卵形巴贝斯虫与中华泰勒虫双重PCR检测方法的建立

为建立一种能快速对卵形巴贝斯虫(Babesia ovata)和中华泰勒虫(Theileria sinensis)同时进行检测的双重PCR方法。根据GenBank已报道的卵形巴贝斯虫AMA1基因和中华泰勒虫MPSP基因设计合成了2对特异性引物,通过条件优化,建立了双重PCR检测方法。结果显示:双重PCR可特异扩增出卵形巴贝斯虫和中华泰勒虫目的条带,片段大小分别为500 bp和986 bp。该方法具有较好的特异性,对卵形巴贝斯虫和中华泰勒虫的最低检出浓度为16 fg/μL。对采集的90份牛血液样本进行双重PCR检测,卵形巴贝斯虫阳性率为30%(27/90),中华泰勒虫阳性率为16.67%(15/90),混合感染率为10%(9/90)。结果表明,双重PCR方法可用于卵形巴贝斯虫和中华泰勒虫的快速诊断和流行病学调查。

一例牛中华泰勒虫病的分子生物学诊断及分析

为确诊图们市某养殖户黄牛发病原因,对疑似泰勒虫感染的病牛进行PCR检测。方法:采用PCR方法通过泰勒虫MPSP基因通用进行扩增、测序及序列分析。结果:测序结果显示MPSP序列与中华泰勒虫新疆分离株(MG950143)同源性为99.12%,为中华泰勒虫感染;系统进化分析表明,该虫株与中华泰勒虫新疆分离株、马来西亚株亲缘关系较近。

牛中华泰勒虫新种(梨形虫亚目:泰勒虫科) 2.分子分类学研究

分离自我国甘肃中部地区土种黄牛的一种形态特异的泰勒虫,采用传统分类学研究鉴定为新种,被定名为中华泰勒虫（Theileria sinensis sp.nov.）。又利用对泰勒虫属特异的PCR引物（92/93）对该种基因组DNA扩增,结果表明该种属泰勒虫属原虫确定无疑,并对代表虫种进化和分类的18SrRNA基因序列进行了测定,对已测出该基因1067bp长片断序列与基因库中9种巴贝斯虫,7种已知牛泰勒虫的相应序列进行比较、分析,建立起系统发生树。树图表明,瑟氏泰勒虫和水牛泰勒虫的亲缘关系非常近,中华泰勒虫与这两个种的亲缘关系较近,与附膜泰勒虫、小泰勒虫、环形泰勒虫、斑羚泰勒虫、突变泰勒虫差异较大。

牛中华泰勒虫(Theileria sinensis sp.nov.)新种 1.传统分类学研究

对分离自我国甘肃中部地区土种黄牛体的泰勒虫未定种作了鉴定。与环形泰勒虫 (T .annulata)、瑟氏泰勒虫 (T .sergenti)、小泰勒虫 (T .parva)、突变泰勒虫 (T .mutans)、斑羚泰勒虫 (T .tautotragi)、附膜泰勒虫 (T .velifera)、水牛泰勒虫 (T .buffeli)作了形态学上的比较研究 ,观察到该未定种除了泰勒虫所共有形态外 ,还有其它泰勒虫所没有的且难以描述的特异形态 ,尤其在染虫率高峰期 ,特异形态占虫体总数的 2 0 %左右。该种还具有出芽增殖的特性 ,可在除脾牛体内大量繁殖 ,染虫率可达 5 2 6 9%的高峰 ,试验感染牛出现高烧、极度贫血、精神沉郁、食欲不振等临床症状 ,导致个别牛只死亡 ,剖检观察到某些脏器有严重病变 ,表明具有一定的致病力。媒介蜱尚不清楚 ,但已证实 ,在我国传播家畜泰勒虫和巴贝斯虫的 7种媒介蜱对该种无传播能力。传统分类学研究结果表明 ,该种不同于已知牛泰勒虫有效种 ,系一新种。由于这一新种首次在中国分离到 ,因而被命名为中华泰勒虫 (Theile riasinensissp .nov .) (梨形虫亚目 :泰勒虫科 )。

中华泰勒虫MPSP基因的原核表达及反应原性分析

用生物信息学方法,对中华泰勒虫的梨浆虫主要表面蛋白(major piroplasm surface proteins,MPSP)基因的核苷酸序列及编码蛋白的氨基酸序列进行了分析,并对该蛋白的抗原表位、信号肽以及跨膜区进行了预测。设计特异性引物,对中华泰勒虫MPSP基因进行了克隆和原核表达,并对融合蛋白的反应原性进行了分析。SDS-PAGE结果显示,融合蛋白的分子质量约为38ku,分布于上清中。Western-blot试验表明,融合蛋白仅与抗His标签蛋白的单克隆抗体、中华泰勒虫阳性血清、瑟氏泰勒虫阳性血清、环形泰勒虫阳性血清发生反应,而与其他泰勒虫、巴贝斯虫和绵羊无形体阳性血清不发生反应。这些结果表明,中华泰勒虫MPSP可作为ELISA诊断方法的候选抗原。

青海省天峻地区牦牛泰勒虫病血清学调查

泰勒虫病又称热带泰勒虫病,是由顶复门、梨形虫纲中的泰勒科泰勒虫（Theileria）寄生于动物巨噬细胞、淋巴细胞和红细胞所引起一类蜱传性血液原虫疾病。多呈急性经过,可引起家畜大量死亡,产肉量和产毛量显著下降,具有较高的发病率和死亡率。在我国现已报道的牛的泰勒虫有3个种,即环形泰勒虫（T.annulata）、瑟氏泰勒虫（T.sergenti）、中华泰勒虫（T.sinensis）。