中度嗜盐菌Halobacillus sp. LY5的分离、鉴定及其胞外脂肪酶特性研究

利用吐温平板筛选法，从山西运城盐湖中分离获得一株高产胞外脂肪酶的中度嗜盐菌。通过形态学观察，生理生化特征及16SrRNA序列分析，初步鉴定并命名该菌为Halobacillus sp．LY5。酶学性质研究表明，该脂肪酶可在较宽温度范围内（30℃～90℃）保持高活力；在NaCl浓度为10％的反应缓冲体系（pH值8.0）中，温度为50℃，酶活性最佳。金属离子除Fe^3＋外，对酶活性均具有明显的抑制作用；而EDTA和SDS亦可不同程度的抑制酶活性。结果表明LY5所产脂肪酶可能存在某些特殊性质。

高产蛋白酶中度嗜盐菌Halobacillus sp.LY6的分离鉴定及其粗酶性质

采用传统分离培养法,从山西运城盐湖中分离获得1株高产胞外蛋白酶的中度嗜盐菌LY6,并对其进行了分类鉴定。通过形态学观察及生理生化特征分析,结合16S rRNA序列分析,初步鉴定并命名该菌为Halobacillus sp.LY6。粗酶性质研究结果表明,其胞外蛋白酶可在较宽pH范围内(6.0～12.0)保持高活力,最适反应温度和pH值分别为40℃和10.0。Ca2+和Cu2+可明显提高蛋白酶活力,其它金属离子均无影响;苯甲基磺酰氟(PMSF)、乙二胺四乙酸(EDTA)和焦碳酸二乙酯(DEPC)对该酶抑制作用明显。上述研究结果表明LY6所产胞外蛋白酶可能属于碱性金属蛋白酶,且活性中心中存在丝氨酸和组氨酸残基。

中度嗜盐菌Halobacillus Y5的生物学特性研究

该文对中度嗜盐菌Halobacillus Y5的生物学特性进行了研究。结果表明:Halobacillus Y5菌株的最佳生长温度为30℃,生长较佳的酸碱度范围为7.0~9.0,Na Cl耐受范围为3%~15%(w/v),最适浓度为9%(w/v);营养条件方面,该菌生长的最适碳源为蔗糖,最适氮源为蛋白胨。

中度嗜盐菌Halobacillus Y5甘氨酸甜菜碱转运蛋白opuD基因的克隆及功能分析

目的克隆中度嗜盐菌Halobacillus Y5甘氨酸甜菜碱转运蛋白(betaine-choline-carnitine transporter,BCCT)opu D基因,对其结构及蛋白功能进行分析,并通过耐盐碱特性试验明确其功能。方法将经过Sau3AⅠ部分酶切回收的Halobacillus Y5基因组总DNA,与用Bam HⅠ酶切并去磷酸化的线性p UC18载体连接,电转化法导入E.coli KNabc感受态细胞中,涂布在含0.2 mol/L Na Cl、Amp^(50)的LBK固体培养基上,筛选阳性克隆,提取质粒测序后,进行生物信息学分析及耐盐碱特性检测。结果已从中度嗜盐菌-喜盐芽孢杆菌Halobacillus Y5中成功克隆了1个新的耐盐碱基因,将其命名为HY5_opu D,该基因是1个新的甘氨酸甜菜碱转运蛋白基因,其编码的蛋白氨基酸序列和结构不同于以往报道的Opu D转运蛋白,且该基因能够使KNabc在0.2 mol/L Na Cl、5 mmol/L Li Cl及碱性p H 8.0环境下生长。结论成功克隆了1个新型的opu D转运蛋白基因,为开发利用中度嗜盐菌的耐盐碱基因奠定了理论基础。

中度嗜盐菌Halomonas salifodinae N35-6产四氢嘧啶的培养基优化

【目的】优化从新疆哈密七角井盐湖土壤中分离到一株四氢嘧啶产量较高的中度嗜盐菌N35-6发酵培养基。【方法】以四氢嘧啶产量为指标,采用响应面法优化培养基成分,利用HPLC检测四氢嘧啶产量。【结果】从七角井盐湖土壤中分离获得一株能够产四氢嘧啶的细菌,经16S rDNA序列分析鉴定为Halomonas salifodinae,并命名为H.salifodinae N35-6,该菌株四氢嘧啶产量能够达到0.83 g/L。【结论】中度嗜盐菌Halomonas salifodinae N35-6具有高产四氢嘧啶的潜力。

一株中性嗜盐菌Halobacillus dabanensis N522的分离鉴定及其抗菌活性研究

从广东省徐闻盐场沉积物中分离嗜盐菌,鉴定目标菌株、考察培养条件,并对发酵液中抗菌活性物质进行理化性质研究。用稀释涂布法分离嗜盐菌,通过生理生化实验和16S r RNA基因序列分析鉴定分离得到的菌株;采用管碟法考察嗜盐菌发酵液的抗菌活性,并对其抗菌活性物质进行理化分析。结果显示,分离得到一株嗜盐菌,经生理生化实验和16S r RNA序列分析鉴定后命名为达坂喜盐芽胞杆菌(Halobacillus dabanensis)N522,其最适生长p H值和Na Cl浓度分别为7.0和100 g/L,属于中度嗜盐菌类群。菌株N522的发酵液对多种细菌和真菌具有抑制作用,其中,对金黄色葡萄球菌的抑制能力最强。经硫酸铵盐析和蛋白酶实验分析,初步确定菌株N522所产抗菌活性物质为多肽,分子量在3-5 k D之间,并且该抗菌活性物质对p H和温度稳定性良好。晒盐场沉积物中分离得到的中度嗜盐菌H.dabanensis N522可作为开发抗菌药物的潜在新来源。

中度嗜盐菌相容性溶质机制的研究进展

生活在高盐环境中的中度嗜盐菌不仅能抗衡外界的高渗透压胁迫,而且还能迅速适应短时间内的渗透冲击。为适应该环境,中度嗜盐菌依赖于一种被称为相容性溶质的物质,以执行渗透保护功能。这类物质属于极性的、易溶的和低分子量的有机化合物,其中包括糖类、氨基酸类、甜菜碱类和四氢嘧啶类等。中度嗜盐菌主要采用相容性溶质机制来适应盐环境。在此,就中度嗜盐菌的盐适应机理、相容性溶质的种类和特点,以及其作用的分子机制进行了阐述和讨论。

中度嗜盐菌在生物技术中的应用

生存于盐环境下的中度嗜盐菌在生物技术方面具有很多潜在的应用价值。其中,中度嗜盐菌在盐发酵食品加工业和食品添加剂中已经被广泛应用;由中度嗜盐菌分泌的胞外酶如淀粉酶、脂肪酶等能够在高盐环境下继续保持较高的活力;中度嗜盐菌细胞内积累的多种类相容性溶质也可以作为生物大分子稳定剂以及抗冻剂等;其它如其产生的生物表面活性剂、多聚糖类物质能够在石油回收和生物修复中进行应用等。

两株中度嗜盐菌的分离与生理生化分析

对从青岛附近海产品盐渍中分离得到的两个菌株—— CM1和 CM4进行了分析 .结果表明 CM1和 CM4符合盐单胞菌属 ( H alomonas)的特征 ,但与几个典型的盐单胞菌属菌种有显著的差异 ,因而可能是该属的新种 .通过对其表型和生长特征的分析发现 ,这两个菌株可能采用了不同的进化稳定对策以适应特殊的高盐环境 ,即CM1采用了 K-对策 ;而 CM4采用的是 r-对策 。

以四氢嘧啶为主要相容性溶质的中度嗜盐菌I15的分离和特性研究

从草地土壤中分离到一株中度嗜盐菌I15,经过16SrDNA(GenBank登录号为DQ010162)序列分析、形态学和生理生化特征分析,该菌株初步鉴定为Virgibacillusmarismortui。I15能在0%～25%NaCl的培养基中生长,最适生长NaCl浓度为10%,最适生长温度为30℃,最适pH为7.5～8.0。在高盐条件下,I15细胞内主要的相容性溶质为四氢嘧啶,在15%NaCl培养基中其含量达到1.608mmol(g·cdw),占到相容性溶质总摩尔含量的89.6%。渗透冲击试验表明I15细胞内四氢嘧啶在低渗冲击时能够快速分泌到细胞外,在高渗冲击冲剂时能够较快地重新合成。

中度嗜盐菌DTY1的鉴定及其耐盐机制的初步分析

菌株DTY1分离自山西省五寨县柠条种植区盐碱土壤，可在0-1．2mol／L NaCl的浓度培养基上生长，最适生长温度32℃，最适pH7-10。通过形态观察，生理生化测定与16S rDNA序列分析，将该菌株鉴定为嗜碱芽孢杆菌（Bacillus alcalophilus）。高压液相色谱分析，DTY1菌株在常规LB培养液中能够产生1．40mg／g四氢嘧啶，且在最适盐浓度条件下，盐浓度越高单位干重菌体所产生的四氢嘧啶含量越高。通过PCR介导的方法从DTY1的基因组文库中克隆到四氢嘧啶合成基因ectB。该基因长度为1284bp，编码427个氨基酸的肽链。此肽链与B．halodurans C-125 （BABO4638）中二氨基丁酸氨基转移酶同源性达81％。ectB基因可能存在典型的σ^70启动子，而且在启动子间有一段明显的23bp的回文序列。

青海盐环境下革兰氏阳性中度嗜盐细菌的分离及其生物学特性

从青海盐环境中分离到了32株革兰氏阳性的中度嗜盐菌,通过RFLP实验去处重复菌株、形态学实验剔除典型的芽孢杆菌后,确定了10株实验菌.经过形态、生理生化特性、细胞化学组分以及16S rDNA序列等在内的多相分类实验,确定它们分别隶属于海球菌属、喜盐芽孢杆菌属、盐水球菌属、动性球菌属及枝芽孢杆菌属的菌株.

一株中度嗜盐菌的分离鉴定及其强化高盐有机废水处理的研究

为探索中度嗜盐菌在高盐有机工业废水处理中的应用,解决高盐有机工业废水处理这一难题,从山东省威海市路道口盐场晒盐池盐水中分离一株嗜盐菌株YS-1,通过对该菌株进行原子力显微镜观察、生理生化测定,全细胞脂肪酸分析、16S rDNA序列同源性分析发现YS-1菌株16S rDNA序列与Halomonas sp.(AB167061)的亲缘关系最为接近,结合上述其他各项结果确定该菌株为盐单胞菌属(Halomonas sp.),属中度嗜盐菌;在SBR反应器中对该菌株进行强化高盐有机废水处理试验,结果表明,含盐12%,CODCr=1 494mg/L的高盐模拟有机废水,经72 h CODCr去除率为90.0%,120 h的CODCr去除率为98.1%,该菌株具有强化高盐有机废水处理的功能,通过分离筛选嗜盐菌强化高盐有机工业废水处理具有可行性.

中度嗜盐菌Halomonas sp.BYS-1的渗透调节

Halomonassp BYS 1是一株从活性污泥中分离的中度嗜盐菌 ,它能在 0 1～ 2 6mol LNaCl的以苯乙酸为唯一碳源的基础培养基中生长。BYS 1在不同NaCl条件下生长时 ,胞内的Na+含量基本不发生变化 ;它主要通过积累K+、谷氨酸和甜菜碱来调节胞内外的渗透压平衡。当培养基中的NaCl浓度从 0 1mol L上升到 2 0mol L时 ,其胞内的K+、谷氨酸和甜菜碱分别提高了 1 9、 2 4和 1 3 6倍。

中度嗜盐菌LY9的分离鉴定及其淀粉酶特性研究

目的：从运城盐湖中分离获得中度嗜盐菌，并对其进行分离鉴定及酶学特性研究。方法：采用淀粉底物平板法获得高产胞外淀粉酶的嗜盐菌株LY9。16SrRNA序列分析，结合形态学和生理生化特征分析对其进行分类鉴定。研究不同物理化学因素对淀粉酶活性的影响。结果：系统发育分析表明该菌为Halobacillus属成员，鉴定并命名为HalobaciUus sp．LY9，为中度嗜盐菌。该淀粉酶最适作用温度和pH值分别为60℃和8．0，同时在较宽pH范围内（4．0～12．0）保持高活力，表现出了较强的抗酸碱能力。cu^2＋可明显抑制该酶活性，其它金属离子则基本无影响；该酶不受EDTA的抑制，表明该酶不属于金属蛋白酶，但SDS却能使酶活明显降低。结论：LY9的分离鉴定及其淀粉酶特性研究对促进运城盐湖生物资源的开发利用具有重要意义。

中度嗜盐菌Halomonas sp. BYS-1启动子的克隆和测序

提取了中度嗜盐菌Halomonassp.BYS1的基因组DNA,以甲基对硫磷水解酶基因(mpd)为报告基因,以启动子探针pUCmpd为载体,通过鸟枪法在E.coliDH5α中构建了BYS1的启动子文库.通过筛选获得了17个阳性克隆,编号为P1～P17.测定了阳性克隆的甲基对硫磷水解酶(MPH)活性,结果表明,P3中mpd基因的启动子活性最强,它的酶活高达2554.3U/mg,而P17中mpd基因的启动子活性最弱,它的酶活只有68.3U/mg.对P3、P8、P17克隆中的重组质粒的插入片段进行了测序和在线启动子预测.

四川大公古盐井中可培养中度嗜盐菌的初步分析

以四川自贡大公古盐井盐卤为研究对象,分离获得112株中度嗜盐菌。经形态特征、生理生化特征和16S rRNA同源序列分析表明:112菌株分属于细菌域的Planococcus、Halomonas、Halobacillus、Oceanobacillus和Virgibacillus属,与P.rifitiensis和H.venusta、H.trueperi、H.blutaparonensis、V.picturae在16S rRNA基因水平分别有100%和99%的高相似性。但菌株QW06、QW12、QW15和QW18分别与O.profundus、H.trueperi和H.blutaparonensis在菌落形态、革兰氏染色、产酸、明胶水解和淀粉水解等表型特征上有明显的差异。同时,16S-23S rRNA ISR-PCR基因指纹图谱也表明QW06、QW12、QW15和QW18不同于参考菌株O.profundus KCCM 42318和H.trueperi DSM 1040T、H.blutaparonensis ATCC BAA 1217T,说明QW06、QW12、QW15和QW18分类地位有待进一步确定。实验结果不仅揭示了大公古盐井中可培养中度嗜盐菌的多样性和系统发育关系,而且也表明了16S rRNA高度相似菌的16S-23S rRNA ISR在进化的过程中发生了某些突变。

中度嗜盐菌四氢嘧啶合成基因的克隆与功能分析

中度嗜盐菌Bacillusalc alophilus DTY1分离自晋西北黄土高原盐碱土壤,能够产生耐盐相关的相容性溶质四氢嘧啶。为了研究四氢嘧啶的功能,克隆了DTY1菌株四氢嘧啶合成基因簇ectABC。ectA、ectB和ectC分别编码169、428和132个氨基酸的肽链,分别与B.halodurans C-125中的二氨基丁酸乙酰基转移酶(EctA)、二氨基丁酸氨基转移酶(EctB)、四氢嘧啶合成酶(EctC)同源性达59%、81%和81%。将携带该基因簇的4.0kb片段转入蜡质芽孢杆菌B.cereus Z后,芽孢杆菌的耐盐度显著提高。HPLC检测发现,在1.0%NaCl浓度下,转化菌B.cereusZ-E菌株生成70.1mg/g四氢嘧啶,而在5.0%的NaCl浓度下四氢嘧啶的产量高达118.6mg/g,显著高于B.alcalophilus DTY1的四氢嘧啶产量。而且随着盐浓度的提高,四氢嘧啶的合成量也随之提高。由此证明四氢嘧啶参与中度嗜盐菌重要的渗透调节,ectABC的表达受盐诱导。

中度嗜盐菌Halomonas sp.BYS-1耐盐相关DNA片段的克隆

通过固体亚硝基胍诱变获得了Halom onassp.BYS-1的盐敏感突变株BYS-1M.以pBBR1MCS-2为载体在E.coliDH5α中构建了BYS-1的基因文库.以文库菌E.coliDH5α(pBBR-X)为供体菌、E.coliWD803(pRK2013)为辅助菌、BYS-1M为受体菌进行三亲接合,筛选到了恢复耐盐性能的接合子HR-23,提取接合子HR-23的重组质粒pHR23,酶切确定其插入的耐盐相关DNA片段大小分为5.4 kb.该片段为Halom onassp.BYS-1耐盐相关基因的克隆奠定了基础.