应用超高分辨力小动物超声影像系统三维重建技术测量严重联合免疫缺陷小鼠卵巢体积

目的探讨超高分辨力小动物超声影像系统三维成像技术测量严重联合免疫缺陷(SCID)小鼠卵巢体积的方法及应用价值。方法选用11只C.B17/SCID纯系雌性小鼠,应用超高分辨力小动物专用超声影像系统及45 MHz探头,以三维成像体积测量技术测量SCID小鼠卵巢的体积,将所得卵巢体积与二维成像进行比较和相关分析。结果应用超高分辨力小动物超声影像系统获得了清晰的SCID小鼠卵巢的二维平面及三维立体图像。二维超声与三维超声测量的SCID小鼠卵巢体积分别为(5.26±0.51)mm3和(5.47±0.58)mm3(P>0.05),二者呈高度正相关(r=0.84,P<0.05)。结论超高分辨力小动物三维超声成像体积测量技术无创,操作简便,能够精确测量小鼠卵巢体积,可作为在体研究卵巢癌小动物模型的重要实验工具。

X-连锁严重联合免疫缺陷病的植入前遗传学诊断

【目的】采用多重置换扩增建立一种可靠、准确的植入前遗传学诊断方法,应用于X-连锁严重联合免疫缺陷病(X-SCID)的植入前遗传学诊断(PGD)。【方法】选择5个位于致病基因IL-2受体γ链(IL2RG)基因两侧的短串联重复序列(STR)位点对X-SCID家系进行单体型分析,采用多重置换扩增(MDA)对单细胞进行全基因组扩增,对扩增产物采用在家系分析中具有多态性的STR位点进行单体型分析,结合位点Amel进行性别诊断,STR位点均采用单重荧光PCR,同时对IL2RG基因exon5进行测序分析。【结果】对家系分析中,共有3个STR位点具有多态性。对10个单淋巴细胞及10个单卵裂球进行了预实验:MDA扩增成功率为100%,对致病基因IL2RG exon5的行基因测序的检测效率为100%;对于3个有多态性的STR位点和AMEL,PCR扩增效率为96.3%(77/80),等位基因脱扣率(ADO)为11.5%(7/61)。对该家系进行了一个周期的PGD,对7个胚胎进行了诊断,其中2个为正常胚胎,移植后获得双胎妊娠,早产活产一个健康男婴及一个健康女婴。【结论】采用多重置换扩增结合致病基因特异性扩增测序检测及单体型分析在单细胞水平对X-连锁严重联合免疫缺陷病进行检测,两者相结合可避免污染、等位基因脱扣等导致的误诊,提高了PGD诊断效率。

X-连锁严重联合免疫缺陷病一家系分析并文献复习

目的总结分析严重联合免疫缺陷病(SCID)的临床表现、诊断方法和治疗。方法对1例生后2个月内起病,严重感染,使用抗生素治疗效果不佳,生后5个月病死,常规实验室检查外周血淋巴细胞绝对计数减少,WBC总数2.8×109·L-1,L1.9×109·L-1的患儿,使用流式细胞仪检测患儿及其双亲的外周血淋巴细胞表达,并抽提出DNA,对IL-2受体γ链(IL2RG)进行基因分析。外周血淋巴细胞转化试验检测患儿舅舅淋巴细胞增殖能力。回顾分析患儿家族史,通过问诊进行初步家系调查。结果流式细胞仪检测患儿外周血CD3+T细胞为0;NK细胞(CD16+CD56+)为4%。患儿X染色体q13.1的IL2RG基因的第6个外显子存在突变,突变位为849位碱基G缺失导致阅读框架移位,氨基酸序列位于278半胱氨酸处,并在293位产生"TGA"的终止密码子。患儿母亲被证实为携带者,但不是单纯的杂合子,可能存在嵌合突变。患儿被诊断为X-连锁严重联合免疫缺陷病(X-SCID)。患儿的舅舅生后因严重感染治疗无效而病死,其淋巴细胞转化试验植物血凝素(PHA)刺激72h,外周血单个核细胞无增殖反应(CPM值为0)。病程中使用未经特殊处理的血制品后出现高热、皮疹和肝、脾肿大后病死。回顾分析家族史,患儿母系中近3代出生男性4例均因严重感染而在婴幼儿期夭折,考虑可能也是X-SCID,女性均健康。患儿妹妹经基因分析证实亦为携带者,为IL2RG基因的第6个外显子849位碱基嵌合型。患儿的舅舅使用未经特殊处理的血制品出现的临床表现为移植物抗宿主病可能。结论经基因分析确诊了1例X-SCID,通过初步家系调查,基因分析证实患儿母亲及妹妹均为嵌合型携带者。临床上对出生后6个月内严重感染,治疗效果不佳者应警惕SCID的可能,并应进行免疫功能评价。如果疑为SCID患儿则不能接种活疫苗和使用未经特殊处理的血制品。早期进行造血干细胞移植可以重建患儿的免疫系统,提高长期生存率。应提高儿科医务人员对该病的认识。

1例严重联合免疫缺陷并发全身播散性卡介苗病患儿的护理

总结1例严重联合免疫缺陷并发全身播散性卡介苗病患儿的护理。认为预防感染需做好保护性隔离和静脉穿刺的护理,重视臀部、阴囊、尿道口、接种部位、口腔黏膜的护理,改善原有症状,做好抗痨药物的使用及其不良反应的观察和护理,并安抚患儿家长,对其进行心理护理和健康宣教等。经过3个月的精心治疗与护理,患儿病情控制,转本院血液科行造血干细胞移植。

严重联合免疫缺陷SCID小鼠的免疫学特征

目的 探讨SCID鼠与免疫学相关的外周血指标变化及个体“渗漏”问题。方法 采用血细胞全自动分析仪检测SCID、NC、BALB/c鼠 14项外周血指标 ,3H TdR掺入测T、B淋巴细胞转化功能和细胞毒活性。结果 SCID鼠与NC、BALB/c鼠相比 ,WBC、淋巴细胞分类 (Ly)的比例显著减少 ;中性粒细胞 (GR)和红细胞体积分布宽度 (RDW )显著增加。随着鼠龄的增长 ,WBC和Ly增加 ,GR和RDW减少 ,其中变化最显著的个体 (WBC≥ x±2SD)称之为“渗漏” ,在鼠龄 6～ 8周时和 17～ 19周时的渗漏率分别为 5 .5 %和 2 6 .7%。此外 ,SCID鼠的T、B淋巴细胞转化和CTL细胞功能与BALB/c鼠相比显著低下。结论 SCID鼠T、B淋巴细胞联合缺陷 ,可在免疫生物学领域中广泛应用 ,但要及时剔除个体“渗漏”

不典型严重联合免疫缺陷病7例诊治分析

目的探讨不典型严重联合免疫缺陷病(SCID)的诊断和治疗。方法回顾分析2012年9月-2017年6月证实为IL2RG、JAK3和RAG1突变的7例不典型SCID患儿的临床资料。结果 7例患儿中,婴儿5例,幼儿及学龄期儿童各1例;6例为男性、1例为女性。例2、4、6为经典SCID临床表型,例1、3、5、7为不典型SCID临床表型,例6临床诊断Omenn综合征。例2、5为经典SCID免疫表型,例1、3、4、6、7为不典型SCID免疫表型,例1有母体嵌合。二代测序提示,例1为复合杂合JAK3突变c.3097-1G>A/c.946-950GCGGA>ACins GGT;例2、3、4为IL2RG突变,分别为c.865C>T/p.R289X、c.664 C>T/R 222 C、52 del G;例5为杂合JAK 3突变c.2150 A>G/p.E 717 G、c.1915-2 A>G。Sanger测序提示,例6为复合杂合的RAG1突变c.994C>T/p.R332X、c.1439G>A/p.S480N;例7为纯合的RAG1突变c.2095C>T/p.R699W。结论 SCID基因突变在一定情况下可导致不典型的临床和/或免疫表现。

非肥胖型糖尿病及严重联合免疫缺陷小鼠体内成人脂肪源Flk1^+CD31^-CD34^-细胞的多向分化

目的:探讨成人脂肪源Flk1+CD31-CD34-细胞用于移植的可能性。方法:将男性成人脂肪源Flk1+CD31-CD34-细胞按106个/只剂量经尾静脉输入10只6～8周龄、接受亚致死剂量射线照射的非肥胖型糖尿病及严重联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠体内(实验组),对照组10只输注等体积的RPMI1640培养基,2个月后处死动物,检测植入情况。结果:在实验组小鼠体内,脂肪源Flk1+CD31-CD34-细胞不仅有助于造血重建及体内微血管损伤的修复,参与血管新生,还能分化为消化道上皮细胞;而对照组小鼠则在2周内全部死亡。结论:脂肪源Flk1+CD31-CD34-细胞极有可能成为一种理想的种子细胞用于移植。

先天性严重联合免疫缺陷病1例

严重联合免疫缺陷病,又称为瑞士型无丙种球蛋白血症,是一种体液免疫和细胞免疫均有缺陷的遗传性疾病,占免疫缺陷病的10％～20％。作者近期收治本病1例,现报告如下: 患儿,男性,年龄9个月。因反复发热,咳嗽6个月,加重伴气促,拒食3d入院。患儿系足月第三胎,产时无窒息,生后母乳喂养,否认传染病史。患儿两兄因类似疾病分别死于1岁和13个月。患儿生后3个月起反复发热,咳嗽、腹泻,经院外三所医院诊断为支气管炎、肺炎、腹泻病、口疮7次。经多种抗生素,丙种球蛋白,血浆等治疗,病情有所好转,但仍反复。体检:T39.9℃,P160次/min,R64次/min。

严重联合免疫缺陷病1例误诊分析

严重联合免疫缺陷病是指细胞免疫及体液免疫两者都有严重缺陷的一组疾病。临床少见,临床表现轻重程度不同,极易误诊。现将所遇见并误诊1例报告如下。 临床资料 男,4^+月,因咳嗽1个月,皮疹10天,发热4天入院。皮疹为斑片状皮疹,在当地皮肤科查出“癣菌”。家族史:第1胎,女,3^+月时因患肺炎死亡。第2胎,男,6^+月时因患肺炎死亡。第3胎,女,7岁,体健。个人史:2个月前因支气管炎留住我院,痊愈出院,当时T—lell0.24,IgA0g/L。

RAG1基因突变致严重联合免疫缺陷一例并文献复习

目的分析RAG1基因突变致严重联合免疫缺陷患儿的临床特点, 以期在临床工作中早期识别以反复呼吸道感染起病的严重联合免疫缺陷患儿, 并早期采取有效治疗措施。方法回顾分析2021年2月于中国医科大学附属盛京医院住院的一例RAG1基因突变致严重联合免疫缺陷患儿的临床资料及基因检测结果, 并对相关文献进行复习。结果患儿, 男, 7月龄, 因反复感染住院治疗。实验室检查提示外周血总T细胞绝对计数369/μl、总B细胞绝对计数33/μl, 全外显子组测序提示患儿存在RAG1基因c.1528(exon2)G>T及c.2785(exon2)c.2786(exon2)insATAG位点突变。文献复习共检索出符合条件的文献26篇, 共报道病例60例, 男童35例, 女童25例, 平均年龄约为4.5月龄;36例表现为反复呼吸道感染, 其次为消化道感染26例, 其他临床表现包括泌尿系感染、中枢神经系统感染、骨质破坏、念珠菌感染、肝脏肿大等;22例存在家族史;21例完成造血干细胞移植, 其中15例存活。结论 RAG1基因突变致严重联合免疫缺陷的患儿易出现严重感染, 甚至危及生命, 应结合临床特征、免疫学检查及基因检测, 早发现、早治疗, 以改善患儿预后。

应用TRECs筛查新生儿严重联合免疫缺陷的Meta分析

目的系统评价T细胞受体删除环(TRECs)筛查新生儿严重联合免疫缺陷病(SCID)的诊断准确性。方法计算机检索PubMed、EMbase、Cochrane Library、Web of Science、CBM、WanFang Data和CNKI数据库,搜集与研究目的相关的诊断准确性研究,检索时限均从建库至2022年10月26日。由2位研究员独立筛选文献、提取资料并采用QUADAS-2工具评价纳入研究的偏倚风险后,采用Stata 15.0和Meta Disc 1.4软件进行Meta分析。结果共纳入18个研究,包括6243718例新生儿。Meta分析结果显示:TRECs筛查新生儿SCID合并的敏感度(SEN)、特异度(SPE)、阳性似然比(PLR)、阴性似然比(NLR)和诊断比值比(DOR)分别为0.97[95%CI(0.92,0.99)]、1.00[95%CI(1.00,1.00)]、1447.05[95%CI(528.49,3962.11)]、0.13[95%CI(0.08,0.22)]和11698.21[95%CI(2853.44,47958.98)],综合受试者工作特征(SROC)曲线下面积为0.97。结论应用TRECs筛查新生儿SCID的准确性较高,有助于早发现和治疗SCID患儿。受纳入研究的数量和质量限制,上述结论尚待更多高质量研究予以验证。

B细胞阴性严重联合免疫缺陷患儿1例的临床表型及RAG1基因变异分析

目的报道1例以暴发性心肌炎为临床表现的B细胞阴性严重联合免疫缺陷(B-SCID)患儿,并对其进行基因变异分析。方法选取2021年1月31日就诊于福建省妇幼保健院的B-SCID患儿1例为研究对象。对患儿及其父母进行全外显子组测序,并通过Sanger测序对候选变异进行家系验证。结果患儿为女性,2个月11天,出生后反复发生皮肤及肺部感染,此次因合并暴发性心肌炎入院,实验室检查提示IgG降低,外周血T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞严重缺乏。全外显子组测序结果提示患儿存在RAG1基因c.C3007T(p.Q1003X)纯合无义变异,患儿父母均为携带者,该变异既往未见报道,根据ACMG相关标准判断为疑似致病。结论确诊了1例RAG1基因变异相关的B-SCID,丰富了RAG1基因的变异谱,同时为患儿家庭的遗传咨询提供了线索。

X-连锁严重联合免疫缺陷病一家系突变分析及产前诊断研究

目的确定患儿已故的疑为X-连锁严重联合免疫缺陷病1家系成员IL2RG基因突变类型，探索采用DNA测序进行产前诊断的可行性。方法采集已故患儿的父母外周血标本及妊娠11周时的胎儿绒毛标本，常规提取基因组DNA，用聚合酶链反应扩增产物，采用双向直接测序方法，检测IL2RG基因8个外显子编码区及旁侧非编码区序列突变。结果已故患儿母亲携带IL2RG基因c．690C〉T（R226C）杂合突变，再次妊娠时行产前诊断确定为男性胎儿，未携带该突变；第三次妊娠又行产前诊断，确定妊娠一女性胎儿，且为杂合突变携带者，2名胎儿出生后1年随访结果与产前诊断结果一致。结论IL2RG基因c．690C〉T（R226C）突变为该家系的致病突变。测序分析结合性别鉴定可对患者已故的X-连锁严重联合免疫缺陷病家系行有效的携带者筛查及产前诊断。

重组活化因子1基因突变所致不同临床表型严重联合免疫缺陷病3例分析

目的总结分析重组活化因子(RAG)1基因突变所致严重联合免疫缺陷病(SCID)的不同临床及免疫特点。方法 2012年9月至2013年4月首都医科大学附属北京儿童医院收治的3例SCID患儿,经RAG1基因突变分析获得明确诊断,经HLA配型方法除外母体T淋巴细胞经胎盘输注,经细胞遗传学方法判断淋巴细胞增殖功能。结果病例1表型为经典SCID,病例2表型为Omenn综合征,病例3为伴反复自身免疫性溶血性贫血的非典型SCID。RAG1基因突变分析结果,病例1复合杂合位点1:1870 C>T,Arg624Cys;位点2:2005 G>A,Glu669Lys。位点1为已报道突变,位点2为新发现的错义突变。病例2复合杂合位点1:994 C>T,Arg332X;位点2:1439 G>A,Ser480Asn。均为新发现突变。病例3纯合2095 C>T,R699W,为已报道突变。前两例患儿均于自动出院后不久夭折,后者仍处于反复住院治疗自身免疫性溶血性贫血过程中。结论 RAG1突变所致SCID临床表现有差异,经典SCID和Omenn综合征预后严重,需移植治疗。

严重联合免疫缺陷高危儿羊膜腔穿刺产前诊断7例临床分析

目的探讨羊膜腔穿刺结合基因序列和染色体核型分析在严重联合免疫缺陷(SCID)高危儿产前诊断中的意义。方法 2008-2010年重庆医科大学附属儿童医院基因诊断明确的7例SCID患儿,其中6例X连锁SCID、1例Omenn综合征。追问病史,建立7个SCID家系图谱,确诊20个异常基因携带者。对其中7个携带异常基因的高危孕妇于孕18～20周经羊膜腔穿刺抽取羊水,部分羊水经离心后,提取羊水细胞DNA,经PCR扩增IL-2RG或RAG1基因,扩增PCR产物进行双向序列重复测定。此外对羊水中胎儿脱落细胞进行培养,采用原位制片、G带染色技术进行染色体核型分析。产后采集高危儿外周血重新进行基因分析,并进行免疫功能评估。结果全部病例穿刺均成功,羊水细胞培养成功率100%。基因和染色体核型分析结果显示,3例为正常男性胎儿,2例为正常女性胎儿,2例为男性缺陷胎儿。2例男性缺陷胎儿均为IL-2RG基因突变。除2例缺陷胎儿行人工流产术外,5例SCID高危儿均顺利出生,产后基因分析结果均正常,与产前结果相同。随访免疫功能均正常。结论羊膜腔穿刺结合基因和染色体核型分析在SCID的产前诊断中是一项成熟有效的操作技术。

胰腺癌严重联合免疫缺陷小鼠移植瘤模型的建立

动物模型是进行转化医学研究的重要工具。本文拟介绍一种胰腺癌严重联合免疫缺陷（SCID）小鼠移植瘤模型的建立方法。一、材料与方法1．实验动物：采用5～6周龄的雌性SCID小鼠，饲养于无特定病原体（SPF）条件。

严重联合免疫缺陷并发全身播散性卡介苗病一例

患儿男，8个月，因左下肢肿胀3个月、皮下结节2个月伴发热3d入院。患儿3个月前出现左下肢肿胀，皮肤发硬，当地医院诊为橡皮肿，未予治疗，2个月前患儿左上肢出现3个黄豆大小硬性皮下结节，2个月来皮下结节逐渐增多，散在分布于躯干及四肢，且体积逐渐增大至花生米大小，部分结节变软破溃流脓，曾多次在当地医院静脉输注抗生素治疗无效，入我院前3d起患儿中等度发热，发病以来患儿精神食欲差，体重增长缓慢。该患儿为第一胎第一产，足月顺产，生后第2天接种卡介苗，按时接种脊髓灰质炎疫苗及白百破疫苗，父母家系三代均无类似疾病史。查体：重病容，面色略苍白，发育营养稍差，左上臂卡介苗接种处见-1cm×1cm溃疡面，有脓性渗出，全身散在数十枚绿豆至花生米大小皮下结节，略高出皮面，质中偏硬，活动可，腹壁数个结节明显凸出皮面，结节内有波动感，部分破溃后有脓性液体流出，阴囊内可触及数个绿豆大小活动性结节，右侧睾丸下极一0．5cm×0．5cm硬性结节，全身浅表淋巴结未触及，心肺检查未见异常，肝肋下2．5cm，脾肋下3cm，质地中等，左下肢橡皮样肿胀。

严重联合免疫缺陷小鼠异种移植人舌鳞状细胞癌的初步研究

目的建立稳定的人舌鳞状细胞癌(TSCC)严重联合免疫缺陷(SCID)小鼠异种移植瘤模型,初步研究其组织形态学以及生物学行为。方法将未经治疗的新鲜人TSCC标本移植于SCID小鼠腹部皮下,当肿瘤生长至10～15mm时,取出移植瘤再次移植传代,对比研究各代移植瘤的组织学形态,原位杂交以及免疫组织化学法检测肿瘤组织的来源。结果 75%(8/12)标本成功建立起稳定移植瘤模型,最长传至第5代。组织形态学对比显示移植瘤保持了原代瘤的组织学特征和异质性;免疫组织化学证实肿瘤细胞的人源性和基质细胞的宿主源性。结论成功建立人TSCCSCID小鼠异种移植瘤模型,较好的保持了原代肿瘤的特性。

严重联合免疫缺陷病十例临床分析

目的提高儿科医师对严重联合免疫缺陷病(severe combined immunodeficiency,SCID)的认识,从而加强对SCID的早期甄别及治疗。方法回顾性分析我院2007至2018年期间收住院治疗的10例SCID患儿的临床表现、相关免疫学检查结果、影像学表现及转归情况。结果SCID的临床表现为出生后短时间内即发生频繁且严重的感染,10例患儿,男8例,女2例,平均发病年龄4.2个月,平均诊断年龄6个月;肺部影像学示8例胸腺影缺如,9例肺CT示重症肺炎,3例并发肺部真菌感染。7例死亡患儿中,6例因感染死亡,死亡年龄均<1岁。实验室检查提示10例患儿均有细胞和体液免疫功能异常;10例CD3^+T细胞均<20%,CD16^+CD56^+(NK%)3例 >85%,7例≤2%;7例B细胞反应性增高,但5例分泌免疫球蛋白功能均明显降低。IgG<2.0g/L7例, >2.0g/L3例。8例患儿行基因检测证实为SCID。结论SCID的临床表现为生后短时间内即发生频繁的细菌、病毒及真菌感染,在临床工作中对于小婴儿生后反复发生感染,或多部位严重感染且迁延不愈时,要想到SCID的可能并及时行相关免疫功能检查,争取做到早期诊断,及时治疗,尽早行骨髓干细胞移植。

T-，B＋，NK-严重联合免疫缺陷病一例

患儿男。6＋月。因“反复咳嗽伴腹泻1＋月，发热2天”入院。1＋月前患儿无明显诱因出现咳嗽伴腹泻，为阵发性串咳，有痰不易咳出，偶伴气喘，无发热、皮疹，无抽搐、呕吐。