中华鳖病毒感染宿主的细胞病理学研究

中华鳖病毒（Ｔｒｉｅｎｙｘｓｉｎｅｎｓｉｓｖｉｒｕｓ，ＴＳＶ）经人工感染可引起健康中华鳖发病和死亡。对病鳖组织细胞的超微结构观察，同时见有以染色质高度凝集和边缘化、核碎裂并形成“凋亡小体”等表现有典型的类似于细胞凋亡（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）形态变化的细胞，和以核膜崩解、线粒体外膜膨大、细胞膜破裂、细胞质严重液泡化等表现为坏死（ｎｅｃｒｏｓｉｓ）性变化的细胞。ＤＮＡ片段化分析表明，感病鳖组织细胞的ＤＮＡ发生了严重的片段化，且以肝组织细胞的ＤＮＡ片段化最为严重。研究揭示，中华鳖病毒导致宿主死亡同时存在凋亡和坏死两种细胞病变机制。

中华鳖病毒和克氏原螯虾白斑综合征病毒危害机理和集成防治

由于集约化养殖的快速发展,病害频繁发生,特别是近年来暴发的按常规方法难以控制的突发性中华鳖病毒(trionyx sinesis virus,TSV)和克氏原螯虾白斑综合征病毒(white spot syndrome virus,WSSV)感染,使水产业蒙受较大的经济损失。主要对中华鳖病毒和克氏原螯虾白斑综合征病毒的危害机理和集成防治进行了阐述,以期为有效防治上述2种病毒的感染提供参考。

中华鳖病毒的血清学检测

中华鳖病毒（ＴＳＶ）是从病鳖中分离到的一种病毒病原。经细胞培养和差异离心制备ＴＳＶ抗原，肌注家兔获 ＴＳＶ抗体（ＴＳＶ－Ａｂ），中和效价为 １：２０。用 ＴＳＶ－Ａｂ进行双向免疫扩散和间接ＥＬＩＳＡ检测，被检样品有健康和病鳖组织匀浆液、ＴＳＶ细胞培养液、提纯的ＴＳＶ，以及鱼传染性胰脏坏死病毒（ＩＰＮＶ）、草鱼呼肠孤病毒（ＧＣＶ）、鱼病毒性出血败血症病毒（ＶＨＳＶ）、鲤痘疮病毒（Ｃａｒｐ ｐｏｘ ｖｉｒｕｓ）和斑节对虾杆状病毒（ＭＢＶ）。检测结果显示：ＩＰＮＶ、ＧＣＶ、ＶＨＳＶ、Ｃａｒｐ ｐｏｘ ｖｉｒｕｓ、ＭＢＶ和健康中华鳖的组织匀浆液与ＴＳＶ－Ａｂ呈阴性反应；而感病中华鳖组织匀浆液、ＴＳＶ感染的细胞提取液与ＴＳＶ—Ａｂ呈阳性反应。

中华鳖病毒(TSV)的致病性及其电镜观察

本文应用流行病学调查方法和电镜超薄切片技术．对福建省4个中华鳖养殖场的病毒件传染病进行观察，发现在病鳖肝细胞中的中华鳖病毒（TSV）是导致幼鳖大批死亡的主要致病原．还讨论了该病毒的超微结构以及对宿主细胞的损害情况。

蛙虹彩病毒巢式PCR检测方法的建立

蛙虹彩病毒属(Ranavirus)病毒宿主广泛,可以感染爬行类、鱼类和两栖类,大部分病毒对宿主都有较强的致病性和致死性。为建立一种快速高效的蛙虹彩病毒的检测方法,本研究利用中华鳖虹彩病毒(Soft-shelled Turtle Iridovirus,STIV)核衣壳蛋白(Major Capsid Protein,MCP)基因保守区设计内引物和外引物,建立了特异性检测流行性造血器官坏死病毒(Epizootic Haematopoietic Necrosis Virus,EHNV)、中华鳖虹彩病毒和虎纹蛙虹彩病毒(Tiger Frog Virus,TFV)的巢式PCR(巢式PCR)检测方法,并制备了重组质粒pGem-T-S作为阳性对照标准品。检测限试验结果显示,该方法可以检测102拷贝的病毒粒子。而且与传染性造血器官坏死病毒、鲤春病毒、病毒性出血性败血症病毒、斑点叉尾病毒、传染性胰脏坏死病毒、真鲷虹彩病毒、牙鲆弹状病毒以及锦鲤疱疹病毒等其他非蛙虹彩病毒无交叉反应。该体系具有简便、快速、敏感、特异性高、低成本等特点,为诊断与预防蛙虹彩病毒提供了一项重要的技术手段。

HRCA技术检测中华鳖虹彩病毒

【目的】中华鳖虹彩病毒(STIV)是甲鱼重要的病毒性病原之一,建立特异性好、灵敏度高的中华鳖虹彩病毒超分支滚环扩增体系(HRCA),对STIV进行快速、准确地检测。【方法】根据中华鳖虹彩病毒(STIV)独有的基因序列和锁式探针公共连接序列分别设计特异性的锁式探针及其扩增引物,对HRCA的系列反应条件进行优化,验证该方法的特异性和灵敏度,并用该方法对感染STIV显症和未显症的甲鱼组织进行检测。【结果】10 nmol/L探针经T4 DNA连接酶作用20 min环化,Bst DNA聚合酶大片段扩增20 min即可获得很好的检测效果。特异性试验表明,在多种待检病毒样中,HRCA能特异地检测出STIV,同时HRCA具有极高的灵敏度,能检测出的最低模板量为101拷贝,而常规PCR的检测下限为103拷贝,对显症和尚未显症的感染早期甲鱼组织的检测结果均为阳性。【结论】建立的中华鳖虹彩病毒HRCA检测体系具有灵敏、快速、简便等特点,能从组织样品中准确地检测出STIV,可以用于该类疾病的早期诊断,具有较好的推广前景。

开春后有效防治甲鱼疾病的措施

开春后,在水温回升至18℃—25℃时,甲鱼容易发生氨中毒、钟形虫病、红脖子病、腐皮病和水霉病等。如若治疗不及时,会造成多数甲鱼继发感染鳃腺炎病,危害颇大。实践表明,若采取如下措施,即会有效地防治甲鱼疾病:——在水温上升至15℃以上时。