中压液相色谱快速分离纯化Kluyveromyces fragilis β-D-半乳糖苷酶

应用AKTA explorer 100型中压液相色谱快速纯化工艺,系统分离纯化了脆壁克鲁维酵母(Kluyveromyces fragilis)β-D-半乳糖苷酶。K.fragilis发酵生产的菌体细胞经过破碎、离心后的上清液中含有K.fragilis β-D-半乳糖苷酶。粗酶经过AKTA explorer 100中压液相色谱的HiprepR16/10 Source 30Q强阴离子交换柱和Hioad26/60 Superdex凝胶过滤色谱连续两步纯化,酶的回收率为27%,纯化倍数为42。纯化的K.fragilis β-D-半乳糖苷酶在垂直板十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)上,呈现一条染色谱带,表明纯化的酶具有较高的纯度。K.fragilisLFS-8611 β-D-半乳糖苷酶相对分子质量约为60000。

黑豆皮花色苷的中压液相色谱制备及结构鉴定

以黑豆皮为实验材料,用乙醇浸提法对黑豆皮中的花色苷进行提取,用大孔吸附树脂对花色苷进行纯化,经冷冻干燥得到黑豆皮花色苷粗品。利用中压制备色谱对花色苷组分进行分离,通过质谱分析鉴定经中压制备色谱分离后的花色苷组分。结果表明:黑豆皮花色苷粗品中的总花色苷含量为26.9%,经中压制备色谱对花色苷粗品进行分离后的2峰中矢车菊素-3-葡萄糖苷纯度达到91.46%。黑豆皮中的主要花色苷为天竺葵素-3-O-芸香糖苷、芍药色素-3-O-葡萄糖苷、矢车菊素-3-O-葡萄糖苷和锦葵素-3-葡萄糖苷-4-乙醛。

利用中压制备液相色谱从蓝莓叶多酚中分离纯化绿原酸

该研究以蓝莓叶为试验材料,采用超声辅助纤维素酶的方法获得蓝莓叶多酚粗提物,然后利用中压制备液相色谱技术对粗提物进行分离纯化,分别考察不同流动相、进样量、流动相流速对绿原酸得率的影响。结果表明,最佳制备条件为乙腈-水溶液为流动相、进样量6 mL、流动相流速10 mL/min,在此条件下,绿原酸得率为21.39%。经高效液相色谱分析,得到的绿原酸纯度可达94.98%。该方法能够快速、高效地分离蓝莓叶中的绿原酸。该方法为研究和应用蓝莓叶中活性成分提供了一种有效的手段。

中压液相色谱与大孔树脂联用纯化蓝莓果渣中花色苷

采用大孔树脂及中压液相色谱对蓝莓果渣酸乙醇提取液中花色苷进行纯化。结果表明:AB-8大孔树脂具有较好的吸附解吸特性,适合蓝莓果渣花色苷的初级纯化。最佳吸附条件为上样溶液浓度0.8 mg/mL,最佳吸附pH2.0,上样速率1.0 mL/min;最佳解吸条件为乙醇体积分数60%,解吸pH1.0,洗脱速率1.0 mL/min。经大孔树脂纯化,其纯度为38.49%。然后经中压液相色谱纯化,花色苷纯度提高到94.42%。此法简便、高效,能制得高纯度的花色苷。

中压制备液相色谱快速分离制备儿茶素单体

以反相中压制备液相色谱为工具,甲醇-水作为洗脱溶剂,通过C18(ODS-AQ)填料从茶多酚中一步分离出表没食子儿茶素(EGC)、表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、表儿茶素(EC)、表儿茶素没食子酸酯(ECG)等四种儿茶素单体。1.0 g纯度为92.6%的茶多酚经过中压色谱,制备得到了90 mg EGC、355 mg EGCG、23 mgEC和92 mg ECG,它们的纯度分别为91.8%、97.6%、97.7%、99.3%,纯品得率56.0%,四种单体总回收率达到68.2%。四种儿茶素单体的结构经核磁共振氢谱、碳谱以及高分辨质谱加以确证。

利用中压制备液相色谱从桑葚中快速制备矢车菊素-3-葡萄糖苷单体

单体花色苷的快速大量制备长久以来是花色苷产业化中的难题,而中压制备液相色谱在产业应用中有着很大的开发空间。选取花色苷组分较单一的桑葚为实验原料,经提取分离总花色苷后使用填装有反相C18填料的耐压玻璃柱作为中压制备液相色谱柱,纯化制备矢车菊素-3-葡萄糖苷单体。结果显示:3个色谱分离峰中目的峰(峰2)经高效液相色谱和质谱确证为由矢车菊素-3-葡萄糖苷(cyanidin-3-glucoside,C3G)和矢车菊素-3-芸香糖苷(cyanidin-3-rutinoside,C3R)组成,采用峰面积归一化法计算得到C3G纯度为73.56%;通过对峰2采用切割方式进行收集,C3G纯度达到98%以上,单次收集到C3G单体溶液650 mL。中压制备液相色谱法单次上样量大、步骤简洁、成本低廉,可为矢车菊素-3-葡萄糖苷单体的规模化生产提供一定的参考。

连翘酯苷A中压快速制备工艺的优化

为获得一种易操作、高效、高纯度的连翘酯苷A制备工艺,以聚酰胺和MDS-5为分离材料,采用单因素多水平试验的方法考察上样量、上样浓度、洗脱流速等因素对连翘酯苷A得率和纯度的影响,优化两步柱分离纯化工艺条件。试验结果表明,以聚酰胺为分离材料可获得连翘酯苷A含量为50%的产物,产物以MDS为分离材料进一步分离可获得连翘酯苷A含量为90%的产物。本方法具有分离效率高、溶剂毒性小等优点,是一种获得高含量连翘酯苷A的简便、高效、经济的方法。

卷烟爆珠溶剂中链甘油三酯的分离与鉴定

为明确卷烟爆珠常用溶剂中链甘油三酯(MCT)的化学组成,利用GC/MS法对3种市售MCT和7种爆珠卷烟的爆珠溶剂进行了定性分析,利用中压制备液相色谱-紫外检测技术分离制备了MCT中极性相近的4个组分,并通过对各个组分的化学表征确定了其成分信息。结果表明:(1)卷烟爆珠溶剂与市售MCT的主要化学成分一致。(2)收集的4个组分的质量总和占MCT产品的92%。(3)通过核磁共振与质谱比对,4个组分及其占MCT产品的质量分数分别为三辛酸甘油酯22.8%、二辛酸一癸酸甘油酯37.9%、一辛酸二癸酸甘油酯25.5%和三癸酸甘油酯5.8%。

几种常用分离提取设备的分离提取技术

介绍了植物源农药开发过程中常用的几种分离提取仪器设备,即索式提取器、闪式提取器、旋转蒸发仪和中压液相制备色谱。分别从仪器使用范围、组成、原理、基本操作和使用注意事项等方面做了详细介绍和分析,并针对经典提取分离路线的不足,提出了两条快速、安全且能高效提取植物中活性物质的分离提取路线。