中国美利奴绵羊肉用品系生长轴相关基因表达对其十二指肠发育的影响

本文旨在探讨生长轴基因与羔羊十二指肠生长发育的关系。分别于0、7、14、30、60和90日龄随机选取健康的中国美利奴绵羊(新疆军垦型)肉用品系雌、雄各3只,测定体质量后屠宰,迅速采集其脑垂体、肝脏和十二指肠等组织样品,并测量十二指肠长度。用荧光实时定量PCR法分别测定脑垂体中生长激素(GH)和生长激素释放激素受体(GHRHR),肝脏和十二指肠中生长激素受体(GHR)、胰岛素样生长因子1(IGF-1)和胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)基因表达的发育性变化,并进行了性别间比较。结果表明,羔羊肝脏中GHR基因和十二指肠中GHR、IGF-1基因表达mRNA丰度的变化模式与垂体中GH和GHRHR基因表达mRNA丰度的变化发育模式相似,呈先升高后逐渐下降的趋势,但这种趋势有一定的时差性;十二指肠的日增长发育性变化模式与肝脏中IGF-1基因表达的变化模式相似。结果提示,十二指肠的发育性变化主要受到肝脏中产生的IGF-1内分泌作用的调控,同时也可能受到脑垂体中GH内分泌的直接作用。

中国美利奴绵羊磷脂酶C zeta基因的克隆及序列分析

根据GenBank中公布的牛磷脂酶C zeta(PLCζ)基因序列设计引物,通过RT-PCR方法对中国美利奴绵羊的PLCζ基因进行扩增,以了解其分子生物学特征。测序表明,美利奴绵羊PLCζ基因开放阅读框全长1 905bp,共编码634个氨基酸。生物信息学分析所扩增的中国美利奴绵羊PLCζ基因具有典型的EF-hand钙结合结构域、磷脂酰肌醇特异性磷脂酶X结构域、磷脂酰肌醇特异性磷脂酶Y结构域、蛋白激酶C2保守区域,其170和215氨基酸位点为组氨酸活性位点。与牛、猪、犬、人、猴、鼠、兔和原鸡的PLCζ基因核苷酸同源性分别为97.32%、88.19%、73.93%、81.42%、83.05%、73.65%、72.42%和65.07%。氨基酸序列的系统进化树表明中国美利奴绵羊PLCζ基因与牛的亲缘关系最近。

中国美利奴(新疆军垦型)绵羊9个微卫星基因座多态性研究

利用PCR技术和复合电泳银染技术检测中国美利奴(新疆军垦型)绵羊第1号染色体上BM6506,BM1824,BM6438,ILSTS004和OarDB6等5个基因座和第6号染色体上BM4621,OarHH55,BM143和OarJMP8等4个基因座,共9个基因座的基因频率(Pi)、个体鉴别力(DP)、杂合度(H)、多态信息含量(PIC)、和非父排除概率(PE)。结果显示:9个微卫星基因座的基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡,绵羊中9个微卫星基因座中BM4621基因座的DP、H、PIC和PE都为最高。9个微卫星基因座的累积个体鉴别力(CDP)为0.99999,累积非父排除能力(CPE)为0.99915。结果显示:9个微卫星基因座适用于中国美利奴(新疆军垦型)绵羊的遗传连锁分析、个体识别和亲权鉴定等研究领域。

中国美利奴多胎品系绵羊BMPR-IB基因多态性与排卵数的相关研究

分析检测了中国美利奴多胎品系绵羊群体中BMPRIB基因多态性分布与情期排卵数。结果表明:中国美利奴多胎品系绵羊群体中BB、B+基因型的情期排卵数平均为4.0和3.5个,中国美利奴单胎群体母羊情期排卵数平均为1.56个,BB、B+基因型比++基因型的母羊分别多排卵2.44(P<0.01)和1.94(P<0.01)个,表明该基因具有明显增加排卵数的作用,进一步确定BMPRIB基因是影响中国美利奴多胎品系绵羊高产的主效基因,可以用于产羔数的标记选择。

中国美利奴多胎品系绵羊BMPR-IB基因多态性与排卵数、产羔数的相关研究

本试验分析检测了中国美利奴多胎品系绵羊群体中BMPR-IB基因多态性分布与情期排卵数,结果表明:绵羊群体中BB、B+、++基因型的情期排卵数平均为4.0、3.5和1.56个,BB、B+基因型比++基因型的母羊分别多排2.44和1.94个卵,反映了该基因具有明显增加排卵数的作用,产羔数平均增加为0.64个和0.73个,差异极显著,BMPR-IB基因是影响中国美利奴多胎品系绵羊高产的主效基因。

羊毛品质性状相关基因CCNY的验证和分析

旨在验证Cyclin Y(CCNY)基因与羊毛品质性状的相关性,并探索其可能的作用机制。本研究以744只中国美利奴羊(新疆军垦型)为试验材料,采用Sanger法混池测序寻找多态性位点;利用MALDI-TOF-MS方法进行个体基因型鉴定;利用real-time RT-PCR检测基因表达;利用免疫荧光染色技术分析蛋白定位;利用CCK-8方法检测细胞的增殖;利用荧光素酶报告基因技术检测Wnt/β-catenin信号通路的活性。结果表明,本研究鉴定出中国美利奴羊CCNY基因的3个SNPs位点,分别命名为CCNYSNP1(rs613860955)、CCNYSNP2(rs622396422)和CCNYSNP3(rs611417387)。关联分析显示,这3个SNPs及其构建的单倍型均与羊毛细度显著相关(P<0.05);组织表达谱检测分析显示,CCNY基因在睾丸和肺中有较高的表达,在皮肤等组织中有中等程度的表达;免疫荧光分析显示,CCNY主要定位于毛囊的内根鞘和毛母质细胞;CCK-8细胞增殖检测分析显示,过表达CCNY基因显著促进人表皮永生化细胞(HaCaT)和绵羊胎儿成纤维细胞(SFF)的增殖(P<0.05);报告基因分析结果显示,过表达CCNY基因极显著促进Wnt/β-catenin信号通路的活性(P<0.01)。以上结果显示,CCNY是控制羊毛细度的一个重要基因,所鉴定出的CCNY基因3个SNPs有望用于细毛羊的分子辅助选育。