中性白细胞抑制因子在大肠杆菌中的表达与纯化

利用PCR技术扩增编码钩虫中性白细胞抑制因子(NIF)成熟肽的cDNA,克隆于表达载体pET-21a(+),序列分析表明与文献报道一致。经IPTG诱导,在大肠杆菌BL21(DE3)plys中实现高效可溶性表达。SDS-PAGE分析结果表明,外源蛋白(相对分子质量28900)约占全菌蛋白的20%。菌体用溶菌酶处理,上清经Q-SepharoseFF阴离子交换、羟基磷灰石层析、SephacrylS-100凝胶过滤,得到纯度约95%的重组NIF。活性测定结果表明,大肠杆菌表达的重组NIF能有效地抑制中性白细胞粘附。这些结果为利用大肠杆菌制备重组NIF奠定了基础。