硫芥对中国仓鼠肺成纤维细胞DNA的损伤及还原型谷胱甘肽的保护作用

目的 研究硫芥对中国仓鼠肺成纤维细胞（Chinese hamster fibroblast cell line，CHL）DNA的损伤作用及还原型谷胱甘肽（reduced glutathione，GSH）的保护作用。方法 将CHL分为2组，均以10、100、1000μmol／L硫芥染毒，其中1组以10mmol/L的GSH加以保护，分别在不同时间点（即刻，6、24、48、72 h）收集细胞进行单细胞凝胶电泳（single cell gel electrophoresis assay，SCG）检测。结果 硫芥染毒组CHL的DNA迁移率和迁移度在染毒后6、24、48、72h均显著高于相应时刻的生理盐水组和溶剂对照组（P〈0．01）。GSH保护组DNA迁移率和迁移度亦显著增高（P〈0．01），但较之单纯硫芥染毒组DNA迁移率下降了13．0％-52．5％，迁移度亦显著下降。结论 硫芥对CHL的DNA有损伤作用，呈时间、剂量关系。GSH对DNA的损伤有一定保护作用。

纳米银对中国仓鼠肺成纤维细胞的细胞毒性和遗传毒性

目的:研究纳米银对中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL)的细胞毒性和遗传毒性并探讨其作用机制。方法:以梯度浓度(2.5、5.0、10.0、20.0、40.0和80.0μg/m L)纳米银染毒CHL细胞,MTT比色法计算IC5 0以评估纳米银的细胞毒性水平。利用PI染色分析细胞周期变化并计算细胞增殖指数;Annexin V-FITC和PI双染检测细胞凋亡和坏死发生率,同时观察细胞染毒后的形态变化,记录前向角散射(FSC)和侧向角散射(SSC)信号;Giemsa染色中期分裂相涂片分析染色体畸变发生率。结果:纳米银毒性水平与纳米银浓度呈正相关(r=0.804,P<0.05),IC 50为21.68μg/m L。22.0μg/m L纳米银与CHL细胞接触24 h后,细胞形态发生明显改变;细胞群SSC信号显著增强,为细胞摄入纳米银提供间接证据;细胞周期在G2/M期被捕获,对G0/G1期、S期以及细胞增殖指数变化情况影响显著(P<0.01);22.0μg/m L纳米银染毒CHL 24 h后凋亡发生率与对照组差异明显(P<0.01);各浓度纳米银诱导染色体结构畸变率均大于5%(P<0.01),中高浓度四倍体发生率达到溶剂对照组的10倍以上(P<0.01)。结论:纳米银对CHL细胞有显著的细胞毒性和遗传毒性,线粒体功能受损、细胞凋亡在纳米银的细胞毒性和遗传毒性中起到重要作用。

富勒烯对中国仓鼠肺成纤维细胞的氧化损伤作用

目的探讨富勒烯(C60)对中国仓鼠肺成纤维(CHL)细胞的氧化损伤作用。方法用不同浓度的C60(0、1.25、2.5、5、10、20和40μg/mL)染毒24 h,四甲基偶氮唑盐实验检测C60对CHL细胞的增殖抑制作用,并检测细胞内LDH释放率及SOD、CAT活性和GSH、MDA、ROS含量。结果 C60染毒组细胞生存率下降,10、20、40μg/mL C60染毒组细胞存活率与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。CHL细胞中LDH释放量上升,且各染毒组与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.01)。各染毒组随染毒浓度增加SOD、CAT活性降低,与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.01)。GSH含量降低,但仅C60 40μg/mL染毒组,与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。MDA含量增加,10、20、40μg/mL剂量组,与对照组比较差异均具有统计学意义(P<0.01)。ROS含量有不同程度的升高,与对照组相比差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论 C60可引起中国仓鼠肺成纤维细胞损伤,可能是通过氧化应激介导。

瓜蒌子饮片对中国仓鼠肺成纤维细胞体外遗传毒性研究

目的研究瓜蒌子体外遗传毒性,对瓜蒌子饮片安全使用提供借鉴。方法采用细胞活力试验、细菌回复突变试验和中国仓鼠肺细胞染色体畸变试验、微核试验对瓜蒌子水溶性浸出物进行体外遗传毒性安全性评估。结果细胞活力试验、细菌回复突变试验和中国仓鼠肺细胞染色体畸变试验、微核试验中各加药组细胞生长未受到显著影响,瓜蒌子水溶性浸出物遗传毒性与阴性对照组相比不具有显著差异。结论在测试条件下,瓜蒌子水溶性浸出物不具有显著的体外遗传毒性。

奥克托金对中国仓鼠肺成纤维细胞DNA的氧化应激损伤

目的了解奥克托金(HMX)对中国仓鼠肺成纤维细胞(V79细胞)的细胞毒性及DNA损伤作用。方法以体外培养V79细胞为研究对象,采用细胞增殖与毒性检测实验方法(CCK-8法)检测5个浓度(5、25、50、75、100 mg/L)HMX溶液染毒24 h对V79细胞的毒性作用;采用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)和Elisa方法进行3个浓度(50、75、100 mg/L)HMX溶液染毒24 h后致V79细胞的DNA损伤指标及氧化应激指标。结果与溶剂对照组比较,50、75、100 mg/L HMX染毒组V79细胞的存活率均降低,差异有统计学意义(P<0.05);且随着HMX染毒浓度的升高,V79细胞的存活率呈下降趋势。与溶剂对照组相比,50~100 mg/L HMX染毒组V79细胞的尾长、尾部DNA%、尾距和Olive尾距均增加,差异有统计学意义(P<0.05);且随着HMX染毒浓度的升高,V79细胞的尾长、尾部DNA%、尾距和Olive尾距均呈上升趋势。与溶剂对照组相比,75和100 mg/L的HMX显著增加了V79细胞的8-OHdG水平,差异有统计学意义(P<0.05);且随着HMX染毒浓度的升高,V79细胞的8-OHdG水平呈先上升后下降的趋势。与溶剂对照组相比,仅100 mg/L的HMX显著增加了V79细胞的ROS水平,差异有统计学意义(P<0.05);且随着HMX染毒浓度的升高,V79细胞的ROS水平呈先上升趋势。与溶剂对照组相比,75和100 mg/L的HMX显著增加了V79细胞的MDA水平,差异有统计学意义(P<0.05);且随着HMX染毒浓度的升高,V79细胞的MDA水平呈上升趋势。与溶剂对照组相比,各浓度HMX染毒组V79细胞的GSH水平均降低,差异有统计学意义(P<0.05);且随着HMX染毒浓度的升高,V79细胞的GSH水平呈下降趋势。与溶剂对照组相比,仅75 mg/L HMX染毒组V79细胞的SOD水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);且随着HMX染毒浓度的升高,V79细胞的SOD水平呈先下降后升高的趋势。结论在本实验条件下,HMX能够通过引起细胞氧化损伤诱导细胞毒性,明显抑制V79细胞增殖,导致DNA损伤。

甲基叔丁基醚诱导中国仓鼠肺成纤维细胞细胞周期改变及凋亡适应性反应

目的研究低剂量甲基叔丁基醚(MTBE)诱导中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL)的细胞周期改变及其对凋亡的适应性反应。方法实验设6个剂量组,每组3个平行样,分别用剂量为0、0.10、0.50、2.50、10.00 g/L的MTBE预处理CHL 6 h,并以等体积磷酸盐缓冲液为正常对照,用35.00 g/L的MTBE冲击染毒18 h,收集细胞,运用流式细胞仪碘丙锭(PI)单染术检测各剂量组细胞凋亡比例及细胞周期。结果 MTBE剂量高于30.00 g/L时,CHL的存活率明显下降,选取35.00 g/L的MTBE作为后续冲击染毒剂量。以0.50～10.00 g/L的MTBE预处理CHL 6 h后,可降低随后35.00g/L的MTBE导致的细胞凋亡率的增加,并使G2期阻滞减轻,细胞产生了适应性反应。结论 MTBE在0.50～10.00g/L可以诱导CHL对35.00 g/L剂量MTBE引起的凋亡产生适应性反应。

miR-208转染中国仓鼠肺成纤维细胞后炎症基因程序性细胞死亡因子-4表达的改变

目的研究miR-208转染中国仓鼠肺成纤维(CHL)细胞对炎症相关靶基因程序性细胞死亡因子-4(PDCD4)的调控作用。方法运用在线数据库Targetscan.org预测前期纳米二氧化硅经气管一次性灌注大鼠实验中筛选出差异表达上调miR-208可能调控的靶基因,并进行基因本体论(GO)分析,通过文献检索选择与炎症相关的靶基因为PDCD4;分别用miR-208模拟物、模拟物阴性对照转染CHL细胞,并设空白对照组(完全培养基),测定细胞增殖率和miR-208及PDCD4的mRNA表达水平及PDCD4蛋白的表达水平。结果预测miR-208可能调控的靶基因有146个。与空白对照组相比,转染后CHL细胞的增殖率差异无统计学意义(P>0.05),miR-208 mRNA的表达增加(P<0.01),PDCD4 mRNA和蛋白的表达无统计学意义(P>0.05)。结论在CHL细胞中未见miR-208对PDCD4有间接调控作用,是否存在直接调控作用有待进一步研究。

SO_2致CHL细胞氧化损伤及VC保护作用

目的探讨二氧化硫(SO2)对哺乳类细胞的毒性作用及其防护。方法以SO2体内衍生物-亚硫酸盐和亚硫酸氢盐(分子比为3∶1)及抗坏血酸(维生素C,VC)单独或同时处理中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL),并分别测定过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及脂质过氧化(LPO)水平。结果(1)SO2体内衍生物单独处理后,CAT活性在12,24 h时显著降低;36 h时,除5 mmol/L组外,其余各组均极显著降低;48 h时15,20 mmol/L组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。除12 h时的5 mmol/L组外,其余各组LPO水平在处理12,24 h时均明显升高。(2)VC单独处理后,各组CAT活性只在12 h时显著升高,同时LPO水平降低,但是只有0.10,0.25 mmol/L组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)0.1 mmol/L VC和不同剂量SO2衍生物共同处理后,CAT活性仍然呈下降趋势,但加添VC的组CAT活性普遍高于相应的未加VC组,且培养12 h的5,10 mmol/L组及24 h的10,15mmol/L组与未添加VC组比较,差异有统计学意义(P<0.05);VC也降低了SO2衍生物引起的LPO水平。(4)在CHL细胞中未检测到SOD。结论SO2体内衍生物可以使CHL细胞中CAT活性降低、LPO水平增高,且VC可起到一定防护作用。

藏药绿萝花彗星试验(SCGE)研究

研究藏药绿萝花的抗(致)突变作用,科学合理地利用藏药资源.根据遗传毒性研究试验组合原则和判定标准,以环磷酰胺、丝裂霉素C为阳性药物对照,采用单细胞凝胶电泳试验(彗星试验),研究不同剂量绿萝花对中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL) DNA的影响.结果显示,环磷酰胺、丝裂霉素C具有很强的致CHL细胞SCGE上升、HDNA下降、TDNA上升、TL和TM增加(超过40μm)的作用;生药浓度为0. 224 g/mL、0. 448 g/mL、0. 896 g/mL的绿萝花在分别染毒1次、2次和3次后对CHL细胞DNA无影响,对环磷酰胺和丝裂霉素C引起的DNA损伤无保护作用.研究表明藏药绿萝花无致基因突变作用,研究结果为绿萝花临床安全用药提供了科学依据.

丙烯腈对V_(79)细胞通透性、线粒体膜电位及超微结构的影响

目的观察丙烯腈(ACN)对中国仓鼠肺成纤维细胞株(V79)的毒性作用及对线粒体膜电位、生物膜的完整性和超微结构的影响,以探讨ACN的膜毒性。方法以离体培养的V79细胞为研究对象,台盼蓝染色法观察不同染毒剂量的细胞毒性;电镜技术观察细胞生物膜超微结构,应用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测线粒体膜电位、生物膜完整性。结果ACN染毒后,除1μmol/L组[(91.02±2.17)%]外,其余各处理组的细胞存活率与对照组的差异均有显著性(P<0.05);8、40、200、1 000、2 000、5 000μmol/L组线粒体膜电位改变率[(14.43±3.44)、(22.50±1.50)、(37.96±2.23)、(59.37±5.34)、(93.14±1.23)、(100.00±1.63)%]升高,与对照组[(7.84±0.61)%]的差异有显著性(P<0.05);另外V79细胞生物膜的完整性和超微结构亦发生变化。结论ACN能通过改变线粒体膜电位、膜通透性及超微结构诱导V79细胞生物膜损伤。

碲化镉量子点对CHL细胞染色体畸变作用研究

目的探讨碲化镉量子点(CdTe QDs)对中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL)染色体畸变作用。方法用体外方法检测CdTe QDs在1.6、3.2、6.3、12.6、25.2μl/ml染毒浓度范围内,在代谢活化条件下(+S9)及非代谢活化条件下(-S9)CHL细胞的染色体畸变率。结果 CdTe QDs的代谢活化组(+S9)在染毒浓度为2.6μl/ml和25.2μl/ml浓度组CHL细胞染色体畸变率与对照组比较,显著增加(P<0.01),染色体畸变类型主要是染色体断裂、交换和碎片等。结论 CdTe QDs在代谢活化条件下(+S9)可能导致CHL细胞染色体畸变。

二甲基甲酰胺对V79细胞的毒性作用

[目的]了解二甲基甲酰胺(DMF)对中国仓鼠肺成纤维细胞(V79细胞)的细胞毒性及DNA损伤作用。[方法]以体外培养V79细胞为研究对象,采用四氮唑盐比色分析法(MTT法)和单细胞凝胶电泳技术(SCGE)分别检测5个浓度(0.5、2.0、8.0、32.0、128.0mmol/L)DMF在3个时间段(6、12、24h)染毒后对V79细胞的毒性作用和DNA损伤情况。[结果]同一时间组V79细胞存活率随染毒浓度的增加而下降,与阴性对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05),存在明显的剂量-效应关系(6h:b=-0.002,P<0.05;12h:b=-0.003,P<0.05;24h:b=-0.003,P<0.05)。各染毒浓度组的彗星拖尾率、尾长、Olive尾距、尾部DNA百分含量,与同一时间阴性对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。[结论]本实验条件下,DMF能够明显抑制V79细胞增殖,存在正向的剂量-效应关系,并能引起DNA损伤。