中性粒细胞蛋白酶抑制剂elafin在毕赤酵母中的表达及活性检测

中性粒细胞蛋白酶抑制剂elafin是中性粒细胞弹性蛋白酶特异性抑制剂。为建立中性粒细胞蛋白酶抑制剂elafin毕赤酵母表达系统,通过逆转录PCR扩增获取elafincDNA,双酶切后定向克隆至穿梭质粒pPIC9K上。SalI酶切线性化后,电穿孔法转至毕赤酵母GS115菌株中,PCR筛选出阳性克隆,接种至最小甘油缓冲培养基中,甲醇诱导表达后,取上清阳离子交换层析纯化靶标蛋白。分别以western-blot、弹力纤维蛋白-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测重组elafin免疫原性、抗蛋白酶活性。重组elafin在毕赤酵母系统中呈分泌性表达,产量及活性高,分离纯化简便。此表达系统的建立为其后续研究及临床应用奠定了基础。

哮喘大鼠中性粒细胞基质金属蛋白酶9和血清基质金属蛋白酶抑制剂-1的表达及地塞米松对其的影响

目的:观察基质金属蛋白酶9(MMP-9)在哮喘大鼠血中性粒细胞(PMN)中的表达及地塞米松对其的影响,探讨血PMN中MMP-9和基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)的相关性。方法:采用哮喘大鼠模型,随机分成哮喘组、正常对照组、地塞米松治疗组,对血PMN进行分离纯化,免疫细胞化学法检测MMP-9的表达水平,ELISA法检测血清TIMP-1的蛋白浓度。结果:哮喘组(0.196±0.011,OD值)和地塞米松治疗组(0.135±0.008,OD值)中MMP-9的表达水平均显著高于正常对照组(0.100±0.010,OD值)(P<0.01),地塞米松治疗组MMP-9的表达水平显著低于哮喘组(P<0.01)。哮喘组[(34.96±4.54)ng/mL]血清TIMP-1的表达水平分别显著高于正常对照组[(26.14±3.43)ng/mL]和地塞米松治疗组[(29.89±3.43)ng/mL](均P<0.01),地塞米松治疗组TIMP-1的表达水平显著高于正常对照组(P<0.05)。MMP-9与TIMP-1的表达水平呈显著正相关(n=29,r=0.741,P<0.01)。结论:PMN能合成MMP-9,且哮喘时其合成水平增加。PMN可能部分通过MMP-9起作用来参与哮喘的炎症过程,其合成功能可以被地塞米松所抑制。MMP-9及其抑制物TIMP-1共同参与哮喘的发病机制。

中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂对慢性炎症气道高分泌的干预作用

目的 了解慢性炎症气道黏液高分泌发生的分子机制。方法 利用大鼠慢支炎模型 ,对其进行中性粒细胞弹性蛋白酶 (NE)抑制剂 - Sivelestat干预后 ,采用酶联免疫吸附试验 (EL ISA)及原位杂交方法分别检测支气管肺泡灌洗液 (BAL F)中黏蛋白 (MUC)含量以及肺组织粘蛋白基因 MUC5 AC转录水平的表达。结果 Sivelestat明显降低慢性气道炎症大鼠气道黏蛋白含量 ,并从转录水平降低 MUC的分泌。结论 NE是炎症气道黏液高分泌发生的重要始动因素 。

骨化三醇通过上调中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂表达抑制角质形成细胞增殖的研究

目的:探讨骨化三醇和中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂serpin B1对人角质形成细胞株HaCaT细胞增殖的影响。方法:骨化三醇组在常规培养的HaCaT细胞中加入骨化三醇,对照组加入等量的无血清培养基,避光培养48 h后采用反复冻融法提取细胞全蛋白,采用固相p H梯度双向凝胶电泳法进行分离,并用Image Master 2D Platinum 5.0软件分析蛋白表达的差异,同时采用基质辅助激光解吸飞行时间质谱仪进行蛋白鉴定。serpin B1的表达上调通过反转录聚合酶链式反应法和Western-blotting法予以验证。通过RNA干扰实验、噻唑蓝实验和流式细胞法分析serpin B1对HaCaT细胞增殖的影响。结果:骨化三醇组的serpin B1表达上调。骨化三醇在1×10^(-9)~1×10^(-6) mol/L浓度时能抑制HaCaT细胞增殖。干扰serpin B1可促进HaCaT细胞增殖,且使骨化三醇的抑制作用消失。结论:骨化三醇可上调HaCaT细胞中的serpin B1表达,这可能在骨化三醇抑制HaCaT细胞增殖的过程中起着重要作用。

人中性粒细胞弹性蛋白酶及其抑制剂的研究

综述人中性粒细胞弹性蛋白酶的生理和病理作用、结构特征及其体外表达研究,探讨高通量筛选抑制剂的行之有效的方法和途径,介绍若干内源性和外源性人中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂的特性和开发状况。人中性粒细胞弹性蛋白酶在各种炎症疾病中起重要作用,其内源性抑制剂的缺乏会导致体内人中性粒细胞弹性蛋白酶的平衡失调,进而产生病理反应。

中性粒细胞弹性蛋白酶及弹性蛋白酶抑制剂与盆底功能障碍性疾病的关系

目的观察盆底功能障碍性疾病患者阴道前壁组织中中性粒细胞弹性蛋白酶(neutrophil elastase,NE)及弹性蛋白酶抑制剂(elafin)的表达水平。探讨其与盆底功能障碍性疾病的发生关系。方法 60例盆底功能障碍性疾病患者(绝经前26例,绝经后34例)作为观察组,40例健康体检者作为对照组,采用Western blot法检测,比较两组研究对象阴道前壁组织中NE及elafin蛋白的表达。结果观察组患者阴道前壁组织中NE及elafin蛋白表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 NE及elafin表达的异常可能与盆底功能障碍性疾病的发病有关。

联合检测血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(CystatinC)和尿中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、尿肾损伤分子-1(KIM-1)对儿童过敏性紫癜(HSP)早期肾损伤(HSPN)的诊断效能

目的:探究对儿童过敏性紫癜(HSP)早期肾损伤(HSPN)诊断时,应用血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(CystatinC)和尿中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、尿肾损伤分子-1(KIM-1)联合检测的效能,总结经验。方法:在2015年5月到2018年1月间展开本次研究,将该时间段内65例过敏性紫癜患儿作为HSP组,将65例早期肾损伤患儿作为HSPN组,并选择同时期65例健康儿童作为对照组,分别对其实施CystatinC、NGAL、KIM-1的检测,并进行联合分析和对比。结果:HSPN组、HSP组患儿的CystatinC显著高于对照组,组间差异显著(P<0.05)。HSPN组的NGAL/uCr、KIM-1/uCr则显著高于HSP组和对照组,组间差异显著(P<0.05)。三者联合诊断的敏感性则为90.76%,明显高于单一检测(P<0.05)。结论:联合检测CystatinC、NGAL、KIM-1对儿童过敏性紫癜(HSP)早期肾损伤(HSPN)的诊断效能良好。

中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂对脑出血患者术后氧化应激、炎性介质的影响

目的观察中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)抑制剂对高血压性脑出血(HICH)患者实施穿刺引流术后氧化应激和炎性介质的影响及对神经功能的保护作用。方法选择2016年1月至2017年6月收治的146例HICH患者为研究对象,根据随机数字分为观察组(75例)和对照组(71例)。对照组患者行软通道穿刺引流术后予常规临床治疗;观察组患者通过微量泵静脉注射NE抑制剂西维来司钠注射液0.20 mg/(kg·h),连续用药7 d。术前与术后3 d、7 d,检测两组患者的氧化应激指标与血清炎性因子指标;术后7 d评估神经功能缺损评分。结果术后3 d、7 d,观察组的血清丙二醛水平显著低于对照组,超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶水平均显著高于对照组。术后3 d、7 d,观察组多形核白细胞比例、肿瘤坏死因子、白介素(IL)-6、IL-8、超敏C反应蛋白均显著低于对照组(均P<0.05)。术后7 d,观察组的NIHSS评分低于对照组(8.3±2.2 vs 9.2±1.9),差异有统计学意义(P<0.05);总有效率高于对照组(88.0%vs 78.9%),但差异无统计学意义(P>0.05)。结论 HICH术后加用NE抑制剂能明显抑制机体氧化应激反应和炎性反应,有助于患者术后神经功能的改善。

中性粒细胞丝氨酸蛋白酶及其抑制剂与炎症

中性粒细胞是首先摹集到炎症部位的细胞,中性粒细胞在炎症部位释放的丝氨酸蛋白酶能参与调节炎症反应,与多种疾病的发生发展密切相关,可能成为有效的药物防治靶点。该文综述了中性粒细胞丝氨酸蛋白酶及其抑制剂对炎症的调控作用,以期为炎症性疾病的防治提供新的思路。

创伤修复中白细胞蛋白酶抑制因子和中性粒细胞趋化因子差异表达的研究

目的研究真皮间充质干细胞(dermal mesenchymal stem cells, dMSCs)参与创伤修复中白细胞蛋白酶抑制因子(secretory leukocyte protease inhibitor, SLPI)和中性粒细胞趋化因子(cytokine-induced neutrophil chemoattractant-2, CINC-2)的差异表达,并探讨其相关功能。方法采用前期建立的技术分离、纯化并扩增dMSCs,通过RT-PCR检测创伤修复时SLPI和CINC-2在dMSCs中表达,通过3H-TdR掺入实验研究SLPI和dMSCs有丝分裂的关系,利用Boyden趋化小室研究dMSCs对中性粒细胞的趋化作用。结果分离的大鼠dMSCs呈梭形,在体外显示多向分化潜能。RT-PCR提示伤口液刺激24 h后dMSCs中SLPI,CINC-2表达升高,同时检测到在全层切割伤后1 d大鼠皮肤组织中SLPI和CINC-2均为高表达,3H-TdR掺入实验提示SLPI能够促进dMSCs的有丝分裂,趋化小室实验显示dMSCs对中性粒细胞有趋化作用,加入中和抗体后趋化作用减弱。结论创伤后SLPI,CINC-2在dMSCs中表达升高,其表达升高可能同dMSCs的增殖和趋化有关。

中性粒细胞/淋巴细胞比值与免疫检查点抑制剂治疗淋巴瘤患者预后的相关性分析

目的 探讨中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)对接受免疫检查点抑制剂(ICIs)治疗淋巴瘤患者预后的影响。方法 回顾性分析本中心2018年1月至2022年6月期间接受ICIs治疗的100例淋巴瘤患者的病例资料,收集患者每一次治疗前中性粒细胞数、淋巴细胞数,计算NLR值,通过受试者工作特征曲线(ROC)得到NLR的最佳截断值(Cut-off值),以此值将患者分为两组,生存分析用Kaplan-Meier曲线和Log-rank检验,危险因素用Cox比例风险回归模型,分析NLR和各种临床特征与免疫抑制剂治疗疗效、无进展生存期(PFS)和总生存期(OS)之间的关系。结果 两组患者在疗效方面有差异(P=0.041)。低NLR组第1、2、3年累计无进展生存率分别为70.4%、69.1%、64.8%,明显高于高NLR组的52.6%、15.8%、15.8%(P=0.001);低NLR组第1、2、3年累计生存率分别为85.2%、81.5%、81.5%,高于高NLR组的78.9%、57.9%、57.9%(P=0.043)。单因素分析显示年龄、首次使用免疫治疗年龄、治疗方式、治疗前NLR为PFS预后不良的危险因素(P<0.05);Cox多因素分析发现治疗前NLR和治疗方式是PFS(P=0.005,P=0.004)的独立预后预测因素。结论 对于接受ICIs治疗的淋巴瘤患者,治疗前较低的NLR可以获得较长的PFS,低NLR的患者更能从免疫抑制剂治疗中获益,因此NLR是一个简单可行的预后评价指标。

中性粒细胞与淋巴细胞比值、C-反应蛋白与白蛋白比值对接受PD-1抑制剂治疗晚期非小细胞肺癌患者预后的预测作用

目的探讨中性粒细胞与淋巴细胞比值(Neutrophil-to-lymphocyte ratio,NLR)、C-反应蛋白与白蛋白比值(C-reactive protein-to-Albumin,CAR)对PD-1抑制剂治疗晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者预后的关系。方法收集84例接受PD-1抑制剂治疗的晚期NSCLC患者的临床资料,使用受试者工作曲线特征曲线(ROC曲线)选取最佳截断值将患者资料进行分组。采用Kaplan-Meier生存分析和Log-rank检验比较患者生存情况差异,并使用Cox比例风险模型探究接受PD-1抑制剂治疗晚期NSCLC预后的影响因素。结果NLR、CAR预测接受PD-1抑制剂治疗晚期NSCLC患者PFS曲线下面积为0.819、0.800,P<0.05。单因素分析显示,Ⅳ期、转移部位个数≥3、单药使用、PD-L1表达阴性、NLR>2.41、CAR>0.04的接受PD-1抑制剂治疗晚期NSCLC患者无疾病进展生存期(Progressives Free Survival,PFS)的较短,(P<0.05)。Cox比例风险模型显示,转移部位个数≥3、PD-L1表达阴性、NLR>2.41、CAR>0.04是缩短接受PD-1抑制剂治疗晚期NSCLC患者PFS的独立危险因素(P均<0.05)。结论NLR、CAR结合肿瘤转移部位个数及PD-L1表达对预测接受PD-1抑制剂治疗的晚期NSCLC患者的预后有一定价值,为患者是否接受免疫治疗方案的选择提供参考。。

中性粒细胞/白蛋白联合组织金属蛋白酶抑制剂-2检测对有机磷农药中毒急性肾损伤预测价值研究

目的探讨中性粒细胞/白蛋白(NPAR)联合组织金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)检测对预测有机磷农药中毒急性肾损伤的价值。方法选取自2020年1月至2022年1月南京医科大学附属淮安第一医院收治的80例有机磷农药中毒患者为研究对象,根据患者是否发生急性肾损伤分为无急性肾损伤组(n=68)与急性肾损伤组(n=12)。记录并比较两组患者性别、年龄、吸烟史、饮酒史、中毒到救治时间、服毒量、毒药类别、洗胃时间、血肌酐、NPAR及TIMP-2水平;采用多因素Logistic回归分析有机磷农药中毒患者发生急性肾损伤的危险因素;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析NPAR联合TIMP-2对有机磷农药中毒患者发生急性肾损伤的预测价值。结果多因素Logistic回归分析显示,NPAR、TIMP-2、中毒到救治时间、服毒量、血肌酐是有机磷农药中毒患者发生急性肾损伤的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线结果显示,NPAR、TIMP-2及两者联合检测预测有机磷农药中毒患者发生急性肾损伤的灵敏度分别为65.6、75.0、78.1,特异度分别为74.3、62.9、80.0,ROC曲线下面积分别为0.738、0.693、0.835。结论血清NPAR、TIMP-2是有机磷农药中毒患者发生急性肾损伤的独立危险因素,两者联合检测预测有机磷农药中毒患者发生急性肾损伤的价值较高。

中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂救治重症肺炎患者3例分析

急性呼吸窘迫综合征(ARDS)以进行性呼吸窘迫和难治性低氧血症为主要临床特征,其病理特点表现为肺血管通透性增加、肺水肿。ARDS是重症监护病房(ICU)入院和病人死亡率的主要驱动因素,虽然早期机械通气可改善愈后,但仍有较高的死亡率。对于ARDS目前有效的治疗包括机械通气、小潮气量高PEEP、俯卧位通气、振动排痰、ECMO及神经—肌肉阻滞治疗等一系列治疗措施。虽然ARDS治疗中使用方法及药物众多,但多为治疗原发病、支持对症治疗,缺少一种针对ARDS的确切有效药物。本文通过对三例重症肺炎患者救治分析希望为以后的临床治疗及研究中提供参考。

中性粒细胞外诱捕网、纤溶酶原激活抑制剂1对早产急性呼吸窘迫综合征患儿预后的影响

目的探讨中性粒细胞外诱捕网(NETs)、纤溶酶原激活抑制剂1(PAI-1)对早产急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患儿预后的影响。方法选取2020年1月至2022年12月北京市通州区妇幼保健院收治的早产ARDS患儿125例作为ARDS组,根据患儿预后将其分为预后良好组和预后不良组。比较两组血浆游离DNA(cf-DNA)、中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、PAI-1水平;分析早产ARDS患儿cf-DNA与NE、TNF-α的相关性;分析早产ARDS患儿预后不良的影响因素;cf-DNA、PAI-1对早产ARDS患儿预后不良的预测价值采用受试者操作特征曲线评估。结果125例早产ARDS患儿预后不良47例,预后良好78例。预后不良组cf-DNA、NE、TNF-α、PAI-1水平高于预后良好组(P<0.05)。早产ARDS患儿cf-DNA与NE、TNF-α呈正相关(r=0.645、0.687,P<0.05)。cf-DNA、PAI-1水平升高是早产ARDS患儿预后不良的危险因素(OR=2.188、2.303,P<0.05)。cf-DNA、PAI-1联合预测早产ARDS患儿预后不良的曲线下面积高于各指标单独预测(Z=3.272、2.229,P<0.05)。结论NETs组成成分cf-DNA、PAI-1水平升高是早产ARDS患儿预后不良的危险因素,二者联合检测对患儿的预后具有较高的预测效能。

白蛋白和中性粒细胞联合预后分级与晚期胃癌免疫检查点抑制剂治疗预后的关系

背景患者的营养状况和全身炎症与肿瘤进展存在一定相关性,因此白蛋白和中性粒细胞联合预后分级(albumin and neutrophil combined prognostic grade,ANPG)可能对使用免疫检查点抑制剂(immune checkpoint inhibitor,ICI)的晚期胃癌(advanced gastric cancer,AGC)患者预后具有一定的评估作用。目的探讨ANPG与使用免疫治疗后AGC患者的总体生存率(overall survival,OS)和无进展生存率(progression-free survival,PFS)的关联。方法纳入解放军总医院第一医学中心2014年12月-2018年11月初次接受ICI治疗的Ⅲ~Ⅳ期胃癌(gastric cancer,GC)患者共123例。低水平人血白蛋白(<35 g/L)和高水平中性粒细胞绝对值(≥4.26 g/L)被认为是ANPG的两个危险因素。根据这两个危险因素,将患者分为两组,不含有危险因素为高ANPG评分组,含有一个危险因素或者两个危险因素的为中/低ANPG评分组,同时评估两组OS和PFS的差异。结果AGC患者,中位年龄58岁,女性31例,男性92例。中/低ANPG评分组患者的OS(5.4个月vs 12.7个月,P<0.001)和PFS(3.3个月vs 4.6个月,P=0.009)均短于高ANPG评分组。Cox多因素回归分析显示,中/低ANPG评分组的死亡风险约是高ANPG评分组2.3倍(HR:2.302,95%CI:1.507~3.515,P<0.001)。中/低ANPG评分组的疾病进展风险约是高ANPG评分组1.9倍(HR:1.885,95%CI:1.284~2.767,P=0.001)。结论本研究显示ANPG是影响接受免疫治疗的AGC患者生存的独立因素。ANPG评分高组患者使用免疫治疗后OS和PFS较中/差组延长。

中性粒细胞弹性蛋白酶及弹性蛋白酶抑制物与喉癌关系的研究进展

中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)可以裂解细胞外基质,细胞外基质的降解参与喉癌的侵袭和转移,因此NE在喉癌侵袭转移等过程中可能发挥重要作用。本文旨在探讨喉癌组织与中性粒细胞弹性蛋白酶及弹性蛋白酶抑制物SLPI的关系,综述了NE与SLPI的生物学功能,期待为临床提供新的诊疗思路,抑制喉癌的侵袭转移。

分泌型白细胞蛋白酶抑制剂对急性肺损伤大鼠趋化因子fractalkine表达的影响

目的:探讨分泌型白细胞蛋白酶抑制剂(SLPI)对急性肺损伤新生大鼠肺组织中趋化因子fractalkine表达的影响。方法:利用内毒素(LPS)气管内滴入制备新生大鼠急性肺损伤的模型;设立SLPI治疗组、LPS组、生理盐水(NS)对照组。SLPI治疗组在气管内滴入LPS前预先滴入400μg SLPI。分别在6,12,24 h后取肺组织匀浆,用ELISA法分别测定各组趋化因子fractalkine蛋白水平。RT-PCR测定fractalkine的mRNA水平。结果:在各时间点,SLPI治疗组肺组织中Fractalkine蛋白水平及mRNA水平均显著低于LPS组。24 h时SLPI治疗组肺组织中fractalkine蛋白为(3 124.9±155.6)pg/ml,显著低于LPS组的(4 231.4±177.9)pg/ml和NS对照组的(4 412.4±201.5)pg/ml,F=42.8,P<0.05,差异有统计学意义。24 h时SLPI治疗组肺组织中fractalkine的mRNA相对水平为47.0±5.1,显著低于LPS组的87.3±8.2和NS对照组的81.1±9.9,F=33.2,P<0.05,差异有统计学意义。结论:SLPI能有效抑制新生大鼠急性肺损伤时肺组织中趋化因子fractalkine的表达。

COPD患者急性加重期呼吸道分泌性白细胞蛋白酶抑制剂含量调节机制研究进展

慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者稳定期呼吸道内分泌性白细胞蛋白酶抑制剂(SLPI)含量增加,急性加重期反而下降,这种现象以蛋白酶的反向调节、TGF-β1/Smads信号通路的下调、病原体多种机制参与SLPI含量的调控等假说为主,但确切机制尚未完全阐明。