大型中性氨基酸对大脑发育至关重要

据Knaus LS[Cell,2023 Mar 24;S0092-8674(23)00215-5.doi:10.1016/j.cell.2023.02.037.]报道,奥地利科学技术研究所科研团队发现,一组氨基酸包括色氨酸、酪氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸在大脑发育的某些阶段发挥着关键作用。让神经元缺乏这些氨基酸导致了出生后的严重影响。

生成函数法用于中性氨基酸-铜配合物稳定常数的测定

以氢离子选择性电极作指示电极,氢氧化钠溶液作滴定剂,分别用3种生成函数法(直接计算法、分段拟合法及半整数法)测定了丝氨酸、丙氨酸、苏氨酸、脯氨酸、蛋氨酸、亮氨酸、缬氨酸及苯丙氨酸等8种中性氨基酸与铜离子所形成的配合物的条件稳定常数,测定结果与文献报道的数值相吻合。

半整数生成函数法测定中性氨基酸的稳定常数

用电位滴定法作为实验手段,半整数生成函数法作为数据处理方法,分别采用氢氧化钠溶液和盐酸溶液直接滴定、氢氧化钠溶液返滴定、盐酸溶液返滴定等3种形式,对苏氨酸、甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸及异亮氨酸8种中性氨基酸的各级条件稳定常数进行了测定,所得结果与文献值吻合。

肠上皮细胞中性氨基酸载体B^0AT1的真核表达及稳定转染体系的建立

目的:构建可表达人中性氨基酸载体B0AT1基因的真核表达载体,建立重组质粒转染的Hela细胞系,筛选出稳定表达人B0AT1的细胞株。方法:提取人正常小肠上皮细胞总RNA,采用RT-PCR方法扩增出B0AT1基因片段,EcoRⅠ和XbaⅠ双酶切后,将其插入至真核表达载体pcDNA3.1中,构建重组表达质粒pcDNA3.1-B0AT1,转化E.coliDH5α菌株感受态细胞,将阳性克隆脂质体法转染Hela细胞,经G418筛选获得稳定表达株,用RT-PCR法检测B0AT1基因的mRNA表达。结果:从小肠上皮细胞中成功克隆到人B0AT1基因。酶切和序列测定表明已成功构建真核表达载体pcDNA3.1-B0AT1,将此重组质粒转染的Hela细胞,可稳定表达人B0AT1基因,并筛选出稳定表达B0AT1的Hela细胞系。氨基酸摄取实验证实,转染pcDNA3.1-B0AT1的Hela细胞具有B0AT1基因的生物学活性。结论:重组人中性氨基酸载体B0AT1克隆成功,并在Hela细胞中获得稳定表达。

引入中性氨基酸对木聚糖酶XynZF-2热稳定性的影响

通过对黑曲霉（Aspergillus niger） XZ-3S木聚糖酶XynZF-2进行生物信息学分析,在N-端区域引入半胱氨酸,定点突变E27C,构建突变基因xyn-E27C,并在大肠杆菌BL21 （DE3）中表达.酶学性质分析发现,突变酶Xyn-E27C的最适温度为45℃,与原酶XynZF-2相比提高了5℃.在40℃条件下,突变酶Xyn-E27C的半衰期t1/2^40℃为100 min,相比原酶XynZF-2 （t1/2^45℃=55 min）提高了45 min.在45℃条件下,突变酶Xyn-E27C的半衰期t1/2^45℃为24 min,相比原酶XynZF-2（t1/2^45℃=7 min）提高了17 min;突变酶Xyn-E27C的最适pH值由5.0提高至5.5,而pH稳定范围均为5.0-9.0.因此,定点突变E27C对木聚糖酶XynZF-2的热稳定性以及最适pH值均有重要影响.

非缓冲体系中性氨基酸的离子交换平衡

研究了非缓冲体系中性氨基酸在７３２型强酸性阳离子交换树脂上的离子交换平衡，并提出了平衡模型。该理论模型考虑了氨基酸的两性弱解离性质和树脂能团的能量非均一性，可以很好地关联氨基酸与Ｈ＋的二元离子交换平衡，并且通过两个二元体系ＶＡＬ／Ｈ＋和Ｎａ＋／Ｈ＋的平衡参数成功地预测了三元体系ＶＡＬ／Ｎａ＋／Ｈ＋的平衡关系，表明该模型可以描述非缓冲体系中性氨基酸的多元离子交换平衡。

配位体交换树脂对中性氨基酸分离性能的研究

采用配位体交换树脂对中性氨基酸(Gly,Ala,Val和Leu)进行了分离,并与一般阳离子交换树脂的分离性能进行了比较,对淋洗剂、柱温等分离条件进行了实验;研究了树脂载体结构、功能基及配位中心离子对分离性能的影响。

中性氨基酸水溶液PH值等于其PI的浓度条件及原因

在讨论浓度与中性氨基酸水溶液PH值之间关系的基础上,得出要使PH=PI,必须满足C(R±)>10^(1.70)×Ka_1这一浓度条件,根据甘氨酸不同C(R±)时PH值、[R^-]、[R^+]等的计算结果,解释了调节浓度可实现中性氨基酸水溶液PH=PI的原因。

钠离子依赖性中性氨基酸转运载体2特性、表达调控及功能

转运系统A载体——钠离子依赖性的中性氨基酸转运载体2(SNAT2)是近年发现的氨基酸转运感受体的典型代表,是体内主要的氮转运载体。SNAT2通过转运过程调节细胞内氨基酸浓度,进而调控细胞内氨基酸感受体的下游信号,发挥氨基酸转运载体和信号受体的双重功能,而成为近年氨基酸营养感应的研究热点。本文围绕SNAT2的分子特性、生物学特性、表达调控及其介导的氨基酸感应信号的研究进展进行综述。

钠离子依赖的中性氨基酸转运蛋白SNAT2-HA融合蛋白的构建及鉴定

钠离子依赖的中性氨基酸转运蛋白SNAT2在哺乳动物组织中广泛表达,具有转运中性氨基酸的功能,在谷氨酸-谷氨酰胺循环、肝脏糖质新生等生物通路中发挥重要作用.为了方便测定SNAT2在细胞膜上的表达和定位,本研究采用PCR扩增和酶切连接将HA标签蛋白与SNAT2的C末端连接,构建了真核生物表达载体pBK-CMVΔ(1098-1300)-SNAT2-HA表达载体.用脂质体转染法将该表达载体瞬时转染到HEK293T细胞中,通过Western blot法检测到SNAT2-HA融合蛋白在细胞膜上的正确表达和定位.pBK-CMVΔ(1098-1300)-SNAT2-HA表达载体的成功构建,为今后对SNAT2的结构和功能的研究提供了有效方法.

N-氨甲酰谷氨酸、脯氨酸及腐胺对仔猪空肠和回肠Na^(+)依赖性中性氨基酸转运载体2表达及营养感应信号的调控作用

本研究旨在探讨Na^(+)依赖性中性氨基酸转运载体2(SNAT2)介导多胺及其前体物质对仔猪肠黏膜营养感应信号的调控作用。试验选取32头哺乳仔猪,随机分为4组,每组8头猪,自出生当日开始,每日2次分别灌服生理盐水(对照组)、腐胺(5 mg/kg BW)、脯氨酸(25 mg/kg BW)和N-氨甲酰谷氨酸(NCG,8 mg/kg BW)。14日龄断奶,断奶第3天采血后屠宰,采集空肠和回肠样品。结果表明:与对照组相比,灌服腐胺、脯氨酸和NCG显著提高仔猪平均日增重(P<0.05);灌服腐胺和NCG显著提高空肠和回肠黏膜SNAT2的蛋白表达水平(P<0.05);灌服脯氨酸和NCG显著提高了空肠黏膜氨基酸转运感应相关基因[质子耦合氨基酸转运蛋白1(PAT1)、钙感应受体(CasR)、磷脂酶Cβ2(PLCβ2)和味觉受体1家族成员3(T1R3)]的mRNA相对表达量(P<0.05),NCG还显著上调哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路相关基因[促分裂原活化蛋白激酶3(MAP4K3)和mTOR]的mRNA相对表达量(P<0.05);灌服NCG显著提高了血清中胆囊收缩素(CCK)含量(P<0.05)及空肠黏膜CCK受体mRNA相对表达量(P<0.05)。综上所述,NCG可通过上调仔猪肠道氨基酸转运载体相关基因的表达,调节氨基酸感应途径信号分子的释放和基因表达。

大鼠中性氨基酸转运蛋白SNAT1-HA融合蛋白的构建和表达(英文)

Na+偶联的中性氨基酸转运蛋白SNAT1是一种膜蛋白,属于转运蛋白第38家族(SLC38),在中枢神经系统(CNS)中起到重要的生理学作用.为了更容易地检测SNAT1在细胞膜上的表达,以pBK-CMVΔ-SNAT1为模板,用PCR,双酶切和T4连接酶连接的方法在SNAT1的C端加上了一个HA标签蛋白,构建了一个新质粒pBK-CMVΔ-SNAT1-HA.用该质粒瞬时转染人胚胎肾细胞(HEK293T),转染36 h以后,融合蛋白SNAT1-HA可以用HA抗体检测.Western blot结果显示在约54 kDa处有一条特异性条带,与预期分子量大小一致.利用重组质粒pBK-CMVΔ-SNAT1-HA可以更方便地检测到SNAT1在细胞膜上的表达与定位,为进一步研究SNAT1结构与功能奠定了基础.

钠离子依赖的中性氨基酸转运蛋白2(SNAT2)多克隆抗体的制备

钠离子依赖的中性氨基酸转运蛋白2(SNAT2)属于SLC38家族,参与小的中性氨基酸跨膜转运,在哺乳动物组织中广泛表达.SNAT2的功能紊乱可以导致许多神经性疾病,如阿尔茨海默症、帕金森症等.采用PCR方法扩增得到SNAT2氨基端75个氨基酸的编码序列,构建重组质粒pET28a-SNAT2-75aa,并将其转入大肠杆菌BL21(DE3)中,通过IPTG诱导表达重组蛋白.利用组氨酸标签蛋白经镍柱亲和纯化后得到了纯度在95%以上的SNAT2氨基端蛋白SNAT2-75aa,将其作为免疫原免疫新西兰大白兔,从而获得SNAT2多克隆抗体.采用巯丙基琼脂糖凝胶6B(Thiopropyl sepharose)固定抗原亲和纯化法进一步对该抗体进行纯化,纯化后的抗体效价至少提高10倍.蛋白免疫印迹确定该抗体对SNAT2具有高度的特异性,表明SNAT2多克隆抗体制备的成功,为进一步研究SNAT2蛋白的结构和功能奠定了生化基础.

大鼠中性氨基酸转运蛋白HA-SNAT3融合蛋白的构建和鉴定(英文)

钠离子依赖的中性氨基酸转运蛋白SNAT3是SLC38基因家族N系统的成员之一,主要在脑部和视网膜的星形胶质细胞中表达,负责转运谷氨酰胺,在脑部和肝脏的谷氨酸-谷氨酰胺循环中发挥重要作用.为了方便检测SNAT3在细胞膜上的表达和定位,本研究采用PCR扩增和酶切连接的方法将HA标签连接到质粒pBK-CMVΔ(1098-1300)-SNAT3中大鼠SNAT3的N端,构建了真核生物表达载体pBK-CMVΔ-SNAT3.用脂质体转染法将该表达载体瞬时转染进人胚肾细胞(HEK293T cells),通过Western blotting检测HA-SNAT3融合蛋白的表达.结果表明,HA-SNAT3能够正确在细胞膜上表达.pBK-CMVΔ-SNAT3表达载体的成功构建对于进一步研究SNAT3的结构和功能提供了有效方法.

硅酸盐色谱分离中性氨基酸性能研究

将硅酸钠与硫酸铜或硫酸锌按等体积混合 ,制得新型无机离子交换剂硅酸铜、硅酸锌 ,分别用其作为色谱载体对中性氨基酸 (甘氨酸 ,丙氨酸 )进行分离 ,与强酸性阳离子交换树脂 0 0 1× 7的色谱行为作了比较。结果表明 ,合成的硅酸盐具有较好的分离性能。通过不同载体分离中性氨基酸 (甘氨酸 ,丙氨酸 )的流出体积的比较 ,硅酸铜的流出体积大于硅酸锌 ,硅酸锌的流出体积大于 0 0 1× 7。结果显示 ,硅酸铜比硅酸锌更适合于分离中性氨基酸 。

硅酸锌的制备及对中性氨基酸色谱分离的影响

合成了一种新型无机离子交换剂———硅酸锌 ,对其化学稳定性进行了测定 .该合成工艺条件温和 ,反应过程简单 .用硅酸锌进行中性氨基酸 (Gly ,Ala)的分离 ,显示出较好的选择性 .

钠离子依赖的中性氨基酸转运蛋白SNAT2的研究进展

钠离子依赖的中性氨基酸转运蛋白2(sodium-coupled neutral amino acid transporter 2,SNAT2)是SLC38基因编码家族中转运系统A(SystemA)的重要成员。SNAT2广泛表达于哺乳动物各组织中。其表达受高渗、pH值、激素、炎症因子等因素的影响。SNAT2可以通过改变细胞内氨基酸的水平来调控哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1(mammalian target of rapamycin complex 1,mTORC1)的下游通路,从而影响细胞蛋白质合成。SNAT2在肥胖、糖尿病、关节炎、癌症等多种病理生理过程中发挥着重要的作用。本文对SNAT2的研究进展进行综述。

中性氨基酸在药品、食品和化妆品方面新用途的开发

特开昭54—89027有机磷系除草剂以α—氨基磷酰烷酸为有效成分,对禾本科杂草显示强烈除草活性,对蕃茄,黄爪等菜类不产生药害的茎叶处理型选择性除草剂。式(n为0,1,2)之α—氨基磷酰烷酸,例如以α—氨基磷酰醋酸为有效成分,作为有选择性茎叶处理型除草剂。

几种中性氨基酸的离子交换行为

在实际工作中,应用离子交换层析业已建立起用离子交换分离氨基酸的某些成功程序。其中,尤其主要的是 partidge 等人创立的用于制备氨基酸的置换展层法及 MOOrs 和 Stein提出的用于分析氨基酸的具有高度分离能力的洗脱分析法。然而,氨基酸在离子交换树脂上的交换行为只有少数的基本究研。这是一个有趣的问题,基氨酸如同弱的两性电解质一样。显示出与离子交换反应有关的某些特殊行为。本文仅从实验结果来讨论几种中性氨基酸的离子交换行为,着重讨论 pH 对离子交换反应的影响。并进行一些综合性的评论。下一篇论文将讨论酸碱性氨基酸在离子交换树脂上的行为。

中性氨基酸对帕金森病发生干预的实验研究

目的探讨中性氨基酸干预帕金森病发生的作用机制。方法分别在应用百草枯建立的帕金森病小鼠模型的前后腹腔注射中性的左旋缬氨酸(L-Val)、左旋苯丙氨酸(L-Phe)、右旋缬氨酸(D-Val)及碱性的左旋赖氨酸(L-Lys),采用免疫组化、Western 印迹法观察小鼠脑黑质部位百草枯沉积以及多巴胺能神经元变性和α-突触核蛋白(α-Syn)聚集的改变。结果在应用百草枯之前注射 L-Val、L-Phe,小鼠脑黑质部位百草枯染色明显减弱,多巴胺能神经元变性及α-Syn 聚集均明显减少;而在应用百草枯之后注射,则变化不明显。以同样方式注射 D-Val 及 L-Lys,多巴胺能神经元变性及α-Syn 聚集改变也不明显。结论 L-Val、L-Phe 等左旋中性氨基酸具有竞争性抑制百草枯进入中枢神经系统的作用,并且具有结构特异性,对帕金森病的发生可以起到预防性保护作用。