中国92例HIV／AIDS患者HIV-1gp412F5和4E10中和抗体表位变异研究

目的探讨92例HIV／AIDS患者HIV-1病毒近膜端（membrane proximal external region，MPER）中和抗体2F5和4E10保守表位ELDKWA、NWFDIT氨基酸变异特点，为中国HIV／AIDS患者免疫治疗以及疫苗设计提供数据。方法Nest-PCR扩增HIV-1env区gp41段基因，核酸序列测定，翻译为氨基酸与HIV-1Sequence Database HXBⅡ参考株中和抗体表位数据比对，分析2F5、4E10中和表位氨基酸变异情况。结果92例HIV／MDS患者HIV-1外膜蛋白env gp41段中和抗体2F5、4E10保守表位氨基酸均存在突变；2F5中和抗体表位主要有E662A（14．1％）、K665S（17．4％）、A667K（16．3％）突变；4E10中和抗体表位主要有N671S（13．0％）、D674S（3．3％）、T676S（16．3％）突变；CRF_B’C亚型与B’亚型的2F5和4E10表位氨基酸突变差异具有统计学意义（P〈0．05）；CRF—B’C与CRF01_AE亚型2F5表位突变差异具有统计学意义（P〈0．05）；B’亚型缓慢进展者、HIV感染者和MDS患者的4E10表位氨基酸突变差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论92例HIV／AIDS患者HIV-1包膜蛋白env gp41段中和抗体2F5、4E10中和表位氨基酸存在突变，且变异多样化；不同亚型中和抗体保守表位氨基酸位点变异有差异；B’亚型4E10中和抗体表位变异可能与疾病进展有一定联系。

D8L区功能性缺失降低重组痘苗病毒载体自身免疫原性

目的以痘苗病毒中和抗体表位D8L区为重组位点进行外源基因替换,从而降低载体自身免疫原性。方法通过同源重组技术,插入表达流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)序列,对D8L区进行替换,构建重组痘苗病毒流感疫苗,同时以表达相同HA的TK区重组痘苗病毒疫苗为对照。Western blot对HA的表达进行验证;小鼠实验、ELISA、血凝抑制试验检测每次免疫后2周的血清抗体效价,攻毒保护试验评价重组痘苗病毒的保护效力。结果Western blot表明构建的重组疫苗均能正确表达HA D8L蛋白。ELISA、血凝抑制试验显示,初次免疫后,D8L区突变的重组痘苗病毒疫苗HA抗体效价略高于TK区突变的重组疫苗,并随着免疫次数的增多差异有统计学意义(P<0.05);其免疫原性显著低于TK区突变的重组疫苗(P<0.05),随着免疫次数增加,二者差异无统计学意义(P>0.05)。H1N1pdm攻毒后保护效力评价结果显示,D8L区突变组可完全清除病毒,且小鼠肺部炎症水平更低、组织损伤更少。结论通过将外源基因插入到痘苗病毒载体中和抗体表位D8L区,有助于降低载体自身的免疫原性,并提高外源基因的免疫原性,为痘苗病毒载体在疫苗或基因治疗领域作为递送工具提供了参考。