氨氮对中华鳑鲏的急性毒性及2种代谢酶活性的影响

采用静水法模拟养殖水体中氨氮胁迫,研究氨氮对中华鳑鲏(Rhodeus sinensis)的急性毒性效应;测定血清中2种代谢酶类(过氧化氢酶和碱性磷酸酶)的酶活性。结果表明在水温25℃,pH 7.4时,氨氮24 h的半致死浓度(LC_(50))为263.28 mg/L,高于斑马鱼(Barchydanio rerio var)、鳜(Siniperca chuatsi);氨氮暴露试验表明氨氮浓度和暴露时间均会对2种酶活性造成显著影响,并且两者之间存在交互作用;中华鳑鲏在短时间内对高浓度氨氮刺激具有一定的耐受性,但随着暴露时间延长,氨氮对机体的免疫系统会产生抑制作用。

戊二醛和苯扎溴铵对中华鰟鮍的急性毒性

为了检测戊二醛和苯扎溴铵两种消毒剂对中华鰟鮍疾病防治的效果,采用半静水式生物测试法测定了戊二醛和苯扎溴铵对中华鰟鮍的急性毒性效应。结果表明:戊二醛(含量25%)对中华鰟鮍24h、48h、72h和96h的LC50分别为110.40μL/L、81.29μL/L、73.28μL/L和70.80μL/L,安全浓度为13.22μL/L;苯扎溴铵(含量45%)对中华鰟鮍24h、48h、72h和96h的LC50分别为5.23μL/L、4.69μL/L、4.22μL/L、3.93μL/L,安全浓度为1.13μL/L。戊二醛对中华鰟鲏为低毒药物,苯扎溴铵为中等毒性药物,二者的常用浓度均低于安全浓度,适合作为中华鰟鲏疾病防治的药物。

中华鳑鲏皮肤细胞的分离及其细胞系的建立

采用对传统酶消化法稍进行改进建立了中华鳑鲏皮肤细胞的分离方法,获得RSDCs株(系)以便用于后续关于中华鳑鲏体色细胞研究。结果显示,对中华鳑鲏抑菌暂养8~24 h后,0.25%胰酶—EDTA消化处理3~5 min,用手术刀片顺鳞片方向刮除鳞片,在体式显微镜下解剖获得鱼类皮肤,采用IV型胶原酶—胰酶联合消化皮肤获得单细胞;获得的RSDCs于28°C,5%CO_2条件下进行培养,采用血球计数板计数法测定绘制了RSDCs生长曲线;采用RT-PCR的方法检测RSDCs F_0、F_5和F_(10)上皮标记物(Keratin 18和Vinculin A)和内皮标记物(Collagen I)的表达情况。成功分离获得RSDCs细胞株(系);RSDCs以1×10~4个/cm^2接种,倍增时间为30 h左右,呈典型的"S"型,与贴壁细胞的体外增殖行为一致;RT-PCR结果显示,随着传代次数的增加上皮标记物表达呈现下降趋势,而内皮标记物表达呈上升趋势。研究表明,改良的酶消化法能够成功分离获得RSDCs株(系);获得RSDCs体外培养生长曲线呈典型的"S"型,与贴壁细胞的体外增殖行为一致;分离获得RSDCs由上皮细胞和内皮细胞构成,但随着传代次数的增加,上皮细胞所占的比重越来越小。

伊维菌素和阿维菌素对中华鰟鮍的急性毒性效应

[目的]探讨伊维菌素和阿维菌素对中华鰟鮍(Rhodeus sinensis Gunther)的急性毒性效应。[方法]采用急性毒性试验方法测定了伊维菌素、阿维菌素2种常见杀虫药对中华鰟鮍的半致死浓度(LC50)及安全浓度。[结果]含量为6%的伊维菌素对中华鰟鮍的24、48、72、96 h LC50分别为71.68、45.04、37.81、35.69μg/L,安全浓度为0.001 3μg/L;含量为1%的阿维菌素对中华鰟鮍的LC50分别为129.35、77.35、47.54、34.63μg/L,安全浓度为0.000 2μg/L。[结论]中华鰟鮍对伊维菌素和阿维菌素2种大环内酯类杀虫药较敏感,在使用过程中要注意用量,否则极易出现药害。

中华鳑鲏两性形态特征和雌性成体生育力

测定了中华鳑鲏(Rhodeus sinensis)繁殖期形态特征的两性异形和雌性成体生育力。结果表明:雄性成体的体长和体重均显著大于雌性成体(P<0.05);雌性成体的平均成熟系数极显著大于雄性成体(P<0.01),而雌性成体的平均肥满度则显著小于雄性成体(P<0.05);体重/体长、头宽/体长、背鳍基长/体长、胸鳍腹鳍间距/体长和消化道长/体长的比值在雌性成体和雄性成体之间差异显著(P<0.05);体侧中央纵带长/体侧中央纵带宽的比值在雌性成体与雄性成体之间差异极显著(P<0.01)。雌性成体平均每尾绝对怀卵量为127粒(74～238粒),平均每尾怀有6粒(3～9粒)成熟卵,成熟卵的直径为0.14 cm。中华鳑鲏雌性成体的怀卵数量与其体长和体重存在着显著的相关关系,雌性通过个体大小特别是体重的增长以及体长的增加来提高个体生育力,增加繁殖输出。

中华鳑鲏的生物学特性及人工养殖技术

总结了中华鳑鲏的生物学特性和人工养殖技术要点。雄鱼体色艳丽,具有较高观赏价值,是我国著名的原生观赏鱼类。雌鱼体色相对较暗,产卵时伸出产卵管,将卵产于河蚌鳃腔进行孵化。中华鳑鲏人工养殖需放养5~8 cm宽的背角无齿蚌或圆顶珠蚌以利于其繁殖。苗种放养密度为水面放养0.5 cm左右的新孵苗种60万尾/hm2,放苗前用5 mg/L的高锰酸钾水浸泡消毒5 min,能显著提高放养成活率,小瓜虫、车轮虫等寄生虫病采用5~10μg/L的阿维菌素或伊维菌素杀虫能起到良好的治疗效果。

基于高通量测序的中华鳑鲏基因组微卫星特征分析及标记开发

利用Illumina Miseq测序技术,对中华鳑鲏基因组文库进行测序,查找基因组微卫星(SSR)位点并分析其组成,共检测到249 167个SSR位点,1～6核苷酸重复SSR均存在,其中二核苷酸重复SSR数量最多(53. 59%),其次为单核苷酸重复SSR(34. 19%),其他数量由多到少依次为三核苷酸、四核苷酸、五核苷酸和六核苷酸重复。随机选择50个SSR位点利用8份中华鳑鲏DNA样品进行验证,有41个位点能检测到扩增产物,其中28个位点扩增产物带型清晰且具多态性,利用上述多态性SSR标准检测泰州地区中华鳑鲏多态性。结果表明,有21个SSR标记扩增产物稳定,每个位点观测到等位基因3～13个,观测杂合度、期望杂合度分别为0. 306 7～0. 914 5、0. 384 5～0. 952 1,多态性信息含量为0. 317 3～0. 910 5,各位点间不存在连锁不平衡现象。说明利用Illumina Miseq测序技术开发中华鳑鲏SSR标记效率高,开发的标记适用中华鳑鲏资源评估。

3种重金属离子对中华鳑鲏鱼的急性毒性及安全浓度研究

[目的]找出Hg2+、Cu2+和Cd2+3种重金属离子对中华鳑鲏鱼(Rhodens sinensis Gunther)的急性毒性效应和安全浓度。[方法]采用静水生物法研究了Hg2+、Cu2+和Cd2+对中华鳑鲏鱼的急性毒性作用,采用概率单位-对数图解法计算了3种重金属离子对中华鳑鲏鱼24、48、72、96h的半致死质量浓度(LC50)。[结果]Hg2+和Cu2+对中华鳑鲏鱼的毒性较强;Cd2+对中华鳑鲏鱼的毒性相对较弱。3种金属离子的毒性大小顺序为:Hg2+>Cu2+>Cd2+,它们对中华鳑鲏鱼24h的LC50分别为0.222、0.344和10.360mg/L,48h的LC50分别为0.215、0.279和8.820mg/L,72h的LC50分别为0.204、0.256和7.910mg/L,96h的LC50分别为0.193、0.236和7.270mg/L,安全浓度分别为0.00193、0.00236和0.07270mg/L。[结论]中华鳑鲏鱼对Cd2+有较强的耐受力,对Cu2+比较敏感。

高锰酸钾和三氯异氰尿酸对中华鳑鲏的急性毒性作用

采用半静水式生物测试法测定了高锰酸钾和三氯异氰尿酸2种消毒剂对中华鳑鲏的急性毒性作用。结果显示,高锰酸钾对中华鳑鲏24、48、72、96 h的LC50分别为2.56、2.11、1.69、1.60 mg/L,安全浓度为0.43 mg/L;有效氯含量为61%的三氯异氰尿酸对中华鳑鲏24、48、72、96 h的LC50分别为6.84、5.75、5.55、5.30 mg/L,安全浓度为1.21 mg/L。结果说明中华鳑鲏对高锰酸钾较敏感,对三氯异氰尿酸具有一定耐受力,三氯异氰尿酸连续用药对其影响不大,因此在对中华鳑鲏养殖水体及鱼种消毒时采用三氯异氰尿酸比高锰酸钾更安全。

甲基睾酮对中华鳑鲏体色的影响

为探索甲基睾酮对中华鳑鲏体色的影响,分别将50日龄和80日龄中华鳑鲏各分6组,每组重复,随机分别养在24个相同规格、容积为0.5 m3的循环水养殖缸内,每缸放养80尾。对照组(Control)投喂不添加甲基睾酮(17α-MT)的基础饲料,处理组(TG1、TG2、TG3、TG4、TG5)分别投喂17α-MT含量为10、20、30、40、50 mg/kg的试验饲料。试验时间56 d,期间对试验鱼的体色及肌肉中所沉积的类胡萝卜素进行比较研究。结果表明,17α-MT添加量40、50 mg/kg的饲料组对50日龄中华鳑鲏色素沉积明显(P<0.05),80日龄的中华鳑鲏各处理组与对照组差异不显著(P<0.05)。17α-MT添加量在30 mg/kg以上,50日龄的中华鳑鲏体色明显开始起效,效应时间需28 d,80日龄中华鳑鲏各处理组与对照组差异不显著。

维生素B_1、B_6对中华鳑鮍抗缺氧能力的影响

目的探讨维生素B1、维生素B6对中华鳑鮍抗缺氧能力的影响。方法把中华鳑鲏放在加入不同浓度的维生素B1、维生素B6的水溶液中进行密闭缺氧实验。结果实验证明,在19～20℃水温下,适量的维生素B1和维生素B6水溶液均能延长中华鳑鲏在密闭缺氧条件下的存活时间。维生素B1在浓度为0.937 5,2.5 g.L-1时达到显著差异(P<0.05),在浓度为1.25、1.562 5和1.875 g.L-1时达到极显著差异(P<0.01);维生素B6在浓度为1.562 5、2.5 g.L-1时达到显著差异(P<0.05),在浓度为1.875 g.L-1时达到极显著差异(P<0.01)。而超过2.5 g.L-1的维生素B1、维生素B6反而会缩短中华鳑鮍的缺氧存活时间。结论给予中华鳑鮍0.312 5～2.500 0 g.L-1维生素B1或0.937 5～2.5000 g.L-1维生素B6均可显著增强其抗缺氧能力。

不同产地银杏叶水浸液对中华鳑鲏耐缺氧能力的影响

为探讨不同产地（成都、昆明、西安、银川）银杏叶水浸液对中华鳑鲏耐缺氧能力的影响,把中华鳑鲏分别放在不同产地不同剂量银杏叶水浸液中进行密闭缺氧试验.结果表明：在水温17～18℃条件下,加入银杏叶水浸液均能延长鳑鲏在密闭缺氧条件下的存活时间,成都银杏叶各剂量组（0.27～1.67 g/L）均极显著延长了鳑鲏的存活时间（P＜0.01）,昆明银杏叶各剂量组（0.27～1.67 g/L）均显著延长了鳑鲏的存活时间（P＜0.05）,西安、银川银杏叶各剂量组缺氧存活时间均比对照组长,但差异均不显著（P＞0.05）.说明,不同产地的银杏叶在增强中华鲂鲏耐缺氧能力方面存在差异,成都、昆明银杏叶优于西安、银川银杏叶.

维生素C和牛磺酸对中华鳑鲏抗缺氧能力的影响

目的探讨维生素C、牛磺酸对中华鳑鲏抗缺氧能力的影响。方法在水中溶氧量一定的条件下,将中华鳑鲏分别放在不同质量浓度的维生素C、牛磺酸水溶液中进行常压密闭缺氧实验。结果实验显示,在17～18.5℃水温下,不同质量浓度的维生素C水溶液均可延长中华鳑鲏的缺氧存活时间,其中4.5g.L-1剂量组差异有统计学意义(P<0.05);不同质量浓度的牛磺酸水溶液均可延长中华鳑鲏的缺氧存活时间,其中10g.L-1剂量组差异有统计学意义(P<0.05),5g.L-1剂量组差异有统计学意义(P<0.01)。结论一定剂量维生素C、牛磺酸能显著增强中华鳑鲏的抗缺氧能力。

亚硝态氮对中华鳑鲏的急性毒性及短期影响

静水试验条件下研究了亚硝态氮对体质量(0.636±0.09) g的中华鳑鲏急性毒性及短期胁迫下对其体内两种酶活性的影响。在水温25℃、溶解氧6.3 mg/L、pH 7.4时,测定亚硝态氮对中华鳑鲏的24 h半致死质量浓度,并设置高、中、低3个亚硝态氮质量浓度组[1.28、0.64、0.43 mg/L(1/10×24 h半致死质量浓度、1/20×24 h半致死质量浓度、1/30×24 h半致死质量浓度)],于0、24、48、72 h采集血样,测定血清中过氧化氢酶和碱性磷酸酶的活性。试验结果表明,亚硝态氮对中华鳑鲏的24 h半致死质量浓度为12.76 mg/L。在亚硝态氮胁迫作用下,中华鳑鲏血清中过氧化氢酶活性先显著上升,48 h后开始下降;碱性磷酸酶活性变化则是先显著下降,在48 h恢复,然后再下降。碱性磷酸酶活性在24 h和72 h均受到明显抑制。亚硝态氮质量浓度和暴露时间两者之间存在显著交互作用,碱性磷酸酶可以作为亚硝态氮毒性检测的生物标记物。

中华鳑鲏精子超低温冷冻保存

对中华鳑鲏精子超低温冷冻保存技术进行探究,评估了精子在激活后活力随时间的延长而变化趋势;选取5%、10%、15%3种浓度二甲基亚砜(DMSO)作为冷冻保护剂,分别评估精子在液氮液面上方不同高度、不同保持时间情况下冷冻后解冻精子的动性,筛选出该条件下较优的冷冻方法。结果表明,中华鳑鲏精子用10%DMSO在液氮上方5 cm处、保持5 min后转入液氮中冷冻后解冻精子可以保持较好活力。该研究为中华鳑鲏精子冷冻保存提供一种可行的方法,为进一步优化冷冻保存技术提供参考。

中华鳑鲏室内水泥池人工繁育技术

为了探索中华鳑鲏种质资源保护和开发问题,2014~2015年开展了中华鳑鲏室内人工繁育技术的研究。将人工繁殖的中华鳑鲏幼鱼经室内水泥池养成后作为亲本,分4批进行人工繁殖。试验结果：获得中华鳑鲏苗种10500尾,2014年培育夏花鱼种5500尾,培育成活率73.3%。

白洋淀中华鳑鲏的生物学特性

对白洋淀野生中华鳑鲏Rhodeus sinensis Gunther的生物学特性进行了研究。发现其种群仅由Ⅰ龄鱼构成;体长与体重关系式为W=0.021L2.714、生长良好;雌鱼的平均肥满度为1.12、雄鱼则为1.20;中华鳑鲏为杂食性鱼类;属分批产卵型鱼类;标本雌雄性比为1∶1.22;雌鱼平均绝对生殖力为93枚,平均相对生殖力为270枚/g。

生物操纵对常见底栖丝状绿藻的控制研究

为调控水体丝状绿藻的生长,提供安全高效的绿藻暴发解决方案,通过操纵水体中不同的生物种类,探究水生动物对底栖丝状绿藻生长的抑制效果。控制实验Ⅰ研究了耳萝卜螺(Radix auricularia)、子陵吻鰕虎鱼(Rhinogobius giurinus)、中华鳑鲏(Rhodeus sinensis)和日本沼虾(Macrobrachium nipponense)对底栖丝状绿藻水绵(Spirogyra sp.)的控制效果;控制实验Ⅱ研究了中华鳑鲏对水绵、水网藻(Hydrodictyon reticulatum)、刚毛藻(Cladophora sp.)生长的抑制效果。结果表明,中华鳑鲏实验Ⅰ处理组的固着态水绵生物量从实验前期的90 g/m^(2)下降到实验末期的34 g/m^(2),相对于其他生物操纵对象,中华鳑鲏对浮游态和固着态水绵表现出极显著的抑制效果(P<0.01);中华鳑鲏实验Ⅱ处理组中,固着态水绵生物量显著低于对照组(P<0.05),固着态水网藻生物量和固着态刚毛藻生物量均略低于对照组,但差异不显著(P>0.05),也表明中华鳑鲏对底栖丝状绿藻的抑制效果,特别是对水绵具有显著的抑制效果。中华鳑鲏在抑制底栖丝状绿藻生长的同时,对水体中其他浮游植物和浮游动物的影响并不显著(P>0.05),表明中华鳑鲏作为控制丝状绿藻的潜在生物操纵对象具有很好的应用前景。

大苞雪莲对中华鳑鲏耐缺氧能力的影响

在缺氧水中，把中华鳑鲏分别放在不同剂量的大苞雪莲水溶液中进行密闭缺氧试验，观察中华鳑鲏的存活时间，探讨大苞雪莲对中华鳑鲏耐缺氧能力的影响。结果显示，在13～16℃水温下，不同剂量的大苞雪莲水溶液均可延长中华鳑鲏的存活时间，有的剂量达到显著效果（P＜0．05）或极显著差异（P＜0．01）。说明一定剂量的大苞雪莲水溶液可显著提高中华鳑鲏的耐缺氧能力。

铅、镉污染对中华鳑鲏鱼的急性毒性效应

本试验以野生中华鳑鲏鱼为试验对象,采用静水生物测试法研究了铅、镉单一污染物对中华鳑鲏鱼体的急性毒性效应,确立了铅和镉对中华鳑鲏鱼的24h、48h、72h、96h的半致死浓度。