溶酶体膜蛋白-2抗体诱导中性粒细胞胞外捕网形成的实验研究

目的研究溶酶体膜蛋白-2抗体(LAMP-2-antibody)诱导中性粒细胞胞外捕网形成(NETosis)的作用,为进一步探讨这种新型细胞死亡模式在系统性小血管炎中的作用及机制奠定基础。方法采用PolymorphprepTM进行密度梯度离心法分离健康志愿者外周静脉血中性粒细胞,抗LAMP-2抗体刺激中性粒细胞,以及通过NADPH氧化酶抑制剂二甲苯基碘(DPI)阻断活性氧簇的产生,电镜、免疫荧光观测胞外捕网的形成,激光共聚焦检测自身抗原LAMP-2、PR3、MPO的表达。结果 LAMP-2抗体促进中性粒细胞胞外捕网NETs形成,自身抗原MPO、PR3及LAMP-2包含在NETs内,抑制NADPH氧化酶的活性可以阻断NETs形成。结论 LAMP-2抗体可能通过诱导中性粒细胞异常死亡,释放内源性危险信号,激活自身免疫反应等来维持血管炎的恶性持续状态。

分子伴侣性自噬参与LAMP-2抗体诱导中性粒细胞胞外捕网形成

目的探讨分子伴侣性自噬在LAMP-2抗体诱导中性粒细胞胞外捕网(NETs)形成的作用及机制。方法采用PolymorphprepTM方法分离健康志愿者和抗中性粒细胞胞浆抗体相关性血管炎(AAV)患者外周静脉血中的中性粒细胞,直接离体或LAMP-2抗体刺激健康人外周血中性粒细胞,通过自噬阻断剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)和放线菌酮(CHX)进行干预,免疫荧光观测NETs的形成,免疫荧光法和免疫印迹法检测分子伴侣自噬相关蛋白LAMP-2A、Hsc70的表达。结果与正常中性粒细胞组相比,AAV患者中性粒细胞LAMP-2A表达增加(P=0.002 3);LAMP-2抗体可诱导中性粒细胞LAMP-2A、Hsc70蛋白表达明显上调(P<0.01),CHX能明显降低LAMP-2抗体引起的LAMP-2A、Hsc70蛋白表达(P<0.000 1);与3-MA组相比,CHX组能明显减少LAMP-2抗体诱导的NETs形成(P<0.000 1)。结论 LAMP-2抗体可诱导人中性粒细胞分子伴侣性自噬增强及NETs形成,放线菌酮可抑制此过程,提示分子伴侣性自噬可能参与了NETs的形成。

中性粒细胞胞外捕网、血小板和肿瘤的关系

血小板除了在止血中发挥重要作用以外,还会参与炎症的发生和肿瘤的进展等病理生理过程。肿瘤微环境中促凝血因子的异常表达或暴露可诱导血小板活化,进而导致血小板释放生长因子。由于肿瘤诱导的血小板活化,癌症患者通常会出现不同程度的静脉血栓。而中性粒细胞胞外捕网(NETs)的形成可能是导致癌症相关血栓形成的新因素。细胞核或线粒体来源的DNA外显化之后,与组蛋白和颗粒蛋白酶[如中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)和过氧化物酶(MPO)]结合形成NETs。NETs有助于中性粒细胞捕获和杀死病原体,如细菌、病毒和真菌。本文将重点介绍在感染和无菌条件下,我们目前对血小板作为NETs形成调节因子作用的认识。

中性粒细胞胞外捕网在痛风性关节炎中的作用机制

急性痛风性关节炎是痛风最常见的首发症状，早期常可于短时间内自行缓解，随着病程进展，发作频率逐渐增加，持续时间逐渐延长，直至无法自行缓解，并伴发痛风石的形成，其具体机制尚未阐明。近年有研究发现，中性粒细胞胞外捕网可以激活免疫系统，同时聚集中性粒细胞胞外捕网可能通过降低细胞因子和趋化因子水平，缓解痛风急性期炎性反应，并且可与尿酸盐结晶紧密结合，参与痛风石的形成。

硫化氢抑制中性粒细胞胞外捕网形成的研究进展

硫化氢(hydrogen sulfide,H_(2)S)在抑制中性粒细胞胞外捕网(neutrophil extracellular traps,NETs)的形成中发挥重要的生理作用。H_(2)S通过多种途径抑制NETs的形成,包括抑制血小板活化介导的NETs产生,上调miR-16-5P抑制其目标基因磷酸肌醇-3-激酶调节亚基1(phosphoinositide-3-kinase regulatory subunit 1,PIK3R1)和RAF1的表达,抑制丝裂原活化蛋白激酶家族(mitogen-activated protein kinases,MAPKs)细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)途径,减少活性氧(reactive oxygen species,ROS)及呼吸爆发,降低自噬和细胞内钙离子水平等。文章就硫化氢类药物及其衍生制品的研发和应用、NETs相关疾病的临床防治进行了综述。

ANCA诱导中性粒细胞释放正五聚素蛋白3

目的:研究正五聚素蛋白3(PTX3)在中性粒细胞的表达及释放情况,为进一步探讨PTX3在抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)相关性小血管炎(AAV)中的作用及机制奠定基础。方法:采用PolymorphprepTM进行密度梯度离心分离健康志愿者和AAV患者外周静脉血中性粒细胞,通过健康人血清、AAV患者血清、TNF-α和溶酶体膜蛋白2(LAMP-2)抗体分别刺激健康人外周血中性粒细胞,ELISA检测培养上清PTX3水平,免疫荧光观察中性粒细胞胞外捕网(NETs)的形成,激光共聚焦显微镜检测可溶性识别受体PTX3的表达。结果:LAMP-2抗体及AAV患者血清均能促进中性粒细胞PTX3的释放。与正常中性粒细胞对照组相比,LAMP-2抗体刺激组中性粒细胞上清PTX3水平明显升高(P<0.01);AAV患者血清刺激组中性粒细胞中PTX3表达的荧光强度显著高于用健康人血清刺激的对照组(P<0.01),进一步通过激光共聚焦显微镜进行形态学观察,发现PTX3由中性粒细胞通过NETs形成释放。结论:PTX3可由ANCA诱导的NETs释放至胞外,参与血管炎的病理生理过程。

琼脂糖明胶皮下埋植法富集、分离具有自发NETs倾向的小鼠中性粒细胞

目的建立小鼠中性粒细胞富集、分离的方法,为进一步探讨中性粒细胞及中性粒细胞胞外捕网（NETs）的免疫损伤效应奠定基础。方法制备2%琼脂糖0.2%明胶块,埋植于健康6-8周龄C57雌性小鼠皮下富集中性粒细胞,96 h后取出明胶块置于PBS中进行游离释放,收集细胞。荧光染色进行细胞形态学观察,采用Gr-1及CD11b进行流式细胞分析鉴定。结果不同表面积的明胶能够分离出106-107数量级细胞,具有中性粒细胞典型的分叶核形态学特征,流式细胞分析鉴定为Gr-1＋CD11b＋的中性粒细胞,纯度可达95.7%,并观察到典型NETs形成,其数量随分离时间的延长而增加。结论通过皮下埋植琼脂糖明胶成功富集、分离大量高纯度且具有自发NETs倾向小鼠中性粒细胞。

双硫仑在炎症相关疾病中作用的研究进展

双硫仑作为FDA批准的戒酒药在临床上被广泛使用。双硫仑主要通过抑制NLRP3炎症小体活化、Gasdermin D蛋白膜孔形成、中性粒细胞胞外捕网的形成及释放、抑制核转录因子κB激活等机制,抑制炎症反应并改善炎性相关疾病。此外,双硫仑与其他药物联合使用可提升其抗炎作用。现对双硫仑抗炎作用的分子机制及其在炎性疾病中的作用进行综述,以期为双硫仑作为抗炎药物的应用提供参考。