亚硝酸盐暴露对红耳龟与中华条颈龟幼体的慢性毒性效应

对比研究了亚硝酸盐4个浓度NaNO2(0、100、200、500mg/L)暴露对红耳龟(平均体重13.89g±1.67g,n=224)和中华条颈龟(平均体重13.12g±1.83g,n=236)机体慢性毒性效应的影响。结果表明,红耳龟各暴露组肠中亚硝酸盐含量均低于中华条颈龟,且胁迫20d时差异极显著(P<0.01);胁迫20d、40d时红耳龟肝中亚硝酸盐含量高于中华条颈龟,但60d时却明显低于中华条颈龟。同时,红耳龟肝肠中超氧化物歧化酶(SOD)活性始终高于中华条颈龟,丙二醛(MDA)含量始终低于中华条颈龟;红耳龟暴露40d后肝中SOD活性增强,MDA含量减少,而中华条颈龟SOD活性依旧降低,MDA含量继续增加,这说明红耳龟比中华条颈龟具有更强的适应力和耐受力。本研究为红耳龟生态入侵机理研究提供了生理学依据,为保护物种多样性提供了理论依据。

硝酸铵影响红耳龟和中华条颈龟孵化及血液生理指标的研究

研究孵化基质中硝酸铵胁迫对红耳龟Trachemys scripta elegans和中华条颈龟Mauremys sinensis孵化及稚龟血液生理指标的影响,采用不同浓度硝酸铵(0mg/L,0.01mg/L,0.1mg/L)处理基质,在(30±0.5)℃下对两种龟卵进行孵化。结果表明:红耳龟的孵化率显著高于中华条颈龟(P<0.05),血细胞数量和形态变化明显,0.1mg/LNH4NO3处理组红细胞数和白细胞数分别为(9.68±2.91)×1011个/L和(1.11±0.18)×1010个/L,显著高于对照组(P<0.05),红细胞长短径比(1.71±0.14)与对照组和0.01mg/LNH4NO3处理组差异显著(P<0.05);中华条颈龟血细胞数量和形态在各个处理组间未见显著差异。对比研究各项指标可知,红耳龟可以通过增加血细胞数量和改变红细胞形态提高免疫力对抗硝酸铵胁迫,提示对环境的适应性强于中华条颈龟。

外来种红耳龟和本地种中华条颈龟耐饥饿能力比较研究

为比较外来种红耳龟Trachemys scripta elegans与本地种中华条颈龟Mauremys sinensis耐饥饿能力强弱,分别于2009年8月～2010年4月和2010年7～8月对外来种红耳龟和本地种中华条颈龟进行耐饥饿能力的长期(8个月)和短期(2个月)实验的比较研究。长期实验控制食物因子,短期实验控制饥饿时间。长期实验结果表明,中华条颈龟食物缺乏组体重特定增长率极显著低于食物充分组(P<0.01),而红耳龟体重特定增长率在两试验组之间无显著差异(P>0.05);在食物转化率方面,红耳龟食物缺乏组高于食物充分组,而中华条颈龟却相反。短期实验结果表明,中华条颈龟饥饿组体重特定增长率显著低于对照组(正常饲喂组)(P<0.05),而红耳龟饥饿组体重特定增长率与食物对照组无显著差异(P>0.05);中华条颈龟饥饿组肝重极显著小于对照组(P<0.01),红耳龟肝重两组之间差异不显著(P>0.05)。综上表明红耳龟耐饥饿能力强于中华条颈龟。

中华条颈龟致病性维氏气单胞菌的分离鉴定及药敏试验

为明确一起致中华条颈龟发病死亡的病原,本研究从患病的中华条颈龟体内分离出一株优势菌株,通过对分离菌的培养、革兰氏染色观察、生化试验、16S rRNA序列比对分析、动物攻毒试验和药物敏感试验对其进行鉴定。结果显示,分离菌在普通营养琼脂培养基上呈灰白色、不透明、圆形、边缘整齐、表面湿润且光滑、中间凸起的菌落;在SS琼脂培养基上形成浅橘红色、圆形、光滑的菌落;革兰氏染色结果显示,分离菌为革兰氏阴性菌,短杆状,菌体两端钝圆,单个或成对排列,并将该分离菌命名为HNJ002;生化试验结果显示,该菌具有运动性,且葡萄糖、蔗糖、半乳糖、麦芽糖、果糖、精氨酸双水解酶、鸟氨酸脱羧酶、D-葡萄糖产酸、D-葡萄糖产气、明胶水解、氧化酶、吲哚、V-P试验反应为阳性;进化树分析显示,其与GenBank中登录的维氏气单胞菌聚为一簇,且同源性达99%以上;动物攻毒试验显示,该菌对中华条颈龟有较强的致病性;药物敏感试验显示,其对多数抗菌药较为敏感,对罗红霉素、妥布霉素、新霉素中度敏感,仅对少数抗菌药物如氨苄西林、青霉素及克林霉素耐药。研究结果可为防治中华条颈龟维氏气单胞菌感染提供参考依据。

硝酸盐胁迫对红耳龟和中华条颈龟胚胎的毒性效应

在孵化基质蛭石中添加不同质量浓度的硝酸铵,在恒温(30±0.5)℃、相对湿度85%～90%、基质湿度5%～10%的条件下孵化龟卵至出壳,检测红耳龟和中华条颈龟胚胎中过氧化氢酶、超氧化物歧化酶活性和丙二醛的变化,研究环境胁迫对2种龟非特异性免疫的影响。试验结果表明,在胁迫条件下,红耳龟肝脏过氧化氢酶和超氧化物歧化酶活性显著高于中华条颈龟(P<0.05),并随着硝酸铵质量浓度的增大而降低;红耳龟和中华条颈龟的丙二醛浓度均低于对照组,且红耳龟肝脏和肌肉的丙二醛浓度均显著小于中华条颈龟(P<0.05);不同器官酶活表现不同,肝脏的过氧化氢酶和超氧化物歧化酶活性高于肌肉(P<0.05),肌肉易受氧化损伤。各项指标比较表明,红耳龟各组织器官抗氧化系统功能强于中华条颈龟,表明红耳龟胚胎发育期对环境胁迫的抗氧化能力、防御能力和机体免疫功能力优于中华条颈龟,有利于胚胎发育和个体生长。

中华条颈龟胚胎发育的形态学观察

[目的]研究中华条颈龟(Mauremys sinensis)胚胎发育过程中外部形态的变化。[方法]在恒温(29±0.5)℃,相对湿度为85%～90%,基质湿度为5%～10%的孵化条件下,连续解剖观察了中华条颈龟胚胎发育的过程。对胚胎发育各期主要形态学特征进行了详细描述,并配以周详的图片比较各期的典型特征。[结果]中华条颈龟的孵化期为53.00±1.77 d,根据其胚胎的日龄、大小和形态特征的变化将整个的胚胎发育分成了23期,其中9～23期主要以四肢、背甲、腹甲、头部、尾部等的变化为分期依据,同时,对龟鳖类胚胎发育分期的标准进行了讨论。[结论]结果有利于龟鳖类胚胎发育分期的标准化。

孵化基质pH对红耳龟和中华条颈龟胚胎的毒性效应

为了探索土壤酸化对红耳龟Trachemys scripta elegans和中华条颈龟Mauremys sinensis卵孵化和非特异性免疫功能的影响,实验设置孵化温度(30±0.5)℃,孵化基质pH为4、5、6、7条件下,对比研究两种龟卵孵化率、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量的变化。结果显示,两种龟卵孵化率均随孵化基质pH的降低而降低,pH7、6、5同种龟不同处理组间和同种处理不同种间孵化率均差异不显著(P>0.05),pH4可使龟卵致死;pH5、6组肝脏和肌肉中SOD和CAT活性均显著低于对照组pH7(P<0.05),且随着pH的降低,SOD、CAT活性均呈下降趋势,MDA含量相反呈上升趋势;不同物种间肝脏和肌肉SOD、CAT活性均是红耳龟大于中华条颈龟,MDA含量则小于中华条颈龟(P<0.05),表明胚胎期应对酸胁迫,中华条颈龟的钙质卵壳略占优势,红耳龟主要通过增强非特异性免疫机能提高抗氧化能力,在生理调节方面表现出较强的机体免疫能力和防御能力。

芳香化酶抑制剂对中华条颈龟性别分化的影响

为研究芳香化酶抑制剂(Aromatase inhibitor,AI)Letrozole对中华条颈龟(Mauremys sinensis)性别分化的影响,在(30.0±0.5)℃下孵化受精卵,孵化20 d时涂抹不同质量浓度Letrozole,出壳稚龟暂养1周后进行性别鉴定。结果表明,去离子水对照组孵化子代稚龟雌性占63.64%,雄性和间性各占13.6%和22.73%,差异极显著(P<0.01),说明该温度下,中华条颈龟主要产雌性个体;AI处理组雄性率分别为88.89%、92.00%和95.00%,说明诱导雄性转化作用较强(P<0.01),并且乙醇处理组和AI处理组均不会影响龟卵的孵化率(P>0.05)和孵化期(P>0.05)。对AI处理组的性腺进行组织学观察,雌转雄精巢曲细精管发育良好,组织结构典型;未完全雄性化的卵睾体,髓质有少量发育完整的曲细精管,皮层退化成薄薄的一层,组织结构处于睾丸与卵巢之间。在产雌温度下,性分化前使用AI能较好地诱导中华条颈龟由雌性转为雄性。

孵化基质pH对红耳龟和中华条颈龟孵化及血液生理指标的影响

为了探讨土壤酸化对红耳龟(Trachemys scripta elegans)和中华条颈龟(Mauremys sinensis)孵化及稚龟血液生理指标的影响,在孵化温度为(30±0.5)℃,孵化基质pH分别为4、5、6、7的条件下,对比研究了两种龟卵孵化率、畸形率、孵化期和血液生理指标的变化。结果表明,两种龟卵孵化率均随孵化基质pH的降低而降低,pH为4时可使胚胎致死,pH为7、6、5处理同种龟不同处理间和同种处理不同种之间孵化率差异不显著(P>0.05);pH降低红耳龟孵化期缩短,胚胎发育加速,胚胎发育正常,而中华条颈龟畸形率升高(P<0.05);两种稚龟血细胞变化不同,红耳龟红细胞长、短径变长,长短径比增加,红细胞数、白细胞数显著增加(P<0.05),中华条颈龟各项血液生理指标差异不显著。对比研究各项指标可知,红耳龟通过减少畸形率、提高急性应激刺激阈值,增强了对酸胁迫的耐受性。

中华条颈龟胚胎期性腺分化的组织学观察

采用石蜡组织切片和HE染色法,观察了在29℃下中华条颈龟(Mauremys sinensis)受精卵孵化胚胎期的性腺发育,并研究了其性别分化的过程。结果发现,沃尔夫管的发育早于缪勒氏管,从胚胎发育第19天起,单层缪勒氏管管壁细胞开始分裂增殖,随着胚胎的发育,管壁分化出黏膜层、黏膜下层和浆膜层,发育趋于完整;沃尔夫管发育停滞,萎缩退化。在胚胎发育第19天,性腺开始观察到少量卵原细胞和卵巢腔,分化完成时间为第25天,发育为卵巢。结果表明,胚胎期第19～25天为性别决定的关键时期,缪勒氏管的发育与卵巢分化具有同步性。

豆油部分或全部替代饲料中鱼油对中华条颈龟肠道形态及菌群结构的影响

本试验通过组织学染色及16S rRNA V3~V4区测序研究豆油部分或全部替代饲料中鱼油对中华条颈龟(Mauremys sinensis)肠道形态及菌群结构的影响。选取中华条颈龟雌龟[4龄,平均体重(1 557±307)g]24只,随机分为4组,每组6只。Ⅰ组(对照组)饲喂含1%鱼油的配合饲料(全鱼油饲料,豆油与鱼油的比例为0∶3),3个试验组分别饲喂用豆油替代全鱼油饲料中33%(Ⅱ组,豆油与鱼油的比例为1∶2)、67%(Ⅲ组,豆油与鱼油的比例为2∶1)和100%(Ⅳ组,豆油与鱼油的比例为3∶0)鱼油的饲料。每周喂食2次,试验期为10个月。结果表明:1)Ⅰ和Ⅲ组十二指肠绒毛长/隐窝深度(VH/CD)显著高于Ⅱ和Ⅳ组(P<0.05)。2)根据序列相似性97%水平划分,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组操作分类单元(OTU)总数分别为396、321、347和331个,特有OTU个数分别为43、3、4和5个,分别被鉴定出139、117、128、120个属。十二肠道优势菌门主要包含拟杆菌门(Bacteroidetes)、厚壁杆菌门(Firmicutes)、梭杆菌门(Fusobacteria)和变形菌门(Proteobacteria)4个门。Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组梭杆菌门和变形菌门所占比例增加,拟杆菌门和厚壁菌门所占比例下降,Ⅲ组厚壁杆菌门和拟杆菌门所占比例与Ⅰ组差距最小。细菌Ace指数和香农指数表现为Ⅰ组最高,其次是Ⅲ和Ⅳ组,Ⅱ组最小;细菌辛普森指数表现为Ⅱ组最大,其次是Ⅲ和Ⅳ组,Ⅰ组最小。由此得出,饲喂用豆油替代67%鱼油的饲料的中华条颈龟的肠道细胞发育成熟度以及菌群结构与饲喂全鱼油饲料的中华条颈龟相近。

温度对中华条颈龟孵化和性别的影响

研究了5个孵育温度（25±0．5）℃，（27±0．5）℃，（29±0．5）℃，（31±0．5）℃，（33±0．5）℃对中华条颈龟性别、胚胎发育及成活率的影响。每个温度放置30枚卵，空气相对湿度为85％～90％，基质湿度为5％～10％，重复试验2次。试验结果表明，在试验温度内，胚胎的发育速度随着孵化温度的升高而加快，孵化期缩短。在25℃时孵化成活率最低为46．2％，27℃时高达96．2％，孵出稚龟体质量、背腹甲形态发育指标显著增加，33℃时孵化率开始下降，且出现畸形龟，说明33℃的孵育温度不利于胚胎发育。在25℃时雄性率为83．3％，随着温度的升高而逐渐降低，33℃全部发育为雌性。结合温度敏感期温度转换试验，表明中华条颈龟的性别决定属于温度依赖型机制，可能属于其中的温度依赖型Ⅰ型。

豆油替代鱼油对中华条颈龟血脂代谢及相关酶活的影响

为缓解国际鱼油资源短缺,本研究从血脂代谢角度去评价豆油替代鱼油在中华条颈龟中的适宜比例。选取体质量(1557±307)g的4龄雌性成体中华条颈龟,根据日粮中豆油与鱼油的添加比例不同随机分成四组,0S∶3F组(豆油∶鱼油0∶3),1S∶2F组(豆油∶鱼油1∶2),2S∶1F组(豆油∶鱼油2∶1)和3S∶0F组(豆油∶鱼油3∶0);外源油的添加量占日粮1%。每周投喂2次,连续投喂8个月。从每组中随机取6只中华条颈龟,冷冻麻醉处死,解剖。检测血液中甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇含量,肝脏组织中脂蛋白脂酶、肝脂酶和激素敏感性脂肪酶活性以及肠道胰脂肪酶活性,结果如下:(1)随着豆油替代比例的升高,只有1S∶2F组和3S∶0F组总胆固醇显著高于0S∶3F组,并且3S∶0F组低密度脂蛋白含量显著高于0S∶3F(P<0.05)。(2)总脂酶活力在2S∶1F组达到最高,显著高于0S∶3F组(P<0.05);2S∶1F组的激素敏感性脂肪酶活力与其余组相比,更接近于0S∶3F;胰脂肪酶的活力在2S∶1F与0S∶3F之间差异不显著,但均显著低于其余两组。综合上述两方面指标来看,豆油替代鱼油在中华条颈龟中总体可行,较适宜的比例组为2S∶1F。

红耳龟与中华条颈龟争抢食物能力的对比研究

红耳龟Trachemys scripta elegans是全球最危险的外来入侵物种之一,已在我国多个地区建立野外种群。为了研究红耳龟与本地种的竞争优势,本研究选择了与红耳龟在野外同域的本土中华条颈龟Mauremys sinensis为竞争对象,设计了一对一、三对三和直接争抢食物的实验,以比较它们对食物的争抢能力。结果表明:一对一和三对三争抢实验中红耳龟取食颗粒多的频次和获得食物颗粒的总数均显著高于中华条颈龟(P<0.01);争夺实验中红耳龟先触及食物的频次和最终得到食物的频次也极显著高于中华条颈龟(P<0.01),但是两者在对等竞争中的获胜频次差异不显著(P>0.05)。另外,在争夺实验中由红耳龟先发起冲突的频次也显著高于中华条颈龟(P<0.05)。综合表明,与中华条颈龟相比,红耳龟反应更敏捷、侵略性更强,取食效率更高且争抢食物的能力强,尽管在争夺实验的对等竞争中优势不明显。

急性亚硝酸盐胁迫对红耳龟和中华条颈龟幼体抗氧化能力的比较研究

为了比较红耳龟(Trachemys scripta elegans)与本地龟抗氧化损伤的能力,选取体重为5?1 g的红耳龟(n=18)和中华条颈龟(Mauremys sinensis)(n=18)幼体暴露于3个亚硝酸盐浓度组(0、50、500 mg?L–1),进行24 h急性胁迫实验。结果表明:(1)随着亚硝酸盐浓度的升高,红耳龟肝组织中积累的亚硝酸盐量显著低于中华条颈龟(p<0.05),肠组织中的积累量则相反,这说明红耳龟对亚硝酸盐的代谢及解毒能力要强于中华条颈龟;(2)两种龟肝组织和肠组织中超氧化物歧化酶(SOD)活力显著低于对照组(p<0.05),且同一浓度组内红耳龟SOD活力略高于中华条颈龟,但差异不显著;两种龟肝组织和肠组织中丙二醛(MDA)含量随亚硝酸盐浓度的升高而显著升高,相比于红耳龟而言,中华条颈龟的上升趋势更加显著,说明亚硝酸盐浓度的升高对龟体产生了氧化性损伤且中华条颈龟的损伤程度要高于红耳龟;(3)两种龟红细胞微核率随亚硝酸盐浓度升高而升高,且高浓度组中中华条颈龟略高于红耳龟。综上所述,红耳龟幼体在亚硝酸盐胁迫下,其机体的氧化损伤程度要弱于中华条颈龟。

急性氨氮胁迫和恢复后中华条颈龟主要器官组织结构的变化

氨氮是水产养殖过程中最主要的环境污染物之一。为探究急性氨氮胁迫对中华条颈龟主要器官组织结构的影响,以体质量(218.26±12.65)g的1龄中华条颈龟为对象,应用苏木精—伊红染色的方法研究氨氮(200 mg/L)胁迫(24、48 h)及去除氨氮(48 h)对其脑、肝脏、心脏、肾脏和脾脏组织结构的影响。试验结果显示,氨氮胁迫后脑组织出现间质增宽、疏松,神经元细胞核发生偏位,神经元变性、坏死等现象,恢复48 h后神经元肿胀与细胞核偏位现象减少;肝脏出现肝细胞肿胀、颗粒变性、水泡变性、坏死等病理现象,肝血窦缩小甚至消失,恢复48 h后肝细胞肿胀减少,肝血窦基本恢复到胁迫前水平,但肝细胞颗粒变性、水泡变性现象依旧存在;心脏间质血管充血,恢复48 h后心肌细胞间隙缩小趋于胁迫前水平,充血现象消失;肾脏肾小管上皮细胞发生颗粒变性,部分细胞从基膜脱落,细胞膜破裂,肾小球体积增大、毛细血管网扩张,细胞核固缩甚至溶解消失,间质中有炎性细胞浸润,恢复48 h后炎性细胞基本消失,但肾小管管腔不规则和颗粒变性等病理现象依旧存在;脾脏白髓区域增大,恢复48 h后白髓与红髓趋于正常水平。试验结果表明,急性氨氮胁迫对中华条颈龟脑、肝脏、心脏和肾脏均会造成不同程度的损伤,恢复48 h后中华条颈龟主要脏器的病理变化呈现出不同程度的缓解,其中心脏恢复能力较好,脑、肝脏和肾脏恢复能力相对较差;脾脏免疫细胞增殖,表明机体在胁迫后会启动免疫防御机制,以增强机体的免疫能力。试验结果从病理学角度阐述了氨氮胁迫对中华条颈龟的影响,为龟鳖类的健康养殖提供一定的理论依据。

博物馆系统如何加强中华条颈龟的研究保护

本文简要论述了博物馆系统在中华条颈龟保护方面应起的作用和责任。本文主要研究了温度以及孵化基质PH对中华条颈龟生存的影响。

酵母多糖对中华条颈龟幼体非特异性免疫机能的影响

本研究旨在探讨饲料中添加不同水平的酵母多糖对中华条颈龟(Mauremys sinensis)幼体非特异性免疫机能的影响。选取体重为(134.7±19.1)g的中华条颈龟幼体,随机分成Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ4个组,按照龟体重各组饲料中酵母多糖的添加量分别为0 mg/kg(对照组)、800 mg/kg、1 200 mg/kg和1 600 mg/kg,并在第15天、30天检测各组的免疫器官指数、白细胞数目及血清中溶菌酶和补体C3、C4含量等免疫指标。结果表明,各实验组脾指数和肝指数与对照组之间差异均不显著(P>0.05);各实验组白细胞数目比对照组显著增多(P<0.05);在第15天血清中溶菌酶和C3、C4含量均显著高于对照组(P<0.05),在添加量为1 200 mg/kg时活性最高;在第30天各实验组溶菌酶和补体C4含量与第15天同剂量组相比显著下降,补体C4含量与对照组差异不显著(P>0.05)。由此得出,饲料中添加酵母多糖可提升中华条颈龟幼体的非特异性免疫机能,以1 200 mg/kg添加水平的效果最佳,且投喂时间不宜过长。

红耳龟与中华条颈龟初生幼体剩余卵黄、表型特征及运动能力的比较研究

为研究红耳龟(Trachemys scripta elegans)生理入侵机制,本研究选用本土中华条颈龟(Mauremys sinensis)为参照,对孵卵温度在(29±0.3)℃、湿度为﹣220 k Pa条件下孵出的初生幼体进行表型特征及运动能力的测量,禁食条件下分别在孵出第0 h、24 h、48 h、72 h、96 h、240 h时随机取10只个体解剖,分离出剩余卵黄并测量干重,比较研究两种龟初生幼体剩余卵黄的消耗、表型特征及运动能力。结果,(1)两种龟初生幼体剩余卵黄的消耗:刚孵出的红耳龟剩余卵黄含量(20.5%)显著高于中华条颈龟(5.2%);中华条颈龟经禁食72 h后剩余卵黄量仅占3.4%,至96 h已基本吸收完全,而红耳龟经禁食96 h后剩余卵黄量仍可达到11.9%,全部被吸收所用时间约为31 d。这说明红耳龟幼体孵出后剩余卵黄较多,耐饥力强。(2)两种龟初生幼体表型特征:中华条颈龟孵出1 h内体重为(7.07±1.21)g(n=30),红耳龟为(9.45±1.04)g(n=42),二者存在极显著差异(t=8.933,df=70,P<0.001)。以初始体重为协变量的方差分析结果表明,红耳龟初生幼体背甲长和头高显著大于中华条颈龟初生幼体,尾长却显著小于中华条颈龟,而体高、背甲宽、腹甲长、头长和头宽差异不显著。(3)室温条件下(约28℃)运动能力:中华条颈龟初生幼体的最大持续运动距离为(80.3±14.4)cm,运动过程中停顿次数为(5.6±0.3)次/min;红耳龟初生幼体的最大持续运动距离为(29.8±11.7)cm,停顿次数为(4.0±0.2)次/min;中华条颈龟和红耳龟初生幼体游完1 m泳道所用时间分别为(32.8±4.3)s和(61.2±7.2)s。因此,与本土中华条颈龟相比,红耳龟初生幼体个体较大,剩余卵黄较多,运动能力欠佳。研究结果为红耳龟外来入侵的生理适应机制研究提供了参考,并为龟类的卵内繁殖投入研究提供了基础数据。