丫啶橙-碘化丙啶双染色法观察大鼠耳蜗基底膜毛细胞活性

目的 探讨大鼠耳蜗基底膜毛细胞活性鉴别的实验观察方法。方法 采用丫啶橙-碘化丙啶（acridine orange-propidium iodide，AO/PI）双染色法，荧光显微镜观察，检测经组织培养后新生大鼠耳蜗基底膜毛细胞的活性。结果 在激发光下染色后的活细胞核是亮绿色，失活细胞核呈橙红色。当染液pH为6．5，AO浓度为0．1‰时，细胞染色不足，浓度超过1．5‰时，出现“过染”，最适染色浓度为1‰；当1‰AO的pH值低于5．0时毛细胞蒙上红晕，背景模糊，当pH值高于7．4时，不能区分死亡细胞与活细胞，pH值6．5～7．0时，染色效果最好。结论 用pH为6．8的1‰。AO、0．1‰PI染色，可清晰分辨死／活细胞。

10硫杂7苯基六氢苯并[c]丫啶酮8的合成及机理

利用２Ｈ硫代吡喃３，５（４Ｈ，６Ｈ）二酮、α萘胺和苯甲醛的缩合反应合成了１０硫杂７苯基六氢（ 四氢）苯并丫啶酮８ ，并提出了该合成的反应机理。所合成的产物经红外光谱、核磁共振光谱和元素分析确定其结构。

丫啶橙荧光染色结膜印迹细胞定量检测干燥性角结膜炎

目的应用丫啶橙荧光染色法进行结膜印迹细胞学检查,通过判断结膜细胞功能状态,对干燥性角结膜炎患者的眼部干燥程度进行定量检测,为临床的治疗提供实验室依据。方法选自我院眼科门诊已确诊的干燥性角结膜炎患者23例(38眼),用丫啶橙荧光染色结膜印迹细胞检查法进行检测,并用结膜印迹细胞检查结果评价标准进行评价,按Tseng分类法进行分级。结果干燥性角结膜炎患者23例(38眼)中,25眼细胞分级为Ⅱ～Ⅲ级,13眼细胞分级为Ⅲ—Ⅳ级。结论丫啶橙荧光染色法进行结膜印迹细胞学检查可以确认结膜细胞鳞状化生的程度,为干燥性角结膜炎病变程度提供临床分级、定量诊断,指导临床用药。

丫啶－9－羧酸的合成

采用二苯胺为原料合成了丫啶－９－羧酸，研究了９－甲基丫啶和丫啶－９－羧酸的制备反应条件，提高了各步反应产率。

消癌平对Ec-9706食管癌细胞的作用及机制实验研究

目的探讨消癌平注射液对人食管癌细胞(Ec-9706)的抑制作用及其作用机理。方法①观察不同浓度消癌平注射液对Ec-9706的抑制率。②用倒置显微镜,丫啶橙染色(荧光显微镜)观察细胞用药前后形态变化;流式细胞仪检测用药前后细胞周期变化;免疫细胞化学法检测CyclinD1表达。结果①消癌平40,20,10,5 mg/ml浓度时对EC-9706细胞的生长抑制率分别为(90.15±2.74)%,(68.02±3.56)%,(48.73±1.79)%,(22.52±2.08)%。其OD值与空白对照组差异有统计学意义(P<0.05)。其IC50值为(10.89±1.05)mg/ml。②消癌平可诱导Ec-9706凋亡。③EC-9706经药物作用后,G0/G1期细胞百分比明显升高,S期细胞百分比明显下降,细胞被阻滞于G0/G1期。④Ec-9706在蛋白水平不表达CyclinD1。结论消癌平对Ec-9706细胞有较好的抑制作用。

小鼠骨髓嗜多染红细胞微核单激光流式细胞仪自动化检测

背景与目的建立快速检测小鼠骨髓嗜多染红细胞微核的流式细胞仪自动化方法。材料与方法以环磷酰胺处理雄性KM小鼠,分别用丫啶橙(Acridine orange,AO)、单激光流式细胞仪(Flowcytometer,FCM)、姬姆萨(Giemsa)法检测小鼠骨髓及外周血嗜多染、正染红细胞微核率,将检测结果进行比较。结果以前置角散射光(Forward angle scatter,FSC)和DNA荧光(FL1)作图,清晰可见小鼠骨髓细胞被分成5个群体——有核细胞、嗜多染、正染、含微核的嗜多染及正染红细胞;环磷酰胺诱导的小鼠骨髓嗜多染及正染红细胞微核率呈良好的剂量-反应关系;FCM、快速AO法与Giemsa法检测结果具有良好的相关性(r=0.973,P<0.01;r=0.978,P<0.01)。结论AO-FCM自动化检测方法完全适用于小鼠骨髓红细胞微核率的检测。

沉积亚单层荧光染料提高有机发光器件的发光效率

结合掺杂薄层作为发光探针层的方法和亚单层(submonolayer)有机发光技术,利用沉积在有机发光器件发光层中的亚单层奎丫啶酮(Quinacridone,QAD)分子作为探针,同时改变QAD层的位置,对有机发光器件中激子的形成与扩散进行了研究,器件结构为ITO/NPB(60nm)/Alq3(xnm)/QAD(0.05nm)/Alq3[(60-x)nm]/LiF/Al(其中x=0,2.5,5,7.5nm).通过对各器件不同条件下的电致发光谱、发光强度和发光效率的对比研究,得到在x=5nm处引入亚单层QAD可以使QAD分子通过能量转移而获得的激子数量最多,进而可以实现高效率的发光.

姜黄挥发油对人肺腺癌A549细胞作用的形态学研究

目的 研究中药姜黄提取物姜黄挥发油对人肺腺癌A5 49细胞的作用。方法 采用倒置显微镜、Giemsa染色及丫啶橙荧光染色观察不同浓度姜黄挥发油作用下人肺腺癌A5 49细胞形态的变化。结果 ①倒置显微镜下见 ,不同浓度 (0 0 8～ 1 5 μl/ml)的姜黄挥发油处理肺癌细胞 2 4～ 72h后 ,肺癌细胞呈散在分布 ,细胞稀少 ,大多数为圆形或椭圆形 ,显示细胞增殖受到抑制 ,上述变化与姜黄挥发油的浓度有关 ;②Giemsa染色实验表明 ,姜黄挥发油作用 2 4～ 72h后 ,0 8μl/ml组和 1 0 μl/ml组细胞凋亡率分别为 3 4%和 42 % ,与阴性对照组 (13 5 % )比较差异显著 (P <0 0 1) ,凋亡细胞多表现为胞体缩小、变圆 ,核浓缩 ,呈紫黑色 ;③丫啶橙荧光染色可较细致地显示细胞凋亡时的多种结构、形态改变 ,能够发现较早期的凋亡细胞 ,因而其敏感度可能更高。结论 姜黄挥发油可抑制肺癌细胞的生长和增殖 ,对肺癌细胞有诱导凋亡作用。

脑膜癌病20例临床分析

目的:探讨脑膜癌病的临床特点及脑脊液细胞学改变。方法:对1998年9月到2004年12月收治的20例 经脑脊液细胞学证实的脑膜癌病患者的临床资料进行回顾性分析。结果:首发症状多以头痛、呕吐为主,可伴脑神经和 脊神经损害及脑膜刺激征;脑脊液检查颅内压均不同程度增高,另外还可表现细胞数、蛋白升高,糖、氯化物下降;细胞学 检查均发现癌细胞,其中有四例经丫啶橙荧光染色结果阳性。结论:脑脊液细胞学检查发现癌细胞是诊断脑膜癌病的重 要依据。

光子嫩肤细胞安全性评价

目的:研究强脉冲光对成纤维细胞的安全性。方法:以中国仓鼠肺成纤维细胞(V79)为受试细胞,按常规方法进行传代培养,收获细胞后将1×105cell/ml的细胞接种于12孔培养板,每孔接种1ml,分8个组,以不同剂量光子照射(波长560n,m高、中、低三个剂量组;波长640nm,高、中、低三个剂量组),并设一个阴性对照组和一个阳性对照组,立即进行DNA梯度电泳。同时分别检测三个时间点的MTT值(24h、48h、72h)及进行丫啶橙染色。结果:DNA梯度电泳法(DNALadder)显示各剂量强光照射组均无DNA损伤条带,仅在近电泳点样处出现条带,阳性对照组呈现典型的有一定间隔的细胞凋亡梯状条带(Ladder'sband);MTT值测定表明各照射剂量组细胞的增殖活性差异无统计学意义;丫啶橙染色结果各剂量组未发现明显的凋亡小体形成。结论:强脉冲光照射对V79细胞DNA无损伤。

盐酸小檗碱作用于人舌癌Tca8113细胞的形态学研究

目的:观察盐酸小檗碱作用与体外培养人舌癌Tca8113细胞的形态学改变,探讨盐酸小檗碱对Tca8113细胞的杀伤作用。方法:利用体外培养技术,HE染色法,丫啶橙染色法,观察盐酸小檗碱对Tca8113细胞作用后的形态学改变。结果:盐酸小檗碱(4μg/ml)作用于Tca8113细胞48h后,细胞形态发生改变,大量细胞变圆,细胞出现出芽现象,并出现较多的悬浮死亡细胞。结论:盐酸小檗碱可使Tca8113。细胞膜表面结构发生改变,并具有明显的杀伤作用。

两种方法用于中孕引产的疗效观察

目的：探讨米非司酮联合米索前列醇与单用依沙丫啶在中孕引产中的疗效。方法：拟行中孕引产258例，随机选取156例，采用米非司酮联合米索前列醇药物引产为观察组，其余102例单用依沙丫啶羊膜腔注射引产为对照组，对两组疗效进行比较。结果：两组引流产时间、完全流产率、宫颈及穹隆裂伤率比较分别为：观察组24±10h，100％，0；对照组48±13．5h，26．46％，117％。结论：前者解除患者痛苦，降低医疗风险，是中孕引产的好方法，值得推广应用。

真菌性角膜溃疡两种实验室诊断方法的比较

目的:寻找快速,简便、准确诊断真菌性角膜溃疡的实验室诊断方法。方法:采用角膜刮片取材,涂片后进行KOH湿片直接镜检法及丫啶橙荧光染色法同时检测140例临床疑似真菌性角膜溃疡患者的标本,对结果进行比较。结果:KOH湿片直接镜检法检测阳性率为71%,丫啶橙荧光染色法阳性率为86%,结果比较有统计学意义(P<0.05)。结论:丫啶橙荧光染色法简便,快速、准确,阳性率高,优于KOH湿片直接镜检法。随着目前国产荧光显微镜的日益普及,我们认为该方法为快速检出真菌的好方法,值得推广应用。

胰岛移植物质量鉴定方法的研究

胰岛移植物的质量直接影响胰岛移植的效果，用经胶原酶消化、Ｆｉｃｏｌ纯化的成年大鼠胰岛，比较乙醇和二甲亚砜（ＤＭＳＯ）配制的双硫腙（ＤＴＺ），作Ｂ细胞鉴别染色；丫啶橙（ＡＯ）－碘丙啶（ＰＩ）和双醋酸荧光素（ＦＤＡ）－溴乙锭（ＥＢ）双色荧光染色，鉴别活细胞。结果表明，乙醇配制的ＤＴＺ染色对细胞毒性小，且染液易储存；ＡＯ－ＰＩ染色，因ＡＯ能识别凋亡细胞，且着色鲜明，荧光持久。采用ＤＴＺ和ＡＯ－ＰＩ联合染色，能对胰岛的纯度。