BALB/c 3T3细胞中性红摄取试验预测化合物急性毒性的验证研究

目的探讨BALB/c 3T3细胞中性红摄取试验预测化合物急性毒性的可行性,为建立细胞毒性试验预测急性毒性试验平台,开展化合物急性毒性筛查提供理论依据。方法选取11种受试物,开展BALB/c 3T3中性红摄取试验,以IC50结果与急性毒性试验LD50进行线性回归,将拟合的曲线与RC模型曲线进行比较。同时,将受试物的IC50值代入RC模型方程获得急性毒性LD50的预测值,依据GHS急性毒性分级法进行分级,与急性毒性试验的LD50和分级进行比较,同时对结果进行相关性分析。结果阳性对照十二烷基硫酸钠的结果符合试验质量控制的要求。受试物拟合曲线与RC模型曲线几乎平行,11种受试物中,LD50预测值与急性经口毒性试验分级一致的有9种。BALB/c 3T3细胞中性红摄取试验IC50值与急性毒性试验LD50值存在相关性(Pearson r=0.997,P<0.01)。受试物分级结果与实际分级具有等级相关性(Spearman r=0.905,P<0.01)。结论在本试验体系下,BALB/c 3T3细胞中性红摄取试验能够较好地预测急性毒性。既可以作为化合物急性毒性的快速初筛,又可为动物试验起始剂量的选择提供依据。

应用3T3细胞中性红摄取试验预测化学物质急性毒性的探讨

目的评价3T3细胞中性红摄取试验预测急性毒性的能力,探讨其替代急性经口毒性试验的可行性。方法依据体外替代方法跨部门协调委员会(US ICCVAM)发布的3T3细胞中性红摄取试验标准操作规程检测50种化学物质的细胞毒性,将IC50结果与急性经口毒性试验的大鼠LD50值进行分析比较;IC50值代入RC预测模型获得急性毒性LD50预测值,并进行GHS急性毒性分级,将分级结果与急性经口毒性试验分级结果进行比较。结果 3T3细胞中性红摄取试验IC50值与急性经口毒性试验LD50值存在相关性(Pearson r=0.802,P<0.01);3T3细胞中性红摄取试验分级结果与急性经口毒性试验分级结果具有等级相关性(Spearman r=0.793,P<0.01;Gamma=0.909,P<0.01)和一致性(Kappa=0.545,P<0.01),两者的分级一致率为72.0%(McNemar-Bowker W=5,P=0.082)。结论 3T3细胞中性红摄取试验可较好地预测化学物质的急性毒性,是一种有效的体外快速筛查急性毒性的方法;可作为急性经口毒性试验起始剂量的参考,可望用于化学物质急性毒性分级的初步判断。

中性红摄取实验预测化学品急性毒性研究

目的评估BALB/c小鼠胚胎成纤维细胞中性红摄取(3T3 NRU)实验预测化学品急性毒性的能力及其替代经典急性经口毒性实验的可行性。方法第1阶段从细胞毒性登记库(RC)中选取11种化学品进行暴露24.0、48.0、72.0 h的3T3 NRU实验,将所得半抑制浓度(IC50)与RC中大鼠急性毒性半数致死剂量(LD50)建立回归模型。第2阶段选取15种化学品进行暴露24.0、48.0、72.0 h的3T3 NRU实验,将所得IC50值根据RC回归模型计算LD50预测值,对受试化学品进行急性毒性分级,与经口急性毒性实验LD50值的急性毒性分级结果比较。结果第1阶段实验结果显示:暴露24.0、48.0、72.0 h的3T3 NRU实验IC50值均可与RC提供的LD50建立在RC回归模型可信区间内的回归模型[暴露24.0 h组:lg(LD50)=0.470×lg(IC50)+0.582,决定系数(R2)=0.937,F=132.805,P<0.05;暴露48.0 h组:lg(LD50)=0.475×lg(IC50)+0.638,R2=0.925,F=111.107,P<0.05;暴露72.0 h组:lg(LD50)=0.480×lg(IC50)+0.639,R2=0.933,F=125.514,P<0.05],3T3 NRU实验可应用RC回归模型预测急性毒性的LD50值。第2阶段实验结果显示:暴露24.0、48.0和72.0 h的3T3 NRU实验LD50预测值与经口急性毒性实验LD50值的急性毒性分级一致率分别为60.0%(9/15)、66.7%(10/15)和60.0%(9/15);3T3 NRU实验判断急性毒性为5级的化学品,其急性经口毒性实验的分级均为5级。结论 3T3 NRU实验适合于对低毒的化学品进行检测,可用RC回归模型预测3T3 NRU实验的急性毒性LD50值;对于预测毒性分级为4级及以下者,3T3 NRU实验的LD50预测值可作为经口急性毒性实验始剂量。

3T3中性红摄取试验评价皮肤刺激性的初步研究

目的:建立BALB/c-3T3中性红摄取细胞毒性试验并初步探讨其在化妆品原料皮肤刺激毒性评价中的适用性。方法:运用22种已知皮肤刺激性的化妆品原料进行BALB/c-3T3中性红摄取细胞毒性试验,根据判断标准划分皮肤刺激性等级,并与体内试验结果进行比较,分析3T3-中性红摄取细胞毒性实验的预测能力和重现性。结果:3T3-NRU细胞毒性试验与动物实验结果比较呈现较好的等级相关性及分级一致性;三次重复试验分析结果显示体外试验结果间的差别无统计学意义(χ2=0.245,P=0.984),Spearman等级相关系数rs=0.914,P<0.001;说明3T3-NRU细胞毒性试验具有良好的可重复性和稳定性。结论:与Draize试验比较,3T3-NRU试验对参照化学物质具有较好的预测能力和重复性,作为皮肤刺激性化妆品原料评价的筛选方法可进行进一步研究。

3T3中性红试验在化妆品光毒检测中的应用

目的研究3T3成纤维细胞中性红摄取试验(3T3 NRU PT)在化妆品安全性评价中取代动物光毒性试验的可行性。方法选用20种国产特殊用途化妆品,作用丁3T3细胞后,暴露或不暴露于紫外线下,测量540 nm处经化学物质和紫外线照射联合作用细胞的吸光度,分析其平均光效应强度(MPE)、光刺激因子(PIF),细胞存活率,以判断待测物质是否具有光毒性,并与整体动物皮肤光毒性结果进行比较。结果3T3 NRU PT试验测得20种化妆品的PIF值均<5,MPE值均<0.1,按该试验阈值分类方法,均呈光毒性阴性;动物试验结果表明,未出现皮肤反应≥2分的动物,结果也均为光毒性阴性。3T3 NRU PT试验与动物光毒性结果经校正χ2检验比较,差异无统计学意义,其灵敏度、特异度、阳性预测价值、阴性预测价值均为1。结论3T3 NRU PT试验和豚鼠皮肤光毒性试验的结果一致,该方法可取代化妆品终产品的动物光毒性试验。

雷公藤红素体内与体外急性毒性试验结果的比较

[目的]研究雷公藤红素对3T3细胞的毒性作用,获得的细胞毒性结果预测急性毒性半数致死量（LD50）,并与采用小鼠上下法（UDP）和Bliss法测定的急性毒性数值进行比较。[方法]以已验证的3T3细胞中性红摄取为细胞毒性模型,以0.01-2.05 mg/L的8个浓度（剂间比为2.15）的雷公藤红素进行处理,分别于处理后48 h进行中性红摄取试验,计算半数抑制浓度（IC50）。以RC数学模型预测其全身急性毒性LD50。参考此LD50值设定起始剂量进行小鼠上下法实验。取70只ICR小鼠,雌雄各半,以3、4、5、6、7、8 mg/kg的雷公藤红素溶液和0 mg/kg[4%二甲亚砜（DMSO）氯化钠注射液]静脉给药,观察14 d,根据动物死亡率采用Bliss法计算LD50。[结果]雷公藤红素3T3细胞中性红摄取试验的IC50值为（0.119 7±0.018 7）mg/L（n=2）,决定系数R2〉0.96,预测其全身急性毒性LD50为5.375 mg/kg。上下法起始剂量设为3.3 mg/kg,测得雷公藤红素在ICR小鼠的LD50值为3.157 mg/kg,95%可信区间为3.1-5.5 mg/kg。小鼠Bliss法测定急性毒性LD50为4.899 mg/kg,95%可信区间为4.483-5.354 mg/kg。[结论]雷公藤红素的体外3T3细胞毒性预测急性毒性与体内方法所得数值一致。

影响卷烟烟气总粒相物细胞毒性测试的因素

目的建立卷烟烟气总粒相物(TPM)的中性红细胞毒性测试方法。方法采用体外培养细胞的中性红摄取试验,优化影响卷烟烟气TPM细胞毒性测试的几个因素(稀释培养液血清浓度、卷烟烟气TPM染毒时间和测试细胞)。结果高浓度的血清含量将导致卷烟烟气TPM的毒性效应被低估;染毒24 h能更好地区分不同卷烟样品TPM的细胞毒性;中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)较人肺癌细胞系A549细胞对卷烟烟气TPM的细胞毒性作用敏感。结论通过比较不同因素,选择CHO细胞作为测试细胞,使用5%胎牛血清浓度的稀释培养液对卷烟烟气TPM母液进行稀释,染毒24 h,进行中性红摄取试验。

基于U251细胞的急性毒性体外检测方法

目的建立基于人神经胶质瘤细胞系U251细胞的急性毒性体外检测方法,初步评估其预测化学品急性毒性的能力。方法体外培养U251细胞,对11种已知急性毒性的化学物质进行中性红摄取试验,获得不同浓度受试物与细胞共孵育24、48和72 h的细胞毒性(IC50)与急性毒性(LD50)的关系,并与Registry Cytotoxicity(RC)模型曲线进行比较;对21种化学品进行中性红摄取试验,根据RC模型预测急性毒性LD50值,并对其进行急性毒性分级,将分级结果与体内急性经口毒性试验分级结果进行比较。结果与U251细胞共孵育24、48和72 h的细胞毒性IC50与相应的急性毒性LD50存在相关性(R224 h=0.857,R248 h=0.895,R272 h=0.929;P<0.05),且结果回归模型在RC模型可接受区间内,本试验体系可应用RC模型预测急性毒性;21种化学品的急性毒性LD50预测值与体内急性毒性LD50值进行比较,分级一致率分别为76.2%(24 h,16/21)、66.7%(48 h,14/21)和71.4%(72 h,15/21)。结论在本试验体系下,U251细胞中性红摄取试验能够较好的预测化学品急性毒性。