中心体相关蛋白55、睾丸表达基因14在结直肠癌组织中表达及其临床意义

目的回顾性分析中心体相关蛋白55(CEP55)、睾丸表达基因14(TEX14)在结直肠癌组织中表达及其临床意义。方法选取2015年10月至2016年10月在南阳市中心医院行手术治疗的78例结直肠癌病人癌组织及其癌旁组织为研究对象。利用Ualcan数据库分析CEP55和TEX14在结直肠癌组织及癌旁组织中的表达情况;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测CEP55和TEX14 mRNA表达;免疫组化染色法检测CEP55和TEX14蛋白表达;分析CEP55和TEX14蛋白表达与病人临床病理特征的关系;对病人随访5年,使用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,分析CEP55和TEX14蛋白表达与结直肠癌病人5年生存率的关系;使用Cox回归模型分析影响结直肠癌病人预后的因素。结果Ualcan数据库分析结果显示,结直肠癌组织中CEP55和TEX14表达量均明显高于癌旁组织(P<0.05)。结直肠癌组织中CEP55、TEX14 mRNA水平(2.34±0.70比1.00±0.26、1.57±0.44比0.98±0.25)及蛋白阳性表达率均明显高于癌旁组织(P<0.05)。CEP55和TEX14蛋白表达与分化类型、有无淋巴结转移、TNM分期、有无神经浸润、有无肝转移有关(P<0.05)。结直肠癌组织中CEP55蛋白阳性病人生存率为52.73%,明显低于CEP55蛋白阴性病人生存率78.26%(P<0.05);TEX14蛋白阳性病人生存率为52.63%,明显低于TEX14蛋白阴性病人生存率80.95%(P<0.05)。低分化、淋巴结转移、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、CEP55蛋白阳性、TEX14蛋白阳性是影响结直肠癌病人5年预后的独立危险因素(P<0.05)。结论CEP55和TEX14在结直肠癌组织中呈高表达,CEP55和TEX14蛋白阳性病人5年生存率低于阴性病人,这些指标的临床意义,值得进一步研究。

水蕨精子发生过程中中心体蛋白和微管蛋白的免疫荧光定位

采用透射电镜技术和免疫荧光标记技术对水蕨精子发生的超微结构以及中心体蛋白和微管蛋白在精子发生过程中的动态表达进行了观察。研究发现:(1)生毛体分化早期周围有放射状微管分布,这与线粒体向生毛体的聚集有关。(2)免疫荧光观察表明,中心体蛋白仅定位于生毛体、基体和鞭毛带上,自生毛体至基体阶段呈现明亮的荧光标记,在核塑形、鞭毛形成至精子成熟阶段,中心体蛋白荧光标记随着鞭毛的发生而逐渐减弱,至游动精子阶段中心体蛋白荧光标记信号几乎消失。(3)微管蛋白早期荧光标记与中心体蛋白标记形相同,在生毛体、鞭毛带、基体等运动细胞器上呈现明亮荧光标记,但微管蛋白随着鞭毛的发生其荧光标记越来越强。从二者的时空表达特征可以推断,中心体蛋白主要是运动细胞器的组织者,而非这些运动细胞器的结构成分,其功能是参与或负责中心粒、基体和鞭毛的发生。

中心体相关蛋白激酶7在小鼠中枢神经系统的分布

目的:观察小鼠中枢神经系统内中心体相关蛋白激酶7(NEK7)的表达和分布情况,为有丝分裂及炎症相关疾病的病理变化和后续治疗靶点提供形态学证据。方法:利用Western Blot检测C57BL/6J小鼠中枢神经系统各个区域的NEK7表达,利用免疫组织化学染色(IHC)方法观察NEK7分布情况;应用免疫荧光组织化学染色(IHF)方法观察NEK7的细胞定位情况。结果:Western Blot结果显示,NEK7在C57BL/6J小鼠嗅球、大脑皮质、海马、间脑、小脑、脑干和脊髓等区域均有表达;IHC结果显示,NEK7在C57BL/6J小鼠大脑皮质、海马、嗅球、杏仁核、丘脑、下丘脑、脉络丛、脊髓等区域广泛分布,但染色强度存在区域特异性;IHF双标结果显示,NEK7与微管相关蛋白2(MAP2)、离子钙接头蛋白(Iba-1)共表达,与胶质纤维酸性蛋白(GFAP)少量共表达。结论:C57BL/6J小鼠中枢神经系统中NEK7大量表达和分布,与神经元和小胶质细胞共定位。

线粒体钙单向转运体相关钙超载调控钙调蛋白对雨蛙肽诱导胰腺导管上皮细胞微丝骨架的影响

目的 通过体外细胞研究探讨线粒体钙单向转运体(MCU)相关钙超载通过调控钙调蛋白(CaM)对雨蛙肽诱导的胰腺导管上皮细胞微丝骨架的影响。方法 使用10^(-7)mol/L雨蛙肽及10^(-5)mol/L MCU抑制剂钌红(RR)干预人胰腺导管上皮细胞(HPDE6-C7)24 h,将细胞分为:Control组、雨蛙肽组、RR组、雨蛙肽+RR组。Western blot法检测细胞内MCU及CaM蛋白表达,荧光探针法检测细胞内游离Ca^(2+),免疫荧光双标法检测细胞内线粒体Ca^(2+),微丝染色法观察细胞微丝骨架结构。结果 雨蛙肽组与Control组比较,MCU及CaM蛋白表达、细胞质及线粒体内Ca^(2+)含量升高(P<0.05),细胞微丝骨架破坏;雨蛙肽+RR组与雨蛙肽组比较,MCU及CaM蛋白表达、胞质Ca^(2+)及线粒体内Ca^(2+)含量降低(P<0.05),细胞微丝骨架破坏减轻。结论 MCU相关钙超载可能通过激活CaM促进雨蛙肽诱导的胰腺导管上皮细胞微丝骨架的破坏。

中心体相关调节蛋白及其异常与肿瘤发生的研究进展

中心体是动物细胞的重要细胞器,作为动物细胞中首要的微管组织中心(microtu-bule-organizing center,MTOC),在细胞的生命活动中起着重要的作用。各种不同形式的中心体异常会造成细胞中微管分布的紊乱,进而引起细胞骨架的异常和染色体分离障碍。许多位于中心体处的蛋白对于中心体微管组织中心功能实现发挥着重要的作用,它们的异常同很多疾病的发生息息相关。更为重要的是越来越多的证据表明,不同来源肿瘤细胞中存在有各种中心体的异常,并且这些异常对于肿瘤的发生、发展和预后都有着紧密的联系。因而研究中心体微管组织中心功能和研究实现这些功能的相关调节蛋白,对于肿瘤的早期诊断和抗肿瘤药物的开发提供了重要的依据。

长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18通过微RNA-497-5p/细胞周期蛋白E1轴调节弥漫性大B细胞淋巴瘤的增殖、凋亡和侵袭

目的 探讨长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18(lncRNA HCG18)调控微RNA-497-5p(miR-497-5p)/细胞周期蛋白E1(CCNE1)轴对弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白质印迹法分别检测2018年5月至2021年5月收集的恩施土家族苗族自治州中心医院DLBCL病人淋巴组织、良性淋巴结增生病人的淋巴组织、人正常B细胞永生化细胞HMy2.CIR、DLBCL细胞系SU-DHL-1、OCI-LY8、U2932中HCG18、miR-497-5p表达及CCNE1蛋白表达,将OCI-LY8细胞分为Ct组(正常培养的OCI-LY8细胞)、pcDNA组(细胞转染过表达物阴性对照)、pcDNA-HCG18组(细胞转染HCG18过表达物)、si-NC组(细胞转染小干扰RNA阴性对照)、si-HCG18组(细胞转染HCG18小干扰RNA)、si-HCG18+inhibitorNC组(细胞转染HCG18小干扰RNA和抑制物阴性对照)、si-HCG18+miR-497-5p inhibitor组(细胞转染HCG18小干扰RNA和miR-497-5p抑制物),CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell检测细胞侵袭,蛋白质印迹法检测CCNE1、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达,双萤光素酶验证HCG18与miR-497-5p、miR-497-5p与CCNE1的关系。结果 在DLBCL淋巴组织和细胞中,HCG18、CCNE1蛋白高表达,miR-497-5p低表达,且在OCI-LY8细胞中HCG18、CCNE1蛋白表达上调最高,miR-497-5p表达下调最多(P<0.05),因此,以OCI-LY8细胞进行后续研究,与si-NC组比较,si-HCG18组HCG18(0.26±0.03比1.01±0.01)、CCNE1蛋白(0.45±0.03比1.44±0.19)表达降低,miR-497-5p(1.95±0.14比1.03±0.02)表达升高(P<0.05),与pcDNA组比较,pcDNA-HCG18组HCG18(1.96±0.23比1.02±0.01)、CCNE1蛋白(2.33±0.21比1.42±0.18)表达升高,miR-497-5p(0.28±0.02比1.02±0.02)表达降低(P<0.05),与siHCG18组、si-HCG18+inhibitor NC组比较,miR-497-5p表达降低(1.21±0.09比1.95±0.14、1.94±0.13),CCNE1蛋白(0.87±0.08比0.45±0.03、0.44±0.04)表达上调(P<0.05),沉默HCG18可抑制OCI-LY8细胞增殖、侵袭行为及PCNA、MMP-9蛋白表达,诱导细胞凋亡及Bax蛋白表达,而上调HCG18则呈相反趋势,下调miR-497-5p逆转了沉默HCG18对OCI-LY8细胞增殖、侵袭、凋亡的影响,HCG18靶向调控miR-497-5p/CCNE1。结论 沉默HCG18可能通过调控miR-497-5p/CCNE1抑制OCI-LY8细胞增殖、侵袭,诱导细胞凋亡。

中心体相关蛋白55在肿瘤发生发展中的研究进展

中心体相关蛋白55(CEP55)可调节细胞质分裂过程,且是其中关键的调节因子。CEP55不仅在正常细胞中发挥作用,还可导致某些遗传疾病的发生,但具体机制仍需进一步研究验证。此外,CEP55还是一个促瘤因子,参与多种实体及血液肿瘤的发生发展,并影响肿瘤细胞的增殖、凋亡、侵袭以及转移等生物学行为,因此有可能成为肿瘤治疗靶点及预后评估指标。目前关于CEP55在肿瘤发生发展中的研究涉及信号通路、表观遗传学等方面,因此,进一步研究CEP55在恶性肿瘤中的作用及机制有助于理解恶性肿瘤的生物学特征,对肿瘤的诊治具有重要意义。

端粒酶和中心体微管蛋白α在宫颈鳞癌中的表达及临床意义

目的探讨端粒酶和中心体微管蛋白α在宫颈鳞癌中的表达及临床意义。方法采用免疫组化法检测20例正常宫颈、40例宫颈上皮内瘤变和72例宫颈鳞癌组织中端粒酶和中心体微管蛋白α的表达,并分析其与临床病理特征的关系。结果在宫颈鳞癌组织中端粒酶和中心体微管蛋白α阳性表达率分别为84.72%、79.17%,高于正常宫颈组织和宫颈上皮内瘤变(P<0.05);端粒酶蛋白的表达与临床病理参数无关(P>0.05);中心体微管蛋白α的表达与患者病理分级、淋巴结转移有关(P<0.05),与其它临床病理参数无关(P>0.05);端粒酶和中心体微管蛋白α的表达呈显著正相关(r=0.353,P=0.002)。结论端粒酶和中心体微管蛋白α的表达在宫颈鳞癌的发生发展中起着重要作用,联合检测二者的表达,对早期诊断宫颈鳞癌具有积极的临床意义。

膜性肾病组织中足细胞自噬体数量、自噬相关蛋白表达变化及其意义

目的观察特发性膜性肾病(IMN)和继发性膜性肾病(SMN)病灶组织中足细胞自噬体数量、自噬相关蛋白表达变化,探讨足细胞自噬与膜性肾病的关系。方法收集92例IMN患者(IMN组)、22例SMN患者(SMN组)的病肾组织标本,及30例因外伤、输尿管肿瘤等其他原因行肾切除手术者(对照组)的正常肾组织标本。观察各组肾组织病理变化、足细胞结构,计算足细胞自噬体数量;分析足细胞自噬体数量与膜性肾病临床病理参数的关系;采用Western blotting法检测各组肾组织中的自噬蛋白Beclin-1、微管相关蛋白轻链3(LC3)。结果 IMN组、SMN组、对照组足细胞自噬体数量分别为(2.63±0.94)、(2.58±0.52)、(3.22±0.86)个,IMN组和SMN组足细胞自噬体数量较对照组减少(P均<0.05)。IMN组、SMN组中,临床分期为Ⅱ期、24 h尿蛋白量(24 h UP)≥3.5 g/L、血清白蛋白(Alb)≥30 g/L、估算肾小球滤过率(eGFR)≥60 mL/(min·1.73 m^2)的患者足细胞自噬体数量分别少于临床分期为Ⅰ期、24 h UP<3.5 g/L、Alb<30 g/L、eGFR<60 mL/(min·1.73 m^2)的患者(P均<0.05)。IMN组和SMN组足细胞自噬体数量与24 h UP、eGFR、血肌酐、尿素氮均无相关性(P均>0.05)。IMN组和SMN组肾组织中LC3、Beclin-1相对表达量均低于对照组(P均<0.05)。结论 IMN、SMN患者病肾组织中足细胞自噬体数量减少,自噬相关蛋白表达降低;自噬可能与膜性肾病患者足细胞损伤过程密切相关,随着病情进展,足细胞自噬活性下降。

肌动蛋白相关蛋白2/3复合体的结构、功能与调节

微丝参与了细胞形态维持及细胞运动等多种重要的细胞过程。微丝由肌动蛋白单体组装而成 ,肌动蛋白相关蛋白 2 / 3(Arp2 /Arp3,Arp2 / 3)复合体在微丝形成过程中起重要作用。Arp2 / 3复合体由 7个亚单位组成 ,在细胞内受到多种核化促进因子的调节 ,并与这些因子协同作用来调节肌动蛋白的核化。Arp2 / 3复合体结构、功能及调节的研究对于阐明微丝形成机制及细胞骨架与某些信号分子的关系有重要意义。

口腔鳞状细胞癌中PLK1蛋白表达与中心体扩增

目的:探讨口腔鳞状细胞癌(Oral Squamous Cell Carcinoma,OSCC)中保罗样激酶-1(Polo-Like Kinase 1,PLK1)蛋白表达与中心体扩增之间的相关性。方法:采用免疫组化SABC法检测10例正常口腔黏膜和47例OSCC中PLK1蛋白和γ-微管蛋白的表达情况,并分析两者之间的相关性。结果:PLK1蛋白和γ-微管蛋白在正常口腔黏膜组和OSCC组中的阳性表达率分别为0.0%(0/10)、70.2%(33/47)和0.0%(0/10)、76.6%(36/47),PLK1蛋白和γ-微管蛋白表达在正常口腔黏膜组和OSCC组之间的差异均具有统计学意义,P<0.05;Spearman相关分析显示,OSCC组织中PLK1蛋白与γ-微管蛋白表达之间正相关,r=0.305,P<0.05。结论:PLK1蛋白过表达可能是中心体扩增的潜在机制之一,PLK1蛋白过表达导致中心体扩增及细胞恶性增殖在OSCC发生中可能起一定的作用。

风湿性心脏病患者瓣膜组织中微管相关蛋白轻链3-Ⅱ和骨唾液蛋白与胶原容积分数的相关性

目的探讨风湿性心脏病(RHD)患者瓣膜组织中微管相关蛋白轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)和骨唾液蛋白(BSP)与胶原容积分数(CVF)的相关性及发病危险因素。方法选取行手术切除的二尖瓣瓣膜患者260例,其中RHD患者188例(RHD组),非RHD患者72例(非RHD组)。采用Western blot法检测瓣膜组织中LC3-Ⅱ和BSP水平,采用Masson法进行胶原纤维染色,并检测CVF。比较2组LC3-Ⅱ、BSP、CVF水平,采用Pearson相关分析LC3-Ⅱ、BSP与CVF的相关性,用ROC曲线分析LC3-Ⅱ和BSP对RHD的诊断价值,采用logistic回归分析发生RHD的独立危险因素。结果 RHD组LC3-Ⅱ、BSP、CVF水平明显高于非RHD组,差异有统计学意义(P<0.01)。Pearson相关性分析显示,LC3-Ⅱ、BSP与CVF呈正相关(r=0.642,r=0.607,P<0.01)。ROC曲线分析显示,LC3-Ⅱ诊断RHD的曲线下面积为0.738(95%CI:0.694~0.787),截断值为0.55。BSP诊断RHD的曲线下面积为0.759(95%CI:0.708~0.803),截断值为0.86。LC3-Ⅱ和BSP联合诊断RHD的曲线下面积为0.841(95%CI:0.796~0.885),敏感性、特异性分别为94.68%和76.39%。logistic回归分析显示,LC3-Ⅱ、BSP、高血压、年龄以及地区均是发生RHD的影响因素(P<0.05,P<0.01)。结论 RHD患者瓣膜组织中LC3-Ⅱ和BSP均呈高表达,与CVF相关,是RHD发生的独立危险因素,LC3-Ⅱ和BSP联合检测具有较高的诊断效能。

胍丁胺对吗啡耐受小鼠蓝斑核组织中μ-阿片受体和自噬相关蛋白的作用机制

目的探讨胍丁胺(AG)对吗啡(Mor)耐受小鼠蓝斑核(LC)组织中μ-阿片受体(MOR)和自噬相关蛋白的作用机制。方法40只成年健康雄性C57BL/6J小鼠随机分为生理盐水(NS)组、Mor组、AG-Mor组及AG组,皮下注射给药法建立小鼠慢性Mor耐受模型,采用温水甩尾法测定各组小鼠给药前及给药第1~7天的甩尾潜伏期(TFL);造模结束后麻醉处死小鼠、取脑组织,采用免疫荧光法、Western blot及荧光定量聚合酶链式反应(q-PCR)检测各组小鼠LC组织中MOR的表达,采用Western blot法检测各组小鼠LC组织中自噬蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)、家蚕隔离体蛋白1(P62)的表达。结果与Mor组比较,AG-Mor组小鼠TFL下降趋势较缓慢,差异有统计学意义(P<0.05);与Mor组比较,AG-Mor组小鼠LC组织中MOR蛋白表达水平升高、P62含量明显下降,差异有统计学意义(P<0.05);与NS组比较,Mor组小鼠LC组织中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值与P62含量均出现不同程度的升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论AG抗Mor耐受形成的机制可能与增加Mor耐受小鼠LC组织中MOR蛋白表达量、降低P62含量有关。

宫颈永生化细胞和癌细胞的α、β、γ–微管蛋白比较分析

目的:探讨中心体α、β、γ–微管蛋白在人鳞状上皮宫颈永生化细胞(H8细胞株)和癌细胞(Caski细胞株)的表达差异及其在宫颈癌发生发展过程中的作用。方法:采用免疫细胞化学SP法检测中心体α、β–微管蛋白在人宫颈永生化细胞和癌细胞中的表达差异,提取两株细胞的骨架蛋白并用Western blotting对α、β、γ–微管蛋白的表达水平进行半定量分析。结果:Caski细胞中α、β–微管蛋白表达水平高于H8细胞,差异均有统计学意义(P<0.05)。半定量分析α、β、γ–微管蛋白,Caski细胞中的表达量高于H8细胞。结论:中心体异常可能是宫颈癌细胞恶性表型的特征之一,以中心体微管蛋白为治疗靶点的研究有着可期待的前景。

中心体α-微管蛋白、γ-微管蛋白在脑胶质瘤中的表达及其与Survivin表达的相关性研究

目的探讨中心体α-微管蛋白和弘微管蛋白在脑胶质瘤中的表达，及其与凋亡抑制基因Survivin表达的相关性。方法应用免疫组织化学方法检测51例脑胶质瘤组织中廿微管蛋白、Survivin蛋白的表达，免疫荧光染色方法检测α-微管蛋白的表达，并分析其之间的相关性。结果脑胶质瘤高级别组（Ⅲ～Ⅳ级）α-微管蛋白、γ-微管蛋白及Survivin蛋白表达阳性率（88．0％、80．0％、92．0％）明显高于低级别组（Ⅰ、Ⅱ级）（22．2％、47．1％；11．1％、35．3％；33．3％、52．9％），且差异具有统计学意义（P均〈0．0125）。α-微管蛋白、γ-微管蛋白与Survivin表达之间均呈正相关（r分别为0．4404、0．5478，P〈0．05）。结论α-微管蛋白、γ-微管蛋白和Survivin在胶质瘤中的表达随恶性程度升高而增加，且相互之间均呈正相关。微管蛋白与Survivin的相互作用可能是胶质瘤发生发展过程中的重要事件。

中心体α、γ-微管蛋白在乳腺癌前病变及乳腺癌中的表达及其意义初探

目的探讨中心体α-微管蛋白和γ-微管蛋白在人乳腺癌前病变和乳腺癌中的表达及其在乳腺癌发生发展过程中的作用。方法采用免疫组织化学S-P法检测乳腺导管上皮不典型增生、乳腺导管内癌和浸润性导管癌各40例中中心体α-微管蛋白和γ-微管蛋白表达水平,30例正常乳腺组织作为对照组,并用W estern印迹进行验证。所得数据经统计学分析并结合随访情况进行评价。结果不同样本组α-微管蛋白、γ-微管蛋白表达水平不同(P=0.000),随正常上皮组织到出现不典型增生至进展为原位癌和浸润性癌的发展变化,α-微管蛋白、γ-微管蛋白表达量呈增高趋势,以浸润性癌为最高(40例中分别有14例、11例表达为+++),各组间差异均有统计学意义(P=0.001)。比较同例和同组α、γ-微管蛋白的表达程度差异无统计学意义(P>0.05)。癌前病变、导管内癌、浸润性导管癌组α、γ-微管蛋白的表达水平与预后具有相关性。结论中心体异常为乳腺癌细胞恶性表型的明显特征之一,并可能为乳腺癌形成过程中的早期事件。α、γ-微管蛋白的表达情况可为乳腺癌发生机制探讨、高危病例筛选及估测预后提供一种新的途径。

骨髓间充质干细胞向神经细胞定向分化的体外研究

目的 探讨骨髓间充质干细胞( marrow stromal stem cells,MSCs)向神经细胞定向分化中神经蛋白分子的表达情况。 方法 取第5～7代体外培养Wistar大鼠MSCs,以0 .5μmol/ L全反式视黄酸( all- trans retinoidacid,ATRA)预诱导2 4 h后,换用改良神经细胞培养基( modified neuronal medium,MNM)继续培养。在ATRA作用2 4 h及MNM作用2、6、9、18及36 h,免疫组织化学检测巢蛋白( Nestin)、神经元特异性核心抗原( neuron- specificnuclear protein,Neu N)、微管相关蛋白2 ( microtubule- associated protein 2 ,MAP- 2 )和胶质纤维酸性蛋白的表达情况。 结果 ATRA和MNM作用后,MSCs呈典型神经元样,伸出较多的突起和分支,形成网络。Nestin最先表达,ATRA作用2 4 h出现,Neu N其次,MNM作用2 h检测到,MAP- 2最晚,MNM作用9h检测到。Nestin在MNM作用18h后表达最强,其阳性率为92 .3%±3.4 % ;36 h后表达明显减弱,阳性率仅为12 .3%±3.4 % ,而其它标志蛋白则持续表达。 结论 ATRA和MNM能促进MSCs向神经前体细胞和神经元转化,神经蛋白分子的表达顺序与神经细胞发育过程一致。