组(依次为19.40%、13.60%、7.12%和25.62%)。其中副流感病毒、B型流感病毒、腺病毒3种病毒IgM抗体阳性率差异均有统计学意义(P<0.01)。结论应用远策素喷雾剂鼻和咽部喷雾能不同程度地降低用药人群常见呼吸道病毒的感染率。

不同的呼吸道取样方法在COVID-19核酸检测中的应用

由严重急性呼吸道综合征冠状病毒2型(SARS-CoV-2)引起的新型冠状病毒肺炎(COVID-19)在全球爆发。病毒的核酸检测作为诊断及防控的重要手段,呼吸道取样作为检测的最重要一环,不同的采样方法各有利弊,目前各组织机构没有对取样的方法达成共识,本文就各种取样方法进行综述,为防治工作提供依据。

抗击新型冠状病毒肺炎的医务人员身心体验状况调查

目的研究在新型冠状病毒肺炎(新冠肺炎)防控中医务人员的身心体验,为保障医疗人力资源提供参考。方法采用质性研究中的现象学研究法,对2020年1月28日至2020年1月31日来自深圳市第三人民医院及西安交通大学第一、二附属医院和西安市第四军医大学唐都医院一线接触疫情工作的16名医务人员进行深入访谈,了解医务人员对新冠肺炎防控中的身心感受,并对访谈资料进行归纳与分析。结果医务人员在新冠肺炎防控中的身心感受主要提取为五项主题:①震惊及恐惧心理;②知识缺乏,需要正确认知新冠肺炎;③医务人员需要正确面对,做好自身防护;④保家卫国,刻不容缓;⑤人民群众需要有效的防护及传染病知识宣传与重视度教育。结论医务人员在新冠肺炎的防控中身心感受复杂多样,需要各级领导主管部门高度重视,在保障防护用品及设施的供给外,确保足够的医疗人力资源梯队,以应对国际关注的突发公共卫生事件(PHEIC)。

新型冠状病毒肺炎疫情期间胸外科单中心临床策略

目的总结胸外科防治严重急性呼吸道综合征冠状病毒⁃2(SARS⁃CoV⁃2)感染的临床经验,提供可行的临床策略。方法回顾性研究2020年1月10日至2月10日我科疑似和确诊SARS⁃CoV⁃2病例及其致医护人员感染SARS⁃CoV⁃2的临床资料。结果确诊SARS⁃CoV⁃2感染9例(其中术后患者3例、医护人员6例),急诊手术术前疑似病例1例。根据病情轻重分别予以抗病毒、抗感染或并予以激素及免疫球蛋白等对症治疗;第1例术后患者因呼吸衰竭死亡,余9例恢复良好。结论SARS⁃CoV⁃2疫情期间应推迟择期或限期手术,严格把握急诊手术指征,急诊手术应按三级防护处理。胸外科术后呼吸功能训练易产生飞沫及气溶胶,若有确诊病例易导致病毒在病区传播,应积极排查SARS⁃CoV⁃2感染病例。早发现、早报告、早隔离、早治疗,胸外科SARS⁃CoV⁃2感染病例预后良好。

新型冠状病毒肺炎764例

目的探讨新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的临床特征及治疗转归。方法收集2020年1月1日至2月20日江汉大学附属医院收治的COVID-19患者的临床资料,观察不同类型COVID-19患者临床表现、实验室检查、影像学检查、治疗及临床转归。结果共纳入764例患者,平均年龄(59.33±15.15)岁,365例为男性。最常见的症状是发热、咳嗽、疲乏和呼吸困难。256例患者合并有基础疾病。567例好转出院,131例转院,52例死亡。与普通型比较,重型及危重型组白细胞计数、中性粒细胞计数、超敏C反应蛋白、降钙素原、肌酐、谷丙转氨酶、谷草转氨酶等指标均明显升高,淋巴细胞计数明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论COVID-19以发热、咳嗽、呼吸困难、疲乏为主要症状;高龄、多种合并症应警惕重症。

新型冠状病毒肺炎研究进展

本文旨在对目前新型冠状病毒肺炎(COVID⁃19)的病原学特征、流行病学、临床特征、药物和疫苗研究进展以及疫情发展预测研究等进行简要论述,为控制疫情提供参考依据。

新型冠状病毒肺炎流行期间儿童心肌炎患者管理建议

2019年12月爆发的新型冠状病毒肺炎疫情,儿童感染病例逐渐增多。流行病学显示所有人群普遍易感,且合并有基础疾病特别是心血管疾病的患者是重症、危重症的高危人群。心肌炎儿童由于既往存在的心肌病变,如心肌纤维化等,合并新型冠状病毒肺炎会为诊疗带来严峻挑战。结合儿童新型冠状病毒肺炎的临床特点及儿童心肌炎的诊治要点,特提出心肌炎儿童新型冠状病毒肺炎的临床管理建议。

新型冠状病毒肺炎及其CT影像表现的研究概述

2019年12月底一种由严重急性呼吸综合征冠状病毒-2 (SARS-CoV-2)感染引起的新型冠状病毒肺炎在全球迅速蔓延播散,由于该病毒不确定性因素多,使得疫情预防和治疗困难。本文通过对新型冠状病毒肺炎的病因学、流行病学、临床表现、胸部CT的影像特征及相关鉴别诊断等方面的国内外研究进行整理、归纳和总结,以加深对新型冠状病毒肺炎及胸部CT在疫情防控中重要作用的认识及了解。

江苏省儿童新型冠状病毒感染诊疗方案专家建议(试行第一版)

2019年12月以来,湖北省武汉市陆续发现了多例2019新型冠状病毒(2019 novel coronavirus,2019-nCoV)[即严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronarivus 2,SARSCoV-2)]感染的肺炎患者,随着疫情的蔓延,我国其他地区也相继发现了此类病例。该病作为急性呼吸道传染病已纳入《中华人民共和国传染病防治法》规定的乙类传染病,按甲类传染病管理。随着疫情进入高峰阶段和病原学检测工作的开展,儿童感染报告病例逐渐增多,且出现有新生儿感染病例的报道。

眼科医生和研究人员如何理解和应对新型冠状病毒肺炎的流行

在2019年末发生于中国武汉的由2019新型冠状病毒(2019-CoV)感染引起的新型冠状病毒性肺炎引起了中国政府和国际社会的极大关注。国际病毒分类委员会将该病毒命名为严重急性呼吸道综合征冠状病毒2型(SARS-CoV-2),WHO将其引起的肺炎命名为2019年冠状病毒疾病(COVID-19)。COVID-19是近20年来继严重急性呼吸系统综合征(SARS)和中东呼吸综合征(MERS)之后在人类又一次出现的跨物种由冠状病毒引起的严重急性呼吸道感染性传染病。目前该疾病以武汉为中心以极快的速度向中国大陆各地及港澳台发生传播,并波及二十多个国家。鉴于在SARS流行期间在医院环境下1/5的感染者为医务人员和这次COVID-19流行期间医务人员的感染概率较高问题,需要眼科医生正确且快速地了解和认识该病的背景知识,并理性理解和认识采取某些预防措施的必要性和重要性。由于工作的专业领域的差异,虽然大多数眼科医生并不工作在疫情的第一线,但是多种原因(如感染患者会诊或眼科急诊)会导致眼科医护人员暴露在高危传播环境下,并且其风险正随着感染患者数量的剧增在逐渐增加,特别是当处理看似健康良好的眼科患者时,眼科医护人员的警惕性往往会大大降低。为了更好地保护患者、家庭和医护人员自身,针对2019-CoV的主要传播方式,建议采用标准的防护措施之外,仍需遵循严格的接触防护措施和飞沫防护措施,包括:(1)在靠近病患近距离工作时应配戴口罩(N95口罩);(2)在接诊患者前后务必完成手卫生;(3)当进入患者房间并接触患者时配戴无菌手套;(4)当预期接触患者的周遭物品和环境表面,患者存在大小便失禁或腹泻,或患者有手术性或其他性质创口并存在渗出液时应穿隔离服;(5)清洁和消毒各种眼科设备并正确处理检查患者后的医疗垃圾,以阻断传播给后续接受检查的患者;(6)考虑到病毒通过眼表传播的可能性,接触患者前应配戴护目镜和覆盖面部正面及侧面的一次性防护面罩;(7)对就诊的普通患者如发现有结膜炎和/或同时有呼吸道症状时要及时做COVID-19的相关排查;(8)在禁止将感染患者作为角膜移植潜在供体的同时应将筛选2019-CoV暂时性列入暴发期间眼库的医学标准;(9)为了科学研究、诊断和其他特殊需要,对收集的标本要严格遵循生物危险品的包装、寄送和处理规则。

重组人干扰素α-2b鼻腔喷雾剂预防治疗恒河猴感染SARS-CoV的试验研究

目的评价重组人干扰素α-2b鼻腔喷雾剂对恒河猴感染SARS-CoV的预防治疗作用。方法采用鼻腔喷雾法(剂量为60万单位/鼻孔)研究了重组人干扰素α-2b鼻腔喷雾剂对感染SARS-CoV的恒河猴预防治疗效果。结果试验组(5只)和对照组(5只)相同时间检测的咽拭子等标本中,Real-time PCR检测和病毒分离均未检出病毒。攻毒后病毒导致机体产生的中和抗体和IgG抗体的反应也较对照组弱。血液学指标检测结果表明试验组动物攻毒后各项指标较试验前比较没有显著性改变;病理结果显示试验组2只恒河猴肺组织形态基本正常,其余3只猴有肺间质性炎,表现肺间隔增厚、单核样细胞为主的炎细胞浸润,其中1只增厚的肺间隔有局灶相互融合,这3只猴肺部病变与对照组的病变表现相似,且病变累及范围较对照组小;其他各受检脏器均未见明显异常。结论重组人干扰素α-2b鼻腔喷雾剂可以有效阻断或减弱SARS-CoV对恒河猴的感染。

新型冠状病毒肺炎的预防和药物治疗进展

新型冠状病毒肺炎(Coronavirus disease 2019,COVID-19)是由严重急性呼吸道综合征冠状病毒2(severe acute respiratory symptom coronavirus 2,SARS-CoV-2)引起的急性呼吸道传染病,是近百年来人类遭遇的影响范围最广的全球性大流行病。预防COVID-19的3种措施分别为保持社交距离、佩戴口罩和疫苗接种。目前,SARSCoV-2已经变异到第5代的Omicron变异株,随着SARS-CoV-2的变异,传染性变强,毒力变弱,无症状和轻症居多,病死率下降,COVID-19正在流感化。随着口服抗SARS-CoV-2药的研发和上市,加上新冠疫苗的全面接种,全球的COVID-19疫情控制指日可待。