中国地鼠卵巢细胞培养上清中重组骨形态发生蛋白2的三步纯化法(英文)

骨形态发生蛋白2(BMP-2)是转化生长因子β(TGF-β)超家族的成员,在骨组织工程领域被广泛应用.如今,BMP-2的商业生产所受关注程度与日俱增.这里建立了一种方便且低成本的方法,将人重组骨形态发生蛋白2(rhBMP-2)从中国地鼠卵巢细胞系(CHO)培养上清中纯化出来.该方法由三步组成:肝素亲和层析,Q-Sepharose离子交换层析和SephacrylS-200凝胶过滤,得率约29%.从1L培养上清中能得到约0.26mg的纯度在95%以上的rhBMP-2成熟二聚体,并通过异位成骨实验组织学分析证实了其生物活性.因此,该方法在CHO培养上清中纯化rhBMP-2方面具有潜在的应用价值.

染发剂的体外染色体畸变实验

目的用中国地鼠卵巢(CHO)细胞检测染发剂致染色体畸变的情况。方法采用中国地鼠卵巢(CHO)细胞株,以多氯联苯(PCB)诱导的大鼠肝匀浆(S9)作为体外代谢活化系统。按照《化妆品卫生规范》(2002)要求,对2001—2004年送检、受理审报的346件染发剂进行CHO细胞染色体畸变实验。结果346份染发剂的染色体畸变阳性率为12.72%;其中进口染发剂的阳性率(14.15%),略高于国产染色剂(10.64%),但差异没有统计学意义(P>0.05);氧化型染发剂阳性率(14.06%)明显高于非氧化型染发剂(0%),差异有统计学意义(P<0.05);97.73%的阳性样品在不加入S9条件下致染色体畸变。结论染发剂可能有潜在的致突变性,应加强对染发剂,尤其是氧化型染发剂的安全性评价。

慢病毒介导的人凝血因子Ⅷ高效真核表达系统的建立

目的应用慢病毒载体系统建立高效稳定表达人凝血因子Ⅷ（FⅧ）的细胞株并评估该表达系统的生物安全性。方法构建携带人B区缺失FⅧ（BDDhFⅧ）和绿色荧光蛋白基因的慢病毒转移质粒BDDhFⅧ／pXZ9及对照pXZ9，包装并浓缩慢病毒颗粒。体外感染中国地鼠卵巢（CHO）细胞后72h取培养上清，ELISA法测定FⅧ抗原表达水平，一期促凝法测定FⅧ活性，RT-PCR检测感染后CHO细胞中FN的转录。检测载体复制能力以评估安全性。结果成功构建携带BDDhFⅧ和绿色荧光蛋白基因的慢病毒转移质粒BDDhFⅧ／pXZ9及对照质粒pXZ9，并制备出高滴度的慢病毒。该慢病毒载体可高效感染CHO细胞，感染后72h培养上清中FⅧ抗原浓度为（1724．9±283．7）mU／ml，FⅧ活性为（10．58±1．55）％，RT-PCR检测到BDDhFⅧ基因的转录。感染后的CHO细胞未检测到gag基因的表达，培养上清中也未检测到病毒。结论慢病毒可以介导人FⅧ在CHO细胞内高效表达；该表达系统不产生子代病毒，具有良好的生物安全性。