中国健康人外周血中具有CD4^+CD25^(nt/hi)CD127^(lo)特征的调节性T细胞频率

目的:初步确定健康人外周血中具有CD4+CD25nt/hiCD127lo特征的调节性T细胞(Treg)频率,为临床相关疾病的研究及Treg的分选提供参考。方法:采集312名8~60岁(5个年龄组)、不同性别健康人的静脉血,经三重免疫荧光染色,用流式细胞术分析CD4+CD25nt/hiCD127loTreg细胞频率,并观察细胞内Foxp3转录因子的表达。结果:健康人CD4+CD25nt/hiCD127loTreg细胞在外周血中约占CD4+T细胞的(6.55±0.11)%,各年龄组之间有差异(P=0.015),组内性别之间也存在统计学意义(P<0.05);CD25nt/hiCD127lo细胞特异性地表达Foxp3转录因子。结论:初步确定了中国健康人外周血中具有CD4+CD25nt/hiCD127lo表达特征的细胞频率,为Treg细胞的临床研究奠定了基础;CD25nt/hiCD127lo作为CD4+CD25+Treg细胞表面的特征性标志,可在分选时排除其他细胞干扰,获得较完整的Treg细胞。

中国健康人血清游离表皮生长因子受体外显子18-22序列分析

目的分析中国健康人血清游离DNA中表皮生长因子受体（EGFR）外显子18～22基因序列是否存在突变，为监测EGFR酪氨酸激酶选择性抑制剂（EGFR TKIs）的临床疗效提供正常参考数据。方法采用高灵敏度DNA提取方法结合高保真巢式PCR和基因测序技术对42例中国健康人外周血血清游离DNA中EGFR TKIs作用靶点所在结构域即EGFR外显子18-22的基因序列和氨基酸序列进行分析。结果从外周血血清游离DNA中均扩增出EGFR外显子18～22的基因片段，片段大小（分别为400，374，404，408和419bp）与预期设计片段完全相符。健康人外周血游离DNA中存在EGFR基因突变，突变频率出现最多的是EGFR外显子20，41名健康人样本中有7例样本出现1处相同位点的沉默点突变（4838499G→A），其氨基酸序列（Glu）没有发生改变；EGFR外显子18也出现点突变，34名健康人样本中有1名健康者样本出现3处点突变，其中2处点突变（4830989 G→C；4831025 G→C）导致氨基酸序列发生改变（Glu→Gln；Ala-Pro），另外1处点突变（4831000 A→C）为沉默突变，其氨基酸序列（Thr）没有发生变化；EGFR外显子19、外显子21～22没有出现基因突变。结论通过巢式PCR结合基因测序可以分析外周血游离DNA中EGFR基因序列，健康人外周血游离EGFR外显予18和20存在基因点突变，其中外显子18的点突变导致了氨基酸序列改变。

HPLC法测定中国健康人血浆中依帕司他浓度及药动学研究

目的建立血浆中依帕司他的HPLC测定方法,研究依帕司他胶囊在中国健康男性的药动学特性。方法HPLC测定以地西泮作内标,测定20名健康志愿受试者口服50 mg依帕司他胶囊后血药浓度-时间过程。用非房室模型参数估算法计算药动学参数。 结果方法回收率大于90％,日内、日间变异系数均低于5％,线性范围20.2～8080 ng/ml(r=0.9996,n=5),最低检测浓度2ng/ml,符合生物样品的分析要求。 结论本研究建立的HPLC测定方法专属性较好,血浆中杂质不干扰样品的测定,适合于依帕司他的临床药动学研究。

低剂量替格瑞洛在中国健康人群中抗血小板有效性与安全性分析

目的探讨低剂量替格瑞洛在中国健康人群中抗血小板的有效性与安全性。方法随机选取20例健康受试者,其中,10例接受标准剂量替格瑞洛(标准剂量组),10例接受低剂量替格瑞洛(低剂量组)。所有受试者第1天接受负荷剂量,用药后0、0.5、1、2、4、8 h采血;第2天(24 h)、第3天(48 h)、第4天(72 h)接受维持剂量,用药前采血。应用Verify NowP2Y12系统进行血小板功能检测并观察两组受试者主要不良反应。结果用药后0、0.5、1、2、4、8、24、48及72 h,两组P2Y12反应单位(PRU)值与血小板聚集率差异无统计学意义(P>0.05)。用药后0.5 h,标准剂量组与低剂量组血小板聚集率分别为58.5%与53.9%;用药后2~4 h,标准剂量组与低剂量组血小板聚集率达到峰值,分别为98.7%与97.1%,且在8、24、48 h均维持在较高水平。受试者对替格瑞洛均耐受,无严重不良反应发生。标准剂量组出现2例轻微出血事件,低剂量组出现1例轻微出血事件,两组差异无统计学意义(P>0.05)。结论在中国健康人群中,低剂量与标准剂量替格瑞洛均有着较快、较强的血小板抑制作用,且不增加出血风险。

匹伐他汀钙片在健康人体内单、多剂量的药动学

目的研究匹伐他汀钙片在中国健康人体内的单、多剂量药动学。方法 30名健康志愿者随机分为3组,分别单剂量口服匹伐他汀钙片l、2、4 mg进行单剂量药动学研究,2 mg剂量组继续给药7 d,进行多剂量药动学研究。血药浓度用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法测定。结果健康受试者单剂量给药匹伐他汀钙片l、2、4 mg后,主要的药动学参数分别为tmax分别为(0.61±0.11)、(0.62±0.21)、(0.62±0.11)h,ρmax分别为(23.79±3.54)、(59.66±43.08)、(91.44±33.26) μg·L-1,AUC0-48 h分别为(59.81±12.34)、(126.8±97.90)、(216.8±34.75)μg·h·L-1,tl/2分别为(12.14±1.51)、(10.43±2.24)、(12.33±0.85)h;多剂量给药达稳态时,主要的药动学参数为tmax(0.83±0.14)h,ρmax(51.45±39.93) μg·L-1,AUCss(131.80±110.7)μg·h·L-1,t1/2(11.74±3.22)h,CL(19.92±10.54)L.h-1,ρav(5.49±4.61) μg·L-1,DF(9.43±1.21)%。结论匹伐他汀在连续多次给药后,体内无蓄积现象,血药浓度4 d已达稳态。在1～4 mg剂量范围内匹伐他汀的ρmax、AUC0-48 h和AUC0-∞均与剂量呈线性关系。