中国胭脂鱼线粒体控制区遗传多样性分析

利用PCR技术扩增了采自长江宜昌江段和清江的 8尾中国胭脂鱼线粒体DNA控制区全序列。研究发现该种具有脊椎动物线粒体控制区的一般结构 .在获得的 95 8bp的碱基序列中 ,共检测出 32个多态性核苷酸变异位点 ,多态位点比例为 0 .0 33。核苷酸的变异位点除一个为缺失外 ,其余全部为碱基转换 .变异位点主要集中在 5 5～36 5bp高变异区 ,而其他区域突变稀少。个体的变异在 0～ 1.36 %之间 ,表现出较大的个体多态性差异。中国胭脂鱼的线粒体控制区的变异远大于美国胭脂鱼 (Moxostomarobustum)的 0 .0 16。

中国胭脂鱼种群的遗传分析

采用RAPD和PCR RFLP技术 ,分析了长江中游两个中国胭脂鱼群体的遗传结构。 50个随机引物进行RAPD分析 ,有 3个引物显示了多态 ,宜昌、金口群体内个体之间的遗传相似度分别为 0 .92 74、0 .931 3 ,群体之间遗传相似度为 0 .90 0 0。 1 2个限制性内切酶分析了两群体线粒体DNAND - 5/ 6基因的限制性片段长度多态性 ,仅内切酶Ncil的酶切图谱显示了多态 ,基因型间的核苷酸序列歧化距离为 0 .2 35 % ,核苷酸多样性为 0 .0 0 4。分析表明 ,长江中游两个中国胭脂鱼群体遗传结构较为单一 ,群体之间表现了较为明显的遗传分化。

中国胭脂鱼的细胞遗传学分析

采用植物血凝素、秋水仙素活体注射和肾细胞直接制片法分析了中国胭脂鱼(Myxiocyprinus asiaticus)的染色体核型和Ag-NORs显带;并以中国胭脂鱼血细胞为样本,鸡血细胞DNA含量为标准(2.50 pg),用流式细胞仪测定了中国胭脂鱼的DNA含量。结果表明:(1)中国胭脂鱼染色体数目2n=100,核型公式为10 m+4 sm+12 st+74 t,NF=114,未观察到次缢痕及随体,亦未发现有性染色体。(2)中国胭脂鱼染色体具有1对Ag-NORs,位于第1对染色体短臂上,间期核中Ag-NORs的数目为1-2个,未见Ag-NORs的联合现象。(3)PI和DAPI作为荧光染料,得出中国胭脂鱼DNA含量分别为5.50±0.24 pg和6.16±0.03 pg。(4)中国胭脂鱼为四倍体,在特定的分类阶元中属于较原始的鱼类。

中国胭脂鱼的核型研究

胭脂鱼科(Catostomidae)的绝大多数现存种类分布在北美,约有14属、80种。中国胭脂鱼是该科鱼类分布在我国的唯一现生种。北美胭脂鱼核型曾有报道,其染色体数目是100左右,可是,被某些学者认为是胭脂鱼科发生地的亚洲的一种中国胭脂鱼的核型却未有报道。故此,我们作了它的核型研究 本研究所用的材料是活体鱼的肾脏,实验鱼是四川省水产研究所(宜宾)提供的,(2♀♀,(?)(?)),染色体玻片标本的制作按我们实验室常规方法—空气干燥法进行。

长江中国胭脂鱼群体的遗传分化

研究采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术,分析了长江上、中游的宜宾、万州、宜昌和武汉金口4个江段的中国胭脂鱼群体的遗传结构.用13个限制性内切酶分析了4个群体线粒体DNAND-5/6片段的限制性片段长度多态性,发现NciⅠ的酶切类型多态性是表现中国胭脂鱼遗传多样性的特异性标志.根据其酶切图谱显示的群体之间存在的多态性,计算出遗传距离和核酸序列差异程度.分析表明,长江宜宾江段的中国胭脂鱼群体与其他3群体产生了明显的歧化现象,长江中、下游群体间的基因交流好于上游群体,中国胭脂鱼群体内遗传结构比较单一,其群体的遗传多样性程度有进一步减退的可能性.

胭脂鱼核连蛋白2/Nesfatin-1基因克隆及其在间脑与肝胰脏中的差异表达

为探索核连蛋白2(nucleobindin-2,NUCB2)对中国胭脂鱼(Myxocyprinus asiaticus)生长发育的调节规律,利用cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术克隆其cDNA全长,并应用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qPCR)和免疫荧光染色检测主要功能蛋白Nesfatin-1神经肽在3龄和6龄胭脂鱼间脑和肝胰脏中的表达分布。结果显示:NUCB2全长为2090 bp,包括99 bp的5′非翻译区、1449 bp的开放阅读框和542 bp的3′非翻译区,编码482个氨基酸,分为23个氨基酸编码的信号肽区和459个氨基酸编码的功能肽区,后者由前肽裂解位点赖氨酸106-精氨酸107和赖氨酸179-精氨酸180分成Nesfatin-1、Nesfatin-2和Nesfatin-33个功能区域,且Nesfatin-1的M30区域在鱼类中高度保守。在2个鱼龄期,Nesfatin-1在肝胰脏中的表达均极显著高于间脑(P<0.01),而在间脑和肝胰脏中的表达无明显龄期差异(P>0.05);在肝胰脏中其主要在米粒状的胰腺细胞中呈强阳性反应;而在间脑的结节外侧核、室周前核和室前核的少量大神经元细胞中呈阳性反应。综上所述,在胭脂鱼2个典型发育阶段,Nesfatin-1在间脑中的表达水平明显低于肝胰脏,说明Nesfatin-1对胭脂鱼生长发育的调节存在明显的中枢和外周差异。

亚口鱼科鱼类分子系统学研究

用PCR方法得到了亚口鱼科7个代表属种核DNA 18S-ITS1-5.8S部分序列。以中国胭脂鱼为中心,比较了18S-ITS1-5.8S部分序列变异情况,并以此序列为分子标记,进行了亚口鱼科鱼类系统关系研究。中国胭脂鱼与大口胭脂鱼成对遗传距离为12.3%,与短鼻胭脂鱼成对遗传距离为22.0%。大口胭脂鱼与中国胭脂鱼的ITS1区域长度明显比其它5种鱼大,分别为289、285bp。